содержание .. 15 16 17 18 ..
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 17
# Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной среды № 8,
перемешивают и инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 24 - 48 часов.
Делают пересев на чашку с плотной питательной средой №9 и инкубируют при
температуре 30-350С от 18 до 48 часов. Рост зеленоватых, как правило, флюо-
ресцирующих колоний, голубых в ультрафиолетовом свете (что свидетельствует
о наличии пигмента пиоцианина) указывает на возможность загрязнения лекарст-
венного средства Pseudomonas aeruginosa. В этом случае подозрительные коло-
нии пересевают на скошенную плотную среду №1, инкубируют при температуре
30-350С в течение 18-24 часов. Выросшие колонии микроскопируют и, при выяв-
лении грамотрицательных палочек, проводят тест на наличие фермента цитохро-
моксидаза. Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие
палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию и образуют сине-
зеленый пигмент, лекарственное средство контаминировано Pseudomonas aerugi-
nosa.
Staphylococcus aureus
Испытуемый продукт готовят в соответствии с указаниями общего раздела
2.6.12. 10 мл образца или количество, соответствующее 1 г или 1 мл продукта,
помещают в 100 мл питательного бульона А, гомогенизируют и инкубируют при
35-370С в течение 18-48 часов. Пересевают на чашку с агаризованной средой О и
инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Наличие черных колоний грампо-
ложительных кокков, окруженных прозрачными зонами, свидетельствует о присут-
ствии S. aureus. Подтверждение может быть получено путем проведения соответ-
ствующих биохимических тестов, например, на коагулазу и дезоксирибонуклеазу.
Продукт выдерживает испытание, если культура описанного типа на агаризован-
ной среде О не обнаруживается или подтверждающие биохимические испытания
дают отрицательный результат.
При испытании трансдермальных пластырей 50 мл образца А пропускают
через стерильный мембранный фильтр в соответствии с указаниями общего раз-
дела 2.6.12, помещают мембранный фильтр в 100 мл жидкой среды А и инкуби-
руют при температуре 35-370С в течение 18-48 часов. После окончании периода
инкубации пересевают на поверхность агаризованной среды О.
# Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной среды № 8,
перемешивают и инкубируют при температуре 30-35°С в течение 24 - 48 часов.
Делают пересев на чашку с плотной питательной средой №10 и инкубируют при
температуре 30-350С от 18 до 48 часов. Рост золотисто-желтых колоний, окружен-
ных желтыми зонами (что свидетельствует о ферментации маннита), указывает
на возможность загрязнения лекарственного средства S. aureus. В этом случае
подозрительные колонии пересевают на скошенную плотную среду №1, инкуби-
руют при температуре 30-350С в течение 18-24 часов. Выросшие колонии микро-
скопируют и, при выявлении грамотрицательных кокков, расположенных гроздья-
ми, проводят тест на наличие фермента плазмокоагулаза.
# Тест на наличие плазмокоагулазы (реакция плазмокоагуляции) Кровь,
взятую стерильным шприцем из сердца кролика, помещают в 5 % стерильный
раствор натрия цитрата, отсасывают плазму, разводят 1:5 0,9% стерильным рас-
твором натрия хлорида изотоническим и разливают по 0,5 мл в стерильные про-
бирки. В каждую пробирку помещают 1 петлю суточной культуры стафилококка и
инкубируют при температуре от 30 до 35°С в течение 4 - 6 часов. Если в течение
этого времени не наблюдают свертывание плазмы, реакцию плазмокоагуляции
считают отрицательной. Обязательно наличие двух контролей: 1) контроль рас-
твора плазмы, 2) контроль культуры стафилококка, обладающего ферментом коа-
гулазой.
# Допускается использовать сухую кроличью цитратную плазму промыш-
ленного производства, которую разводят согласно наставлению по применению.
# Если в образце обнаружены грамположительные кокки, которые фермен-
тируют маннит и дают положительную реакцию плазмокоагуляции, лекарственное
средство контаминировано Staphylococcus aureus
Клостридии
Нижеописанные испытания проводят в различных целях. Первый метод
предназначен для тех случаев, когда важным является исключение патогенных
клостридий, и необходимо провести испытание на их отсутствие. Эти продукты
обычно содержат небольшое общее количество микроорганизмов. Второй метод
представляет собой полуколичественное определение Clostridium perfringens, и
предназначен для продуктов, в которых количество этих микроорганизмов являет-
ся критерием качества.
1. Испытание на клостридии. Готовят испытуемый продукт, как описано в
разделе 2.6.12. Отбирают две равные порции, соответствующие 1 г или 1 мл про-
дукта. Одну из порций нагревают при 800С в течение 10 минут и быстро охлажда-
ют. Другую порцию не нагревают. По 10 мл каждой из гомогенизированных порций
переносят в две пробирки (38х200 мм) или в другие подходящие контейнеры, со-
держащие 100 мл среды Р. Инкубируют в анаэробных условиях при 35-370С в те-
чение 48 часов. После инкубации делают пересев из каждой пробирки на среду Q
с добавлением гентамицина и инкубируют в анаэробных условиях при 35-370С в
течение 48 часов. Если роста микроорганизмов не наблюдается, продукт выдер-
живает испытание.
