ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год)

применяться в качестве альтернативы надлежащей производственной практики

(GMP).

Эффективность антимикробных консервантов может усиливаться или

ослабляться в результате взаимодействия с действующим веществом или другими

компонентами готового лекарственного средства, а также с упаковочными или

укупорочными материалами. Поэтому на протяжение срока годности следует

контролировать антимикробную активность готового лекарственного средства,

хранящегося в контейнере, с целью доказательства того, что она не снижается в

процессе хранения. Такие исследования должны проводиться на образцах,

извлеченных из контейнера непосредственно перед испытанием.

На стадии разработки лекарственного средства необходимо доказать, что

антимикробная активность самого лекарственного средства или при необходимости

лекарственного средства с консервантом обеспечивает надлежащую защиту от

нежелательного воздействия, которые могут быть результатом микробного

загрязнения лекарственного средства или размножения в нем микроорганизмов в

процессе хранения или использования.

Эффективность антимикробной активности может быть продемонстрирована

при помощи приведенного ниже испытания. Данное испытание не предназначено для

использования в целях повседневного контроля.

ИСПЫТАНИЕ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ

Испытание состоит во внесении в готовое лекарственное средство по

возможности находящееся в контейнере, количества подходящих микроорганизмов и

хранении инокулированного образца при указанной ниже температуре, извлечении

проб из инокулированных образцов через определенный промежуток времени и

определении в нем числа микроорганизмов.

Эффективность консерванта в готовом лекарственном средстве считают

удовлетворительной, если в условиях проведения испытаний, при хранении

инокулированнных образцов при заданной температуре, в течение указанных

промежутков времени наблюдается значительное уменьшение числа

микроорганизмов. Критерии оценки, показывающие уменьшение числа

микроорганизмов за определенный период времени, зависят от требуемой степени

защиты готового лекарственного средства (см. Таблице 5.1.3.-1/2/3).

Тест-микроорганизмы

Aspergillus niger

IMI 149 007 (ATCC 16404, IP 1431.83)

# BKMF-1119, # ВКПМ F-824

Candida albicans

NCPF 3179 (ATCC 10231, IP 48.72)

# ATCC-885-653

Pseudomonas aeruginosa

NCIMB 8626 (ATCC 9027, CIP 82.118)

# ГИСК 453

Staphylococcus aureus

NCTC 10788 (NCIMB 9518, ATCC 6538, CIP 4.83)

# АТСС 6538-Р (FDA 209-P)

Необходимо применять один штамм бактерий, выбранные микроорганизмы

могут дополняться другими штаммами или видами, которые могут представлять

вероятное микробное загрязнение для лекарственного средства. Например,

Escherichia coli [NCIMB 8545 (ATCC 8739, CIP 53.126, # АТСС 25922)] используется

при испытании всех лекарственных средств для орального применения, а

Zygosaccharomyces rouxii [NCYC 381 (IP 2021.92)] - для лекарственных средств для

орального применения с высокой концентрацией сахара.

Подготовка посевного материала

Для подготовки к испытанию свежевыращенную исходную культуру каждого

микроорганизма из указанных тест-микробов пересевают на поверхность плотной

питательной среды В

(2.6.12) в случае выращивания бактерий или плотной

питательной среды С без добавления антибиотиков (2.6.12) в случае выращивания

грибов. Культуры бактерий инкубируют при температуре 30-35°С в течение 18-24 ч;

культуру Candida albicans инкубируют при температуре 20-25°С в течение 48 ч и

культуру Aspergillus niger - при температуре 20-25°С в течение 7 дней до получения

хорошо развитых спор. Для получения чистой культуры микроорганизмов могут

потребоваться пересевы, однако рекомендуется ограничиться их минимально

возможным числом.

Для приготовления суспензии бактериальных культур и культуры Candida

albicans микробную массу смывают с питательной среды стерильной

суспендирующей жидкостью, содержащей 9 г/л натрия хлорида Р и 0,1 г/л пептона

Р, и переносят в подходящий сосуд. Затем с помощью той же жидкости доводят

содержание микроорганизмов до 10⁸ в миллилитре. Для приготовления суспензии

для рассеивания и переноса поверхностного роста в подходящий сосуд. Добавляют

культуры Aspergillus niger используют стерильную суспендирующую жидкость,

содержащую 0,9 г/л хлорида натрия Р и 0,5 г/л полисорбата 80 Р, и с ее помощью

доводят содержание спор до приблизительно 10⁸ в одном миллилитре.

Из каждой суспензии немедленно отбирают подходящий образец и

определяют число колониеобразующих единиц в 1 мл (КОЭ/мл) каждой суспензии

методом прямого посева на чашки или методом мембранной фильтрации (2.6.12).

Полученное значение служит для определения числа жизнеспособных

микроорганизмов в инокуляте и сходного числа микроорганизмов при проведении

испытания. Инокулят следует использовать немедленно после приготовления.

МЕТОДИКА

Для подсчета жизнеспособных микроорганизмов в инокулированных образцах

используют ту же плотную питательную среду, которая была использована для

первоначального выращивания соответствующих микроорганизмов.

Необходимо инокулировать каждый из контейнеров с испытуемым

лекарственным средством суспензией одного из тест-микроорганизмов до

концентрации 10⁵-10⁶ КОЭ в 1 мл или 1 г лекарственного средства. Объем суспензии

должен составлять не более

1% от объема образца. Образец тщательно

перемешивают для обеспечения равномерного распределения микроорганизмов.

Инокулированные образцы лекарственного средства выдерживают при

температуре

20-25°С в защищенном от света месте. Из каждого испытуемого

образца отбирают пробы (обычно 1 мл или 1 г) непосредственно после инокуляции и

через указанные интервалы времени (см. Таблицы 5.1.3-1/2/3) определяют число

жизнеспособных микроорганизмов методом посева на чашки или методом

мембранной фильтрации

(2.6.12).

Антимикробную активность готового

лекарственного средства следует устранить путем разведения, фильтрации или с

помощью подходящего инактиватора. При использовании инактиватора следует

подтвердить путем контрольных опытов, что его присутствие не влияет на

жизнеспособность микроорганизмов. Следует подтвердить пригодность методики

для доказательства требуемого снижения числа жизнеспособных микроорганизмов.

КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИМИКРОБНЫХ КОНСЕРВАНТОВ

Критерии оценки антимикробной активности приведены в Таблице 5.1.3.-1/2/3

в виде логарифма уменьшения числа жизнеспособных микроорганизмов.

Таблица 5.1.3.-1. - Лекарственные средства для парентерального и офтальмо-

логического применения

Lg уменьшения

7 сут

14 сут

28 сут

часов

часа

Бактерии А

НВ*

НУ**

Грибы

НУ

* НВ:нет выявления

** НУ: нет увеличения

Критерий А соответствует рекомендованной эффективности. Если обосновано,

что критерий А не может быть достигнут, например, по причине повышенного риска

неблагоприятных воздействий, лекарственное средство должно удовлетворять

критерию В.

Таблица 5.1.3.-2. - Лекарственные средства для местного применения

Lg уменьшения

2 сут

7 сут

14 сут

28 сут

Бактерии А

НУ

Грибы

НУ

Критерий А соответствуют рекомендованной эффективности. Если

обосновано, что критерий А не может быть достигнут, например, по причине

повышенного риска неблагоприятных воздействий, лекарственное средство должно

удовлетворять критерию В.

Таблица 5.1.3.-3.- Лекарственные средства для орального применения

Lg уменьшения

14 сут

28 сут

Бактерии

НУ

Грибы

НУ

Приведенный критерий соответствуют рекомендованной эффективности.

5.1.4. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

При производстве, упаковке, хранении и продвижении готовых лекарственных

средств должны быть приняты соответствующие меры для обеспечения их

микробиологической чистоты. К готовым лекарственным средствам рекомендуется

предъявлять требования, приведенные ниже.

Категория 1

Готовые лекарственные средства, к которым предъявляется требование

по стерильности, применяемые в дозированной форме и другие готовые

лекарственные средства, маркированные как стерильные.

- Должны выдерживать испытание на стерильность (2.6.1).

Категория 2

Готовые лекарственные средства для местного применения и

ингаляционного применения, за исключением тех, к которым предъявляются

требования по стерильности, и трансдермальные пластыри.

- Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) не более 10² в 1 г, в 1 мл или

на 1 пластырь (включая клеевую основу и подложку), (2.6.12).

Трансдермальные пластыри: отсутствие энтеробактерий и других

грамотрицательных бактерий на 1 пластыре (включая клеевую основу и подложку),

(2.6.13). Другие готовые лекарственные средства: не более 10¹ энтеробактерий и

других грамотрицательных бактерий в 1 г или в 1 мл (2.6.13).

- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г, в 1 мл или на 1 пластырь (включая

клеевую основу и подложку (2.6.13).

- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г, в 1 мл или на 1 пластырь (включая клеевую

основу и подложку) (2.6.13).

Категория 3

А. Готовые лекарственные средства для орального применения и

ректального введения.

- Общее число аэробных бактерий не более 10³ и не более 10² грибов в 1 г или 1 мл

(2.6.12).

- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1мл (2.6.13).

Б. Готовые лекарственные средства для орального применения, в состав

которых входят субстанции и вспомогательные вещества природного

(животного, растительного или минерального) происхождения, для которых

предварительная антимикробная обработка невозможна и в отношении которых

компетентный уполномоченный орган допускает антимикробной загрязнение не

более 10³ жизнеспособных микроорганизмов в 1 г или в 1 мл. Исключением

являются растительные лекарственные средства, относящиеся к Категории 4.

- Общее число аэробных микроорганизмов не более 10⁴ и не более 10² грибов в 1 г

или в 1 мл (2.6.12).

- Энтеробактерий и других грамотрицательных бактерий не более 10² в 1 г или в 1 мл

(2.6.13).

- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл (2.6.13).

- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл (2.6.13).

- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл (2.6.13).

Категория 4

Лекарственные средства, состоящие только из растительных

компонентов одного или нескольких

(цельных, измельченных или

порошкообразных).

А. Растительные лекарственные средства, к которым перед

употреблением прибавляют кипящую воду.

- Общее число аэробных микроорганизмов не более 10⁷ и грибов не более 10⁵ в 1 г

или в 1 мл (2.6.12).

- Escherichia coli не более 10² в 1 г или в 1 мл (2.6.13), используя подходящее

разбавление.

Б. Растительные лекарственные средства, к которых перед употреб-

лением не прибавляют кипящую воду.

- Общее число аэробных микроорганизмов не более 10⁵ и грибов не более 10⁴ в 1 г

или в 1 мл (2.6.12).

- Энтеробактерий и других грамотрицательных бактерий не более 10³ в 1 г или 1 мл

(2.6.13).

- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл (2.6.13).

- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл (2.6.13).

# Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных

материалов, используемых при производстве лекарственных препаратов.

Категория 1.2

Субстанции и вспомогательные вещества для производства:

§ Стерильных лекарственных средств.

§ Нестерильных лекарственных средств, относящихся к Категории 2.

- Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) не более 10² в 1 г или в

1 мл.

- Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл.

- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл.

- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл.

Категория 2.2

§ Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных

лекарственных средств.

§ Вспомогательные вещества (мука пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)

- Общее число аэробных бактерий не более 10³ и грибов не более 10² в 1 г или в

1 мл.

- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл.

В случае использования субстанции для производства готового лекарственного

средства, в котором лимитируется содержание Salmonella, Pseudomonas aeruginosa,

Staphylococcus aureus, энтеробактерий, к данной субстанции должны предъявляться

следующие дополнительные требования:

- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл.

- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл.

- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл.

- Энтеробактерий - не более 10² в 1 г или в 1 мл.

Категория 3.2

Субстанции природного происхождения

(растительного, животного или

минерального).

- Общее число аэробных бактерий не более 10⁴ и грибов не более 10² в 1 г или в

1 мл.

- Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл.

- Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл.

- Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл.

- Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл.

- Энтеробактерий - не более 10² в 1 г или в 1 мл.

5.1.5 .ПРИМЕНЕНИЕ F₀ КОНЦЕПЦИИ ПРИ СТЕРИЛИЗАЦИИ ПАРОМ

ВОДНЫХ РАСТВОРОВ.

Настоящий раздел носит справочный характер.

Значение F₀ насыщенного пара в процессе стерилизации - это поражающее

действие, выраженное в терминах, эквивалентных времени в минутах при

температуре 121°С, относящееся к процессу производства на его конечной стадии в

сравнении с микроорганизмами, имеющими величину Z равную 10.

Общее значение F₀ процесса, включающего стадию нагревания и остывания,

может быть рассчитано объединением смертельных норм относительно времени в

дискретных температурных интервалах.

Если процесс паровой стерилизации выбран на основе F₀ концепции, большое

внимание должно быть уделено тому, чтобы полная стерилизация была постепенно

достигнута. В дополнение к валидации процесса, необходимо проведение

непрерывного строгого микробиологического контроля в ходе всего процесса, чтобы

доказать, что микробиологические параметры находятся в допустимых пределах не

более SAL 10^-6.

По отношению к паровой стерилизации величина Z - это величина, связы-

вающая термостойкость микроорганизмов к изменению температуры. Величина Z -

это изменение температуры, необходимое для изменения величины D на

10.

Величина D - параметр стерилизации (продолжительность или поглощенная доза),

обеспечивающий снижение числа жизнеспособных микроорганизмов до

10% от

исходного числа. Это величина, определенная при точных экспериментальных

условиях.

Для расчетов применяется следующее математическое выражение:

F₀ = D₁₂₁(logN₀- logN) = D₁₂₁log IF,

где D₁₂₁ - величина D стандартных спор (Приложение 1) при температуре 121°С;

N₀ - начальное число жизнеспособных бактерий;

N - конечное число жизнеспособных бактерий;

IF - коэффициент инактивации.

Z = (T₂-T₁)/logD₁ - logD₂),

где D₁ - величина D микроорганизмов при температуре Т₁.

D₂ - величина D микроорганизмов при температуре Т₂.

IF = N₀-N = 10^t/D,

где t - время экспозиции;

D - величина D микроорганизмов в условиях экспозиции.

5.2. ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ О ВАКЦИНАХ

5.2.1. ОБЩЕПРИНЯТАЯ ТЕРМИНОЛОГИЯ

В некоторых пунктах настоящей статьи в скобках приведены альтернативные

термины, которые обычно используются по отношению к ветеринарным вакцинам.

Эталонный банк культур микроорганизмов. Эталонный банк культур

микроорганизмов представляет собой систему, согласно которой последовательные

партии продукции производятся из одного и того же контрольного банка культур

микроорганизмов, при этом происхождение и история цикла изменений контрольных

посевов и семян и рабочего банка культур клеток записываются.

Контрольный банк культур микроорганизмов. Культура микроорганизма,

размещенная из общей массы по контейнерам, которые обрабатываются вместе в

рамках одной операции таким образом, чтобы обеспечить единообразие и

стабильность и предотвратить контаминацию. Контрольный банк культур

микроорганизмов в жидком виде хранится обычно при температуре не выше - 70 °С.

Лиофильно высушенный контрольный банк культур микроорганизмов хранится при

температуре, обеспечивающей стабильность.

Рабочий банк культур микроорганизмов. Культура микроорганизма,

полученная из контрольного банка культур микроорганизмов и предназначенная для

использования в производстве. Рабочий банк культур микроорганизмов помещают в

контейнеры и хранят, как описано выше для контрольного банка культур

микроорганизмов.

Система банков клеток (система посевов клеток). Национальная коллекция

перевиваемых линий и диплоидных штаммов клеток человека и животных, основной

функцией которой является ведение, сбор, характеристика (аттестация), сохранение

эталонных культур клеток (криобанк,

- 196 °С).

Контрольный банк культур клеток. Клеточная культура, размещенная из

общей массы по контейнерам в рамках одной операции, которые обрабатываются

вместе и хранятся таким образом, чтобы обеспечить единообразие и стабильность и

предотвратить контаминацию. Контрольный банк культур клеток хранится обычно

при температуре не выше - 70 °С.

Рабочий банк культур клеток. Клеточная культура, полученная из

контрольного банка и используемая в производстве перевиваемых линий клеток.

Рабочий банк культур микроорганизмов помещаются в контейнеры и хранят, как

описано выше для контрольного банка культур микроорганизмов.

Исходные клеточные культуры. Диплоидные линии или штаммы культур

клеток, сохраняющие исходные свойства ткани, из которой они получены.

Культура клеток. Клеточные культуры, обладающие высокой способностью к

размножению in vitro. В диплоидных штаммах культур клеток клетки обладают в

высшей степени теми же характеристиками, что и клетки ткани, из которой они

получены. В перевиваемых линиях культур клеток клетки способны расти

неограниченно долго и могут быть получены из здоровой ткани и опухолей.

Некоторые перевиваемые линии культур клеток при некоторых условиях имеют

онкогенный потенциал.

Производственная

клеточная

культура.

Клеточная

культура,

предназначенная для использования в производстве; может быть получена из

одного или нескольких контейнеров рабочего банка культур клеток (рабочего банка

культур микроорганизмов) или может представлять собой исходную клеточную

культуру.

Контрольные клетки. Некоторое количество клеток, которые при прививке

вируса откладываются в качестве неинфицированной клеточной культуры.

Неинфицированные клеточные культуры содержатся при условиях, аналогичных

тем, которые создаются для производства клеточных культур.

Однократный сбор. Материал, полученный в одном или нескольких случаях

из одной производственной клеточной культуры, привитой одному и тому же

рабочему банку культур микроорганизмов, или суспензия, полученная из рабочего

банка культур микроорганизмов, инкубированная и собранная в один

производственный период.

Моновалентный объединенный сбор. Объединенный материал,

содержащий один штамм, тип микроорганизма или антиген и полученный из

некоторого количества яиц, контейнеров с клеточными культурами и т.п., которые

обрабатываются одновременно.

Конечная масса вакцины. Материал, прошедший все стадии производства,

кроме конечного заполнения. Он состоит из одного или нескольких моновалентных

объединенных сборов из культур одного или нескольких видов микроорганизма

после очистки, растворения или добавления какого-либо активизирующего или

другого вспомогательного вещества. Он обрабатывается для обеспечения его

гомогенности и используется для заполнения контейнеров одной или нескольких

конечных партий (серий).

Конечная партия (серия). Совокупность закрытых конечных контейнеров или

других конечных единиц дозировки, которые считаются гомогенными и

равнозначными в отношении риска заражения во время заполнения или

приготовления конечной продукции. Единицы дозировки заполняются или готовятся

другим способом из одной и той же конечной массы вакцины, при необходимости

лиофильно высушиваются и запечатываются в рамках одного непрерывного

рабочего процесса. Они имеют отличительный номер или код, идентифицирующий

конечную партию

(серию). Если конечная масса вакцины разливается и/или

лиофильно высушивается в рамках нескольких рабочих процессов, это приводит к

появлению связанных конечных партий (серий), которые обычно идентифицируются

при помощи использования общей части в отличительном номере или коде; эти

связанные конечные партии (серии) иногда называются субсериями, субпартиями

или партиями заливки.

Комбинированная вакцина. Многокомпонентный препарат с рецептурой, при

которой одновременно вводятся различные антигены. Различные антигенные

компоненты предназначены для защиты от разных штаммов или типов одного и того

же организма и/или различных организмов. Комбинированная вакцина может

поставляться производителем как один жидкий или лиофильно высушенный

препарат или как несколько составляющих с инструкцией по смешиванию перед

применением.

5.2.2. СТАИ КУР, НЕ ИМЕЮЩИХ КОНКРЕТНЫХ ПАТОГЕНОВ И ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ

ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН И КОНТРОЛЯ ИХ КАЧЕСТВА

ВВЕДЕНИЕ

В случае, если это указано, цыплята, эмбрионы или клеточные культуры,

используемые при производстве или контроле качества вакцин, получают из яиц кур,

не зараженных конкретными патогенами

(НЗКП). Статус НЗКП стаи кур

обеспечивается по средствам описанной ниже системы. Приведенный список

микроорганизмов основан на имеющихся знаниях и при необходимости будет

дополняться.

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ И ПРОЦЕДУРЫ

Под стаей понимается группа птиц, проживающая в одном и том же

окружении, за которыми ухаживают лица, не имеющие контакта с зараженными

конкретными патогенами стаями. После определения границ стаи в нее не

добавляют зараженных конкретными патогенами птиц.

Для НЗКП стай, создаваемых на постоянной основе, все цыплята для замены

выводятся и выращиваются в курятниках с регулируемой средой. По договоренности

с компетентными органами в стаю могут добавляться НЗКП эмбрионы из

проверенной НЗКП стаи из другого курятника, расположенного в той же местности.

Начиная с возраста 8 недель эти птицы, предназначенные на замену, считаются

стаей, и за ними ведется ежемесячное наблюдение в соответствии с требованиями

«Последующего тестирования». Перед откладыванием яиц все эти птицы,

предназначенные на замену, проверяются в соответствии с требованиями

«Исходного тестирования».

Стая содержится в таких условиях, чтобы свести к минимуму вероятность

контаминации. Ее нельзя размещаться неподалеку от стай птиц, зараженных

конкретными патогенами. Стая должна содержаться в изоляторе или в здании с

фильтруемым воздухом с давлением выше атмосферного. Следует также принять

соответствующие меры для предотвращения доступа грызунов, диких птиц,

насекомых и лиц, не имеющих соответствующего разрешения.

Персонал, имеющий разрешение на вход в помещение, не должен иметь

контакта с другими птицами или веществами, которые могут инфицировать стаю.

Перед входом в курятник персоналу рекомендуется принимать душ и переодеваться

или надевать защитную одежду.

Предметы, которые приносятся в стаю, необходимо стерилизовать. Корм

должен соответствующим образом обрабатываться, чтобы избежать попадания

нежелательных микроорганизмов, а вода должна быть хлорированной. Нельзя

давать стае лекарств, которые могли бы помешать распознаванию болезни в стае.

Необходимо вести постоянные записи об общем здоровье стаи и

расследовать любые отклонения. Факторы, за которыми следует наблюдать,

включают: заболеваемость, смертность, общее физическое состояние, потребление

корма, ежедневное производство яиц и качество яиц, плодовитость и выводимость.

Грязные яйца должны выбрасываться; поверхность чистых яиц можно

продезинфицировать, пока они теплые.

Стая должна создаваться из птиц, проверки которых показали, что они не

заражены возбудителями, передающимися по вертикали. В частности, каждая

курица, из которой складывается стая, постоянно проверяется на заражение

вирусами лейкоза и отсутствие антител на них. Чтобы присвоить стае статус НЗКП,

она содержится в условиях НЗКП в течение тестового периода продолжительностью

не менее 4 месяцев. Через 6 недель и в конце тестового периода у каждой птицы в

стае должны отсутствовать признаки инфицирования микроорганизмами,

приведенными в разделе «Исходное тестирование».

Для каждого нового поколения в сложившейся стае все птицы в стае не

позднее, чем в возрасте

20 недель, проверяются с использованием тестов,

предусмотренных ниже в разделе

«Исходное тестирование». После

первоначального тестирования следует ежемесячно проводить тестирование

представительной выборки из 5 % птиц (но не менее десяти и не более двухсот

птиц) с использованием тестов, предусмотренных ниже в разделе «Последующее

тестирование», причем последний тест должен проводиться через 4 недели после

последнего сбора яиц.

Для всех тестов у соответствующего количества птиц в определенное время

берется проба крови. Получаемые в результате пробы сыворотки крови

проверяются на наличие антител на соответствующие микроорганизмы. Тесты на

нейтрализацию сыворотки проводятся на совокупностях не более пяти проб. Все

остальные тесты проводятся на каждой пробе сыворотки в отдельности. Во всех

тестах применяются положительные и отрицательные контрольные птицы. Все

используемые в тестах реагенты должны, по возможности, соответствовать

международным или европейским стандартам. При проведении теста на вирус

птичьего лейкоза в дополнение к тесту на антитела, выполняемому на пробах

сыворотки крови, следует брать соответствующие пробы для тестирования на этот

вирус.

Кроме серологических тестов, минимум раз в неделю необходимо проводить

клиническое исследование для подтверждения отсутствия заражения птиц птичьей

оспой и другими инфекциями. Для каждой умершей птицы следует проводить

вскрытие и, если есть необходимость подтверждения диагноза, гистопатологические

исследования для выявления признаков инфекции. Каждые 4 недели необходимо

проводить культуральный анализ проб экскрементов на наличие Salmonella; для

этих тестов можно использовать совокупность до 10 проб.

Если на любой из тестов, направленных на присвоение стае статуса НЗКП,

получен положительный результат, стая не может считаться НЗКП стаей. Если на

любой из тестов стаи со статусом НЗКП получен положительный результат, стая

теряет свой статус НЗКП. Особые условия применимы к возбудителю куриной

анемии (ВКА), как описано ниже. Любые куры, эмбрионы или клеточные культуры,

собранные после предыдущего отрицательного теста, непригодны для

использования: любую продукцию, полученную из них, следует выбросить, и все

тесты контроля качества, проведенные на них, считаются недействительными, и их

необходимо провести повторно.

Для повторного получения статуса НЗКП стая должна содержаться в НЗКП

условиях, должно продолжаться регулярное ежемесячное тестирование 5 % птиц, и,

кроме того, каждая птица в стае ежемесячно проверяется на инфицирование тем

возбудителем, на который была получена положительная реакция.

Инфицированные птицы и их потомство удаляются из стаи. Статус НЗКП может быть

возвращен после двух таких последовательных тестов, на которые была получена

полностью отрицательная реакция.

Положительная реакция на ВКА не исключает использование материала,

полученного от стаи, но живые вакцины для применения на птицах младше 7 дней

жизни должны производиться только с использованием материала от стай с

отрицательной реакцией на ВКА. Неактивированные вакцины для использования на

птицах младше 7 дней жизни могут производиться с применением материала от

стай, результаты анализа которых не показали незараженность ВКА, при условии,

что имеются доказательства того, что процесс инактивации инактивирует ВКА.

Постоянные записи уровня смертности и результатов тестирования стаи

необходимо хранить в течение минимум пяти лет. Данные о любых ухудшениях

производства яиц и выводимости, кроме случайных ухудшений, происхождение

которых было установлено как неинфекционное, и о результатах тестов,

показывающих инфекцию, вызванную конкретным возбудителем, должны

немедленно сообщаться лицам, использующим яйца.

ИСХОДНОЕ ТЕСТИРОