содержание   ..  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  60  ..

ГЛАВА V    ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕХНИКИ
Сусло, соки и вина являются благоприятной средой для развития как полезных микроорганизмов, на биохимической деятельности которых основана технология вин, так и вредных, вызывающих нежелательные изменения вина, его порчу (болезни вин). Следовательно, весь цикл приготовления вина характеризуется определенной направленностью микробиологических процессов, начиная с брожения и кончая розливом вина в бутылки. Поэтому освоение методов своевременного определения принадлежности микроорганизмов к той или иной группе даст возможность рекомендовать меры по устранению деятельности вредных для виноделия микроорганизмов и созданию благоприятных условий для развития и жизнедеятельности полезных.

ПОДГОТОВКА ПОСУДЫ ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Обработка посуды. Для микробиологических работ применяют посуду из специального стекла, выдерживающего нагревание при высокой температуре.

Пробирки, чашки Петри, не бывшие в употреблении, промывают подкисленной (1—2% НСL) водой, так как при нагревании новое стекло выделяет много щелочи и может изменить реакцию питательной среды.

Посуду моют в проточной теплой воде ершами с использованием кальцинированной соды, полужидкого мыла, мыльного раствора и синтетических моющих средств, после чего тщательно ополаскивают водопроводной, а затем дистиллированной водой. Сильно загрязненную посуду со следами жира обрабатывают хромовой смесью.
 

Состав хромовой смеси: в 150 мл концентрированной серной кислоты всыпают 25 г измельченного двухромовокислого калия. Через сутки, после растворения осадка, смесь темно-оранжевого цвета можно применять для мойки посуды. Перед применением смесь следует подогреть до температуры 45—60°С. Изменение темно-оранжевого цвета хромовой смеси на темно-зеленый свидетельствует о ее непригодности.
 

Пипетки и другие градуированные приборы должны быть совершенно чистыми и хорошо обезжиренными. Моют градуированные приборы в теплом растворе горчицы, мыльной воды или стирального порошка в сосудах, где они могут быть полностью погружены в раствор, ополаскивают теплой проточной водой, а  затем дистиллированной.

При ополаскивании чисто вымытой посуды вода стекает, оставляя на поверхности стекла ровную водяную пленку. Отдельные капельки воды на стенках посуды свидетельствуют о том, что она плохо обезжирена.

Вымытую посуду сушат при комнатной температуре или в сушильном шкафу при температуре 100—105°С.

Чисто, вымытую и высушенную посуду закрывают ватными пробками и хранят в местах, надежно защищенных от пыли, лучше всего в плотно закрывающемся шкафу. Ватные, пробки предохраняют посуду, питательные среды и культуры от заражения посторонними микроорганизмами (микробы оседают в волокнах ваты). Лучше употреблять для изготовления пробок гигроскопическую вату, так как она не так сильно тлеет. Ватная пробка должна легко входить в пробирки и при извлечении из них не терять своей формы. Длина пробки для обычной пробирки около 4 см. Пробка должна входить в пробирку на 1,5— 2,0 см. Удобно для работы обертывать пробку чистой марлевой салфеткой. Ватные пробки делают из пласта ваты, скручивая его руками на столе или на пинцете, или на специальной машине.
 

Стерилизация посуды. Перед стерилизацией посуду завертывают в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Бумагу удаляют непосредственно перед использованием посуды.

Пробирки завертывают в бумагу по 10—20—40 шт., закрывая верхнюю часть пробирок, чашки Петри — каждую отдельно или по 5—10 шт. в пакеты.

В концы пипеток, которые берут в рот, вставляют ватные тампоны. Пастеровские пипетки завертывают в бумагу по 3— 15 шт. Градуированные пипетки завертывают в длинные полоски бумаги шириной 4—5 см. Обмотку начинают с конца, который опускают в среду. Пипетку обматывают по спирали. Конец бумаги закручивают или приклеивают. Пипетки можно завертывать в лист бумаги по 3—5 шт. На бумаге указывают объем завернутых пипеток. При наличии пеналов пипетки стерилизуют в них.

Шпатели стерилизуют завернутыми в бумагу по одному или несколько (до 5) штук.

На пробки колб, склянок, трубок надевают бумажные колпачки.

Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в сушильный шкаф не слишком плотно, чтобы обеспечить некоторую циркуляцию воздуха и равномерный, надежный прогрев стерилизуемого материала. Сушильный шкаф при стерилизации должен быть закрыт. За температурой необходимо следить, так как при понижении ее не осуществляется стерилизация, а при нагреве выше 175°С бумага и пробки начинают разрушаться. Стерилизация длится 2 ч при температуре 160—170°С. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не снизится до 100—70°С, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а стекло может растрескаться.

Посуду можно стерилизовать и в автоклаве.

Мелкие металлические инструменты стерилизуют прокаливанием в пламени непосредственно перед использованием.

Приборы для культивирования микроорганизмов, а также детали к этим приборам (резиновые пробки и шланги) стерилизуют автоклавированием. Предметы, подлежащие стерилизации в автоклаве, завертывают в бумагу.

Стерилизация кипячением является наиболее простым и легкодоступным способом. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная вода образует накипь. Стеклянные предметы погружают в холодную воду, металлические— в горячую с добавлением соды. Кипячение ведут на слабом огне [131, 140].

Предметы, изготовленные из термолабильных пластмасс, например центрифужные пробирки, стерилизуют этиловым спиртом или ультрафиолетовыми лучами. Время стерилизации зависит от мощности используемой бактерицидной лампы и расстояния между лампой и объектом. После облучения предметы до использования следует хранить в стерильной посуде [25].