При наличии роста делают пересев каждой отдельной колонии на пита-
тельную среду Q без гентамицина и инкубируют как в аэробных, так и в анаэроб-
ных условиях. Наличие только анаэробного роста грамположительных палочек (с
эндоспорами или без них), дающих отрицательную реакцию на каталазу, указыва-
ет на присутствие Clostridium spp. При необходимости сравнивают морфологию
колоний на двух чашках и проводят испытания на каталазу для исключения
аэробных и факультативно анаэробных Bacillus spp, дающих положительную ре-
акцию на каталазу. Это испытание может применяться к изолированным колониям
на агаре или после их переноса на предметное стекло, путем добавления капли
разбавленного раствора пероксида водорода R. Образование пузырьков газа яв-
ляется признаком положительной реакции на каталазу.
2. Количество Clostridium perfringens. Используя продукт, подготовленный в
соответствии с указаниями раздела 2.6.12, готовят разведения в соотношениях
1:100 и 1:1000 в буферизированном растворе хлорида натрия и пептона рН 7,0.
Определяют наиболее вероятное число бактерий, как описано в разделе 2.6.12,
используя питательную среду R в пробирках или других подходящих контейнерах
с помещенной внутрь маленькой трубкой Дюрама. Перемешивают при минималь-
ном встряхивании и инкубируют при 45,5-46,50С в течение 24-48 часов. Наличие в
пробирках черного окрашивания, вызванного образованием сульфида железа, и
сильного газообразования в трубках Дюрама (не менее 1/10 объема) указывает на
присутствие Cl. perfringens. Наиболее вероятное количество C. рerfringens оцени-
вают с использованием Таблицы 2.6.13.-2.
Таблица 2.6.13.-2
Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий
Три пробирки для каждого уровня разведения
Количество пробирок с на-
НВЧ
Категория*
Пределы 95% до-
блюдаемым ростом микроор-
в 1 г
верительного ин-
ганизмов
тервала
0,1 г
0,01 г
0,001 г
1
2
0
0
0
< 3
-
-
0
1
0
3
¥
< 1
17
1
0
0
3
¥
1
21
1
0
1
7
¥
2
27
1
1
0
7
¥
2
28
1
2
0
11
¥
4
35
2
0
0
9
¥
2
38
2
0
1
14
¥
5
48
2
1
0
15
¥
5
50
2
1
1
20
¥
8
61
2
2
0
21
¥
8
63
3
0
0
23
¥
7
129
3
0
1
38
¥
10
180
3
1
0
43
¥
20
210
3
1
1
75
¥
20
280
3
2
0
93
¥
30
390
3
2
1
150
¥
50
510
3
2
2
210
¥
80
640
3
3
0
240
¥
100
1400
3
3
1
460
¥
200
2400
3
3
2
1100
¥
300
4800
3
3
3
> 1100
-
-
* Категория 1: Нормальные результаты, получаемые в 95% случаев.
Категория 2: Менее вероятные результаты, получаемые только в 4% случаев.
Их не следует использовать при принятии важных решений. Результаты, еще ме-
нее вероятные, чем относящиеся к категории 2, не приводятся и всегда являются
неприемлемыми.
Контроль. Используют следующие тест-штаммы:
Для метода 1: Clostridium sporogenes, например, АТСС 19404 (NCTC 532)
или CIP 79.3; # ГИСК 272
Для метода 2: Clostridium perfringens, например, АТСС 13124 (NCIMB 6125 и
NCTC 8237, CIP 103 409).
При необходимости, комбинируют с Сl. sporogenes для проверки селектив-
ности и анаэробных условий.
Ростовые свойства питательных сред и проверка пригодности методики ис-
пытания
Описанные ниже испытания следует проводить, как минимум, для каждой
партии сухой питательной среды.
В пробирках с подходящими средами (например, указанными ниже) выра-
щивают по отдельности нижеприведенные тест-культуры при температуре 30-
350С в течение 18-24 часов.
Staphylococcus aureus
например, АТСС 6538 (NCIMB 9518, CIP 4.83)
# или
ATCC 6538 P
питательный бульон А, # жидкая среда
№1
Pseudomonas aeruginosa например, ATCC 9027 (NCIMB 8626, CIP 82.118)
питательный бульон А, # жидкая среда
№1
Escherichia coli
например, ATCC 8739 (NCIB 8545, CIP 53.126),
# или
АТСС 25922
питательный бульон А, # жидкая среда
№1
Salmonella typhimurium
Рекомендации по конкретным штам-
мам отсутствуют. Может быть также
использован штамм не патогенный для
человека, например, Salmonella abony
(NCTC 6017, CIP 80.39);
питательный бульон А, # жидкая среда
№1
Порции каждой из культур разбавляют буферизированным раствором хло-
рида натрия и пептона рН 7,0, получая тест-суспензии, содержащие около 1000
жизнеспособных микроорганизмов в миллилитре. Смешивают равные объемы ка-
ждой суспензии и используют 0,4 мл полученной смеси (приблизительно 100 мик-
роорганизмов каждого штамма) в качестве инокулята для проведения испытаний
на E.coli, Salmonella, Ps. аeruginosa и S. aureus, при необходимости, в присутствии
и в отсутствии испытуемого продукта. Для соответствующих микроорганизмов
должен быть получен положительный результат.
# Тест-культуры можно выращивать на скошенной в пробирках плотной пи-
тательной среде подходящего состава, например, среде №1. Для получения тест-
суспензий выращенные в пробирках культуры смывают раствором натрия хлори-
да 0,9% и разводят этим же раствором до нужного содержания клеток в милли-
литре, используя стандарт мутности.
# Определение антимикробного действия нестерильных лекарствен-
ных средств
Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных
средств можно проводить с использованием следующих тест-микроорганизмов:
Bacillus cereus
ATCC 10702 (NCTC 8035)
Escherichia coli
ATCC 25922
Pseudomonas aerugiosa ГИСК 453, АТСС 9027
Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р (FDA 209-Р)
Сandida albicans
АТСС 885-653
Aspergillus niger
BKM F-1119
Проведение испытания
Перед определением антимикробного действия культуры бактерий отсева-
ют на скошенную в пробирках плотную питательную среду №1 и инкубируют при
температуре от 300С до 350С в течение 18-24 часов.
Культуры грибов выращивают на скошенной плотной питательной среде
№2 при температуре от 200С до 25 0С, С. аlbicans - 48 часов, А. niger - 7 суток.
Со скошенного агара культуры бактерий и С. аlbicans смывают раствором
натрия хлорида 0,9%, культуру А. niger - этим же раствором с 0,05% полисорбата
80. Полученные суспензии разводят до концентрации 103 КОЕ/мл для культур бак-
терий и 103 - 104 КОЕ/мл для культур грибов.
Определение антимикробного действия для водорастворимых лекар-
стенных средств
Готовят разведения лекарственного средства 1:10; 1:20; 1:50 (при необхо-
димости ряд разведений может быть продолжен), используя фосфатный буфер-
ный раствор (для приготовления эмульсий в раствор добавляют не более 5 % по-
лисорбата 80).
Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в чашки Петри
диаметром 90 мм, в одни из которых добавляют по 0,2 мл взвеси культуры В.
сereus, а в другие - по 0,2 мл культуры С. albicans и А. niger. В чашки с В. сereus
вносят по 15-20 мл расплавленной среды № 1 при температуре (45 - 50) 0С, в
чашки с культурами С. albicans и А. niger - то же количество среды № 2.
Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в пробирки с
10 мл жидкой среды - № 3 и № 8. В пробирки со средой № 3 добавляют по 1 мл
взвеси культуры Е.coli, в пробирки со средой № 8 - по 1 мл взвеси культур
Р.aeruginosa и S.aureus, каждую отдельно. В контрольные чашки и пробирки вме-
сто разведения лекарственного средства вносят такое же количество буферного
раствора.
Посевы на средах № 1, 3, 8, инкубируют при температуре от 300С до 35 0С в
течение 2 суток (среды № 3, № 8) и 5 суток (среда № 1). Посевы на среде № 2 ин-
кубируют при температуре от 200С до 250С в течение 5 суток. В случае, если при
внесении лекарственного средства в жидкие питательные среды (№ 3, № 8) обра-
зуется помутнение, препятствующее учету результатов, делают пересев со среды
№ 3 на среду № 4 (агар Эндо), а со среды № 8 - на среды № 9 и № 10. При росте
типичных колоний Е.coli (среда № 4), Р.aeruginosa (среда № 9) и S.aureus (среда
№ 10) отмечают наличие роста тест-микроорганизма.
Определение антимикробного действия для водонерастворимых лекар-
ственных средств (метод репликаций).
В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемо-
го лекарственного средства. В контрольные чашки вносят по 1 мл растворителя,
который используют для получения разведения. В чашки Петри (как в экспери-
менте, так и в контроле) добавляют по 15-20 мл расплавленной и охлажденной до
(45 - 50) 0С среды № 1, в другие - такое же количество среды № 2 и быстро пере-
мешивают. После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденса-
та с поверхности среды.
На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором нано-
сят бляшками инокулят каждого тест-штамма бактерий и грибов на среды № 1 и
№ 2 соответственно.
Чашки со средой № 1 инкубируют при температуре от 300С до 350С в течение 48
часов. Чашки со средой № 2 инкубируют при температуре от 200С до 250С в тече-
ние 3-5 суток.
Учет результатов
После окончания сроков инкубации посевов (появление типичного роста
тест-микроорганизмов в контрольных чашках без лекарственного средства) отме-
чают наличие или отсутствие роста тест-штаммов бактерий и грибов на средах, в
которые вносили различные разведения лекарственного средства.
Отсутствие роста тест-микроорганизма на среде с препаратом свидетель-
ствует о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимик-
робным действием в отношении определенного тест-микроорганизма.
НЕЙТРАЛИЗУЮЩИЕ АГЕНТЫ
Для нейтрализации активности антимикробных компонентов могут исполь-
зоваться нейтрализующие агенты. Они могут быть добавлены к буферизирован-
ному раствору хлорида натрия и пептона рН 7,0, предпочтительно, перед стери-
лизацией. В случае применения нейтрализующих агентов должна быть показана
их эффективность и нетоксичность в отношении микроорганизмов.
Типичная нейтрализующая жидкость имеет следующий состав:
Полисорбат 80
30 г
Лецитин (яичный)
3 г
Гистидина гидрохлорид
1 г
Пептон (мясной или казеиновый)
1 г
Натрия хлорид
4,3 г
Калия дигидрофосфат
3,6 г
Натрия гидрофосфата дигидрат
7,2 г
Вода очищенная
1000 мл
Раствор стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 мин.
Если нейтрализующая способность раствора недостаточна, концентрация
полисорбата 80 или лецитина может быть увеличена. Кроме того, могут быть до-
бавлены нейтрализаторы, перечисленные в Таблице 2.6.13.-3.
Таблица 2.6.13.-3
Инактиваторы антимикробных агентов, добавляемые к буферизированному рас-
твору хлорида натрия и пептона рН 7,0
Тип антимик-
Инактиватор
Концентрация
Комментарий
робного агента
Фенолы
Натрия лаурил-
4 г/л
Добавляют после стерили-
сульфат
зации буферизированного
Полисорбат
80 и
30 г/л и 3 г/л
раствора хлорида натрия и
лецитин
пептона рН 7,0
Яичный желток
5 мл/л
-
50
мл/л
Ртутьоргани-
Натрия тиоглико-
0,5 г/л - 5 г/л
ческие соеди-
лят
нения
Галогены
Натрия тиосуль-
5 г/л
фат
Четвертичные
Яичный желток
5 мл/л
-
50
Добавляют после стерили-
аммониевые
мл/л
зации буферизированного
соединения
раствора хлорида натрия и
пептона рН 7,0
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ РАСТВОРЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Нижеописанные растворы и питательные среды удовлетворяют целям, для
которых они предназначены в фармакопейном испытании на микробную контами-
нацию. Могут быть использованы и другие среды, при условии, что они имеют
аналогичные питательные и селективные свойства в отношении тестируемых
микроорганизмов.
Буферизированный раствор хлорида натрия и пептона рН 7,0
Калия дигидрофосфат
3,6 г
Натрия гидрофосфата дигидрат, эквивалент фосфата 0,067 М
7,2 г
Натрия хлорид
4,3 г
Пептон (мясной или казеиновый)
1,0 г
Вода очищенная
1000 мл
К этому раствору могут быть добавлены поверхностно-активные компонен-
ты и инактиваторы антибактериальных агентов, например, полисорбат 80 в коли-
честве от 1 г/л до 10 г/л. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в тече-
ние 15 минут.
Питательный бульон А (бульон на основе гидролизатов казеина и соевых
бобов)
Панкреатический гидролизат казеина
17,0 г
Папаиновый гидролизат соевых бобов
3,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Калия гидрофосфат
2,5 г
Глюкозы моногидрат
2,5 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут.
Агаризованная среда В (агаризованная среда на основе гидролизатов ка-
зеина и соевых бобов)
Панкреатический гидролизат казеина
15,0 г
Папаиновый гидролизат соевых бобов
5,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут.
Агаризованная среда С (декстрозный агар Сабуро с антибиотиками)
Пептоны (мясной и казеиновый)
10,0 г
Глюкозы моногидрат
40,0 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 5,6±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут. Непосредственно перед применением на литр среды добавляют 0,10 г
бензилпенициллина натриевой соли и 0.10 г тетрациклина в виде стерильных рас-
творов или добавляют 50 мг хлорамфеникола на 1 литр среды перед стерилиза-
цией.
Питательный бульон D (лактозный бульон)
Говяжий экстракт
3,0 г
Панкреатический гидролизат желатина
5,0 г
Лактозы моногидрат
5,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 6,9±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут и немедленно охлаждают.
Обогатительный питательный бульон Е (обогатительный бульон Моссе-
ля для энтеробактерий)
Панкреатический гидролизат желатина
10,0 г
Глюкозы моногидрат
5,0 г
Дегидратированная бычья желчь
20,0 г
Калия дигидрофосфат
3,0 г
Натрия гидрофосфата дигидрат
8,0 г
Бриллиантовый зеленый
15 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло
7,2±0,2. Нагревают при 1000С в течение 30 минут и немедленно охлаждают.
Агаризованная среда F (агаризованная среда с глюкозой, кристалличе-
ским фиолетовым, нейтральным красным и желчью)
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Панкреатический гидролизат желатина
7,0 г
Соли желчных кислот
1,5 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Глюкозы моногидрат
10,0 г
Агар
15,0 г
Нейтральный красный
30 мг
Кристаллический фиолетовый
2 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло
7,4±0,2. Нагревают до кипения: не нагревают в автоклаве.
Питательный бульон G (бульон Макконки)
Панкреатический гидролизат желатина
20,0 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Дегидратированная бычья желчь
5,0 г
Бромкрезоловый пурпурный
10 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут.
Агаризованная среда H (агар Макконки)
Панкреатический гидролизат желатина
17,0 г
Пептоны (мясной и казеиновый)
3,0 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Соли желчных кислот
1,5 г
Агар
13,5 г
Нейтральный красный
30,0 мг
Кристаллический фиолетовый
1 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,1±0,2. Кипятят в течение одной минуты при постоянном встряхивании,
затем стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут.
Питательный бульон I (бульон на основе тетратионата, желчи и брилли-
антового зеленого)
Пептон
8,6 г
Бычья желчь, высушенная
8,0 г
Натрия хлорид
6,4 г
Кальция карбонат
20,0 г
Калия тетратионат
20,0 г
Бриллиантовый зеленый
70 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло
7,0±0,2. Нагревают только до кипения. Повторное нагревание не допускается
Агаризованная среда J (агар на основе дезоксихолата и цитрата)
Говяжий экстракт
10,0 г
Мясной пептон
10,0 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Натрия цитрат
20,0 г
Железа (III) цитрат
1,0 г
Натрия дезоксихолат
5,0 г
Агар
13,5 г
Нейтральный красный
20 мг
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло
7,3±0,2. Осторожно нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, охлаждают до 500С
и разливают по чашкам Петри. Не автоклавируют.
Агаризованная среда К (агар на основе ксилозы, лизина, дезоксихолата)
Ксилоза
3,5 г
L-Лизин
5,0 г
Лактозы моногидрат
7,5 г
Сахароза
7,5 г
Натрия хлорид
5,0 г
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Феноловый красный
80 мг
Агар
13,5 г
Натрия дезоксихолат
2,5 г
Натрия тиосульфат
6,8 г
Железа(III)-аммония цитрат
0,8 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло
7,4±0,2. Нагревают только до кипения, охлаждают до 500С и разливают по чашкам
Петри. Не автоклавируют.
Агаризованная среда L (агар на основе бриллиантового зеленого, фено-
лового красного, лактозы и сахарозы)
Пептоны (мясной или казеиновый)
10,0 г
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Сахароза
10,0 г
Агар
20,0 г
Феноловый красный
80 мг
Бриллиантовый зеленый
12,5 мг
Вода очищенная
1000 мл
Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту. Значение рН доводят таким об-
разом, чтобы после стерилизации оно составляло 6,9±0,2. Непосредственно пе-
ред использованием стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение
15 минут, охлаждают до 500С и разливают по чашкам Петри.
Агаризованная среда М (тройной агар на основе сахара и железа)
Говяжий экстракт
3,0 г
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Пептоны (казеиновый или говяжий)
20,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Сахароза
10,0 г
Глюкозы моногидрат
1,0 г
Железа(III)-аммония цитрат
0,3 г
Натрия тиосульфат
0,3 г
Феноловый красный
25 мг
Агар
12,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,4±0,2. Разливают по
пробиркам на третью часть их высоты, стерилизуют в паровом стерилизаторе при
1210С в течение 15 минут и оставляют до охлаждения в положении, обеспечи-
вающем получение образца в форме столбика и скошенной поверхности.
Агаризованная среда N (агар на основе цетримида)
Панкреатический гидролизат желатина
20,0 г
Магния хлорид
1,4 г
Калия сульфат
10,0 г
Цетримид
0,3 г
Агар
13,6 г
Вода очищенная
1000 мл
Глицерин
10,0 мл
Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2±0,2. Стерилизуют в
паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут.
Агаризованная среда О (агар Байерд-Паркера)
Панкреатический гидролизат казеина
10,0 г
Говяжий экстракт
5,0 г
Дрожжевой экстракт
1,0 г
Лития хлорид
5,0 г
Агар
20,0 г
Глицин
12,0 г
Натрия пируват
10,0 г
Вода очищенная
950 мл
Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 6,8±0,2. Стерилизуют в
паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут, охлаждают до 45-500С и
добавляют 10 мл стерильного раствора теллурита калия с концентрацией 10 г/л и
50 мл эмульсии яичного желтка.
Питательная среда Р (обогащенная среда для клостридий)
Говяжий экстракт
10,0 г
Пептон
10,0 г
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Растворимый крахмал
1,0 г
Глюкозы моногидрат
5,0 г
Цистеина гидрохлорид
0,5 г
Натрия хлорид
5,0 г
Натрия ацетат
3,0 г
Агар
0,5 г
Вода очищенная
1000 мл
Агар замачивают, растворяют путем нагревания до кипения при постоянном
перемешивании. При необходимости, значение рН доводят таким образом, чтобы
после стерилизации оно составляло около 6,8. Стерилизуют в паровом стерили-
заторе при 1210С в течение 15 минут.
Питательная среда Q (колумбийский агар)
Панкреатический гидролизат казеина
10,0 г
Пепсиновый гидролизат мяса
5,0 г
Панкреатический гидролизат сердца
3,0 г
Дрожжевой экстракт
5,0 г
Маисовый крахмал
1,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Агар, в зависимости от гелеобразующей способности
10,0 - 15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Агар замачивают, растворяют путем нагревания до кипения при постоянном
перемешивании. При необходимости, значение рН доводят таким образом, чтобы
после стерилизации оно составляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилиза-
торе при 1210С в течение 15 минут. Охлаждают до 45-500С, добавляют, при необ-
ходимости, гентамицина сульфат в количестве, соответствующем 20 мг основания
гентамицина, и разливают по чашкам Петри.
Питательная среда R (среда на основе лактозы и сульфита)
Панкреатический гидролизат казеина
5,0 г
Дрожжевой экстракт
2,5 г
Натрия хлорид
2,5 г
Лактозы моногидрат
10,0 г
Цистеина гидрохлорид
0,3 г
Вода очищенная
1000 мл
Растворяют, доводят до рН 7,1±0,1 и разливают по 8 мл в пробирки разме-
ром 16 мм х 160 мм, содержащие маленькие трубки Дюрама. Стерилизуют в паро-
вом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут и хранят при 40С.
Перед использованием питательную среду нагревают в течение 5 минут на
водяной бане и охлаждают. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл раствора на-
трия метабисульфита R концентрацией 12 г/л и 0,5 мл раствора железа(III)-
аммония цитрата концентрацией 10 г/л. Оба раствора должны быть свежеприго-
товленными и профильтрованы через мембраны (размер пор 0,45 мкм).
Агаризованная среда S (R2A)
Дрожжевой экстракт
0,5 г
Протеозопептон
0,5 г
Гидролизат казеина
0,5 г
Глюкоза
0,5 г
Крахмал
0,5 г
Калия гидрофосфат
0,3 г
Магния сульфат, безводный
0,024 г
Натрия пируват
0,3 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,2±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15
минут.
# Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (1/15
моль)
Калия фосфат однозамещенный
3,56 г
Натрия фосфат двузамещенный
7,23 г
Натрия хлорид
4,3 г
Пептон ферментативный сухой
1,0 г
Вода очищенная
до 1000 мл
рН
7,0
Компоненты растворяют в очищенной воде при нагревании, фильтруют че-
рез бумажный фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
Среда № 1 - для выращивания бактерий
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Глюкоза
1,0 г
Агар
13,0 г
Мясная вода
1000 мл
Все компоненты растворяют в мясной воде при нагревании, вносят глюкозу,
значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло
7,3 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, прибавляют агар, нагревают до полного его расплав-
ления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение
15 минут.
Жидкая среда №1 (мясо-пептонный бульон)
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Глюкоза
1,0 г
Мясная вода
1000 мл
К мясной воде добавляют пептон и натрия хлорид, растворяют при нагре-
вании, вносят глюкозу, значение рН доводят таким образом, чтобы после стери-
лизации оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 мин. Фильтруют через бумажный
фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение
15 минут.
Среда № 2 - для выращивания грибов (Сабуро-агар)
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Глюкоза
40,0 г
Агар
13,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Все компоненты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 5,6 ± 0,2. Прибавляют
агар, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый
фильтр. Для подавления роста бактерий после стерилизации прибавляют 100 мг
бензилпенициллина и 100 мг тетрациклина (либо перед стерилизацией - 50 мг
левомицетина) на 100 мл среды.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение
15 минут.
Среда № 3 - для обогащении для бактерий семейства Enterobacteriaceae
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Калия фосфат однозамещенный
2,5 г
Натрия фосфат двузамещенный
7,5 г
Глюкоза
10,0 г
Феноловый красный
0,08 г
Малахитовый зеленый
0,015 г
Мясная вода
1000 мл
Пептон и соли растворяют в мясной воде при нагревании, вносят глюкозу,
прибавляют 8 мл 1 % раствора фенолового красного и 3 мл 0,5 % раствора мала-
хитового зеленого, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилиза-
ции оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, фильтруют через бумажный
фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
Среда № 4 (агар Эндо) - для выделения бактерий семейства Enterobacteri-
aceae.
Панкреатический гидролизат рыбной муки
12,0 г
Экстракт пекарных дрожжей
1,0 г
Натрий хлористый
3,4 г
Натрия сульфит безводный
0,8 г
Натрия фосфат двузамещенный
0,5 г
D - лактоза
10,0 г
Фуксин основной
0,2 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Ингредиенты размешивают в воде, значение рН доводят таким образом,
чтобы после стерилизации оно составляло 7,4 ± 0,2. Нагревают до полного рас-
плавления агара и кипятят 2-3 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр,
снова нагревают до момента закипания. Охлаждают до температуры от 450С до
500С и разливают в чашки Петри.
Среда № 5 (висмутсульфит агар) - для выделения бактерий семейства En-
terobacteriaceae
Панкреатический гидролизат мяса
10,1 г
Натрия фосфат двузамещенный
3,68 г
Натрия хлорид
2,6 г
Натрия карбонат
0,65 г
Висмута цитрат
2,38 г
Железа(II) аммония сульфат
0,97 г
D-глюкоза
3,9 г
Агар
15,0
Бриллиантовый зеленый
0,028
Вода очищенная
1000 мл
Ингредиенты размешивают в воде, значение рН доводят таким образом,
чтобы после стерилизации оно составляло 7,6 ± 0,2. Нагревают до полного рас-
плавления агара и кипятят 3-5 минут. Охлаждают до температуры от 450С до 500С
и разливают в чашки Петри.
Среда № 6 - для определения ферментации глюкозы:
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Глюкоза
40,0 г
Феноловый красный
0,08 г
Мясная вода
1000 мл
Пептон и натрия хлорид растворяют в мясной воде при нагревании, вносят
глюкозу, прибавляют 8 мл 1 % раствора фенолового красного, значение рН дово-
дят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1
минуту, фильтруют через бумажный фильтр и разливают в пробирки с поплавками
по 4 - 5 мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в тече-
ние 15 минут. По окончании стерилизации быстро охлаждают.
Среда № 7 - для определения восстановления нитратов в нитриты:
Пептон ферментативный сухой
5,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Калия нитрат
1,5 г
Вода очищенная
1000 мл
Все компоненты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1 ми-
нуту, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 4 - 5 мл. Сте-
рилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15 минут.
Среда № 8 - среда обогащения для Pseudomonas aeruginosa и Staphylococ-
cus aureus
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Натрия хлорид
5,0 г
Калия фосфат двузамещенный
2,5 г
Глюкоза
2,5 г
Вода очищенная
до 1000 мл
Пептон и соли растворяют в воде при нагревании, вносят глюкозу, значение
рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,3 ± 0,2.
Кипятят 1 минуту, фильтруют через бумажный фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15
минут.
Среда № 9 - для выявления пигмента пиоцианина
Пептон ферментативный сухой
20,0 г
Магния хлорид безводный
1,4 г
Калия сульфат безводный
10,0 г
Глицерин
10,0 мл
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Пептон и соли растворяют в воде. Затем вносят глицерин, растворяют при
нагревании, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно
составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, прибавляют агар, нагревают до полного
его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15
минут.
Среда № 10 - для идентификации Staphylococcus aureus
Пептон ферментативный сухой
10,0 г
Натрия хлорид
75,0 г
Маннит
10,0 г
Феноловый красный
0,025 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Все ингредиенты растворяют в воде, прибавляют 2,5 мл 1 % раствора фе-
нолового красного, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилиза-
ции оно составляло 7,4 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, прибавляют агар, нагревают до
полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
Среда № 11 - для предварительного обогащения энтеробактерий
Пептон ферментативный сухой
8,0 г
Лактоза
5,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Все компоненты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят
таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 6,9 ± 0,1. Фильтруют
через бумажный фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
Среда № 12 (селенитовая среда) - для накопления и выделения бактерий
рода Salmonellа
Панкреатический гидролизат казеина
5,26 г
Лактоза
4,21 г
Динатрия фосфат
6,32
Натрий селенистокислый кислый (без теллура)
4,21 г
Вода очищенная
1000 мл
Препарат гигроскопичен и светочувствителен.
Указанное в прописи количество тщательно размешивают в 1000 мл воды.
Колбу закрывают ватной пробкой, быстро доводят до кипения (до образования пу-
зырьков) и сразу прекращают нагрев. рН после стерилизации - 7,5 ± 0,2.
Среда № 13 (трехсахарный агар с солями железа)
Мясной экстракт
3,0 г
Дрожжевой экстракт
3,0 г
Пептон
20,0 г
Лактоза
10,0 г
Сахароза
10,0 г
Глюкоза
1,0 г
Железа сульфат
0,2 г
Натрия хлорид
5,0 г
Натрия тиосульфат (серноватистокислый)
0,3 г
Феноловый красный
0,024 г
Агар
15,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Ингредиенты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят та-
ким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,3 ± 0,2. Фильтруют че-
рез ватно-марлевый фильтр.
Среду разливают в пробирки по 7 мл.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение
15 минут.
При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2,5 - 3,0 см.
Среда № 14 (цитратный агар Симмонса)
Натрия хлорид
5,0 г
Магния сульфат
0,2 г
Аммония дигидрофосфат
1,0 г
Калия гидрофосфат
1,0 г
Натрия цитрат
3,0 мл
Бромтимоловый синий
0,08 г
Агар
20,0 г
Вода очищенная
1000 мл
Соли растворяют в воде, вносят агар и нагревают до полного его расплав-
ления, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со-
ставляло 7,2 ± 0,1. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, добавляют 40 мл
0,2 % водного раствора бромтимолового синего.
Среду разливают в пробирку по 5-7 мл.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2,0 - 2,5 см.
Среда № 15 (бульон Хоттингера) - для определения индола
Раствор гидролизата мяса по Хоттингеру с содержанием амин-
1000 мл
ного азота 120-140 мг %
Натрия хлорид
5,0 г
Калия фосфат двузамещенный
1,0 г
или калия фосфат двузамещенный 3-водный
1,31 г
Гидролизат Хоттингера разводят водой до содержания в среде 120-140 мг%
аминного азота, добавляют соли, значение рН доводят таким образом, чтобы по-
сле стерилизации оно составляло 7,5 ± 0,1. Кипятят 15 минут, фильтруют через
бумажный фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
0,9 % раствор натрия хлорида
Натрия хлорид
9 г
Вода очищенная
до 1000 мл
Навеску NaCl помещают в мерную колбу на 1000 мл и доводят объем рас-
твора до метки очищенной водой. Раствор фильтруют через бумажный фильтр.
Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15
минут.
Раствор № 1 для промывания мембраны
Пептон ферментативный
1,0 г
Вода очищенная
до 1000 мл
рН после стерилизации
7,1 ± 0,2
Раствор № 2 для промывания мембраны
Пептон ферментативный
5,0 г
Твин-80
10,0 г
Вода очищенная
до 1000 мл
рН после стерилизации
7,1 ± 0,2
Растворы № 1 и № 2 стерилизуют в паровом стерилизаторе при температу-
ре 1210С в течение 15 минут.
1 % раствор фенолового красного
Феноловый красный
1,0 г
Раствор едкого натра 0,1 моль/л
28,2 мл
Вода очищенная
до 100 мл
Навеску индикатора растирают в ступке, прибавляя небольшими порциями
едкий натр. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимость 100 мл и
доводят объем раствора до метки очищенной водой. Хранят во флаконе ней-
трального светозащитного стекла при температуре от 40С до 100С.
0,5 % раствор малахитового зеленого
Малахитовый зеленый
0,5 г
Вода очищенная
до 100 мл
Навеску красителя помещают в мерную колбу на 100 мл, доводят объем
раствора до метки стерильной горячей водой. Раствор выдерживают сутки в тер-
мостате, периодически перемешивая.
Реактив Грисса
Раствор № 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 мл ледяной
уксусной кислоты, прибавляют 100 мл воды, фильтруют.
Раствор № 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 мл кипящей воды, ох-
лаждают, прибавляют 30 мл ледяной уксусной кислоты, фильтруют.
Перед употреблением смешивают равные объемы растворов № 1 и № 2.
Реактив на цитохромоксидазу
Раствор № 1: 1 % спиртовой раствор 1-нафтола.
Раствор № 2: 1 % раствор N, N-диметил-р-фенилендиамина дигидрохло-
рида.
Перед употреблением смешивают раствор № 1 и № 2 в соотношении 2:3.
Реактив Ковача
Спирт амиловый или изоамиловый
75 г
n-диметиаминобензальдегид
5,0 г
Кислота хлористоводородная концентрированная
20 мл
Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (на водяной
бане при 50-55 0С), охлаждают и медленно добавляют кислоту.
Раствор должен быть желтого цвета.
Реактив Эрлиха
Спирт этиловый 96 %
95 мл
n-диметиаминобензальдегид
1,0 г
Кислота хлористоводородная концентрированная
20 мл
Навеску альдегида растворяют в спирте и медленно добавляют кислоту.
2.6.14. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ЭНДОТОКСИНЫ
Испытание на бактериальные эндотоксины проводят для определения на-
личия или количества эндотоксинов, источником которых являются грамотрица-
тельные бактерии, с использованием лизата амебоцитов мечехвоста Limulus poly-
phemus или Tachypleus tridentatus. Существует три принципа проведения данного
испытания: принцип гель-тромба, основанный на образовании геля; турбидимет-
рический принцип, основанный на помутнении в результате расщепления эндо-
генного субстрата; хромогенный принцип, основанный на появлении окраски по-
сле расщепления синтетического пептидно-хромогенного комплекса.
В настоящем разделе описаны шесть методов:
Метод А. Гель-тромб-метод: предельное испытание.
Метод В. Гель-тромб-метод: полуколичественное испытание.
Метод С. Турбидиметрический кинетический метод.
Метод D. Хромогенный кинетический метод.
Метод Е. Хромогенный метод конечной точки.
Метод F. Турбидиметрический метод конечной точки.
Испытание выполняют любым из этих шести методов. В сомнительных и
спорных случаях окончательное решение принимают, основываясь на методе А,
если иное не предписано в частной статье.
Испытание выполняют в условиях, не допускающих загрязнения посторон-
ними эндотоксинами.
Оборудование
Всю стеклянную посуду и другую термоустойчивую аппаратуру депирогени-
зируют в сухожаровом шкафу с использованием процесса с подтвержденной эф-
фективностью. Общеприняты минимальные значения времени и температуры об-
работки, составляющие 30 минут и 2500С, соответственно. При использовании
пластиковой аппаратуры, например, микротитрационных планшетов и наконечни-
ков для автоматических пипеток, следует продемонстрировать отсутствие на ней
поддающихся определению эндотоксинов и мешающих факторов.
Примечание: в данном разделе термин «пробирка» включает в себя все
типы сосудов, например, микротитрационные планшеты.
Приготовление исходного стандартного раствора эндотоксина
Исходный стандартный раствор эндотоксина готовят из стандартного об-
разца эндотоксина, калиброванного по отношению к международному стандарту,
например из Стандартного образца эндотоксина BRP.
Количественное содержание эндотоксина выражают в Международных
Единицах (МЕ). Эквивалентность международного стандарта в международных
единицах устанавливается Всемирной организацией здравоохранения.
Примечание: Одна международная единица (МЕ) эндотоксина эквивалент-
на одной единице эндотоксина (ЕЭ).
Исходный стандартный раствор эндотоксина готовят и хранят, следуя спе-
цификациям, приведенным на листке-вкладыше и этикетке.
Приготовление стандартных растворов эндотоксина
Необходимые последовательные разведения предварительно интенсивно пере-
мешанного исходного стандартного раствора эндотоксина готовят с использова-
нием воды для испытания на бактериальные эндотоксины (вода для ИБЭ). Эти
растворы используют по возможности быстро, чтобы избежать потери активности
вследствие адсорбции.
Приготовление испытуемых растворов
Испытуемые растворы готовят путем растворения или разбавления актив-
ных субстанций или медицинской продукции с использованием воды для ИБЭ.
Для некоторых субстанций и препаратов более подходящим является растворе-
ние или разбавление с использованием других водных растворов. При необходи-
мости, доводят значение рН испытуемого раствора (или его разведения) так, что-
бы рН его смеси с лизатом находилось в интервале, предписанном производите-
лем лизата. Обычно это относится к продукции со значением рН в интервале от
6,0 до 8,0. Значение рН может быть доведено с использованием кислоты, основа-
ния или подходящего буферного раствора, по рекомендациям производителя ли-
зата. Кислоты и основания могут быть приготовлены из концентратов или порош-
ков с использованием воды для ИБЭ в контейнерах, не содержащих определяе-
мых количеств эндотоксина. Должно быть подтверждено отсутствие в буферных
растворах отсутствие эндотоксинов и мешающих факторов.
Определение максимально допустимого разведения
Максимально допустимое разведение (МДР)
- максимальное разведение
образца, при котором может быть определено предельное содержание эндоток-
сина. МДР вычисляют по формуле:
Предельное содержание эндотоксинов¥Концентрация испытуемого раствора
МДР
=
,
l
Предельное содержание эндотоксинов: для активных субстанций, предна-
значенных для парентерального введения, равно:
K
,
M
содержание .. 15 16 17 18 ..