Прямым микроскопированием исследуют объекты, содержащие большое количество
микроорганизмов (сусло до и после отстаивания, бродящее сусло, дрожжевую
разводку), с предварительным центрифугированием, микроскопируют
виноматериалы после обработки и фильтрации, готовую продукцию, смывные воды.
Микроскопические наблюдения можно осуществлять, рассматривая специально
приготовленные препараты как живых, так и убитых микроорганизмов.
Препарат для микроскопирования готовят на предметном стекле размером 76X26
мм и толщиной не более 1,4 мм. Покровные стекла обычно используют размером
14X14 и 18X18 мм и толщиной 0,15—0,17 мм. Все стекла тщательно очищают
кипячением их в мыльной дистиллированной воде или в 1%-ном растворе соды в
течение 10—20 мин, затем ополаскивают водой и сушат или протирают мягкой
полотняной тканью. Предметные стекла хранят сухими; покровные — в 95%-ном
спирте или в смеси спирта и эфира (1:1) в банках с притертыми пробками.
Стекла следует вынимать пинцетом. Перед использованием их необходимо
просушить фильтровальной бумагой и слегка обжечь над пламенем горелки.
Для изучения морфологии клеток микроорганизмов чаще всего используют
светлопольную микроскопию, позволяющую исследовать объекты в проходящем
свете. При микроскопировании препарата необходимо прежде всего установить
правильное освещение. Лучше пользоваться рассеянным дневным светом, а при
недостаточности его — осветительными лампами. Независимо от устройства
источника света необходимо установить зеркало микроскопа так, чтобы свет от
источника был направлен в конденсор микроскопа. Конденсор поднимают до
упора. Сняв с микроскопа окуляр и глядя прямо в объектив, устанавливают
зеркало таким образом, чтобы источник света был виден посредине объектива.
Регулировка интенсивности освещения объекта достигается поворотом зеркала и
раскрытием или суживанием ирис-диафрагмы. Готовый препарат кладут на
предметный столик и укрепляют зажимами. Глядя сбоку, опускают объектив почти
до соприкосновения с покровным стеклом. Затем макровинтом поднимают тубус до
появления изображения. Пользуясь микровинтом, получают четкое изображение.
При микроскопировании раздавленной капли лучше пользоваться объективом 40X и
окуляром 10Х или 15Х.
При микроскопировании с иммерсионной системой очень осторожно погружают
объектив 90X в масло почти до соприкосновения с поверхностью стекла и затем
медленно при помощи макровинта поднимают до появления в поле зрения объекта.
Дальнейшую фокусировку производят микрометрическим винтом.
После работы с иммерсией следует немедленно привести в порядок объектив 90X
— снять кедровое масло чистой тряпочкой или тряпочкой, смоченной бензином.
Ксилол употреблять не рекомендуется, так как он растворяет канадский
бальзам, которым прикреплены линзы к оправе.
Для повышения контрастности слабоконтрастных объектов исследования применяют
способ микроскопирования в темном поле. Этот способ основан на освещении
объекта косыми лучами света при использовании специального конденсора
темного поля, который вставляют вместо обычного. При темнопольной
микроскопии необходим более мощный источник света, чем для микроскопии в
светлом поле, поэтому особое значение приобретает правильная установка
света, максимальное его использование и тщательная центрировка [140].
Предметные стекла должны быть не толще 1,2 мм, чистыми. При наблюдении
микроорганизмов в темном поле различают яркие объекты (только их контуры) на
интенсивно темном поле.
Для изучения препаратов слабоконтрастных живых микроорганизмов (клетки мало
отличаются по окраске и прозрачности от окружающей среды) применяют
фазово-контрастную микроскопию. Для микроскопирования этим способом
используют кроме обычного биологического микроскопа фазово-контрастное
устройство, в комплект которого входит вспомогательный микроскоп,
специальные фазовые объективы и конденсор с набором кольцевых диафрагм;
кроме того, необходима сильная осветительная лампа. Методика и порядок
работы с фазово-контрастным устройством описаны в специальных руководствах
[140].
Клетки микроорганизмов способны в большей или меньшей степени светиться
(люминесцировать, флуоресцировать) под влиянием падающего на них света.
Большинство микроорганизмов обладает слабой собственной, или первичной,
люминесценцией. При обработке препаратов специальными красками (флуо-рохромами)
клетки микроорганизмов приобретают наведенную, или вторичную, флуоресценцию.
Флуоресценцию клеток наблюдают в люминесцентном микроскопе в проходящем и
падающем свете, часто в сочетании с фазово-контрастным устройством [25].
Для электронной микроскопии используют сложный электронный микроскоп,
полезное увеличение которого достигает 20— 50 тыс. раз. При последующем
оптическом увеличении в 5—6 раз можно получить полезное увеличение до
200—300 тыс. раз. Разрешающая способность современных электронных
микроскопов составляет 1,5—1,0 и даже 0,5 нм. Электронная микроскопия
позволяет исследовать микроорганизмы только в фиксированном состоянии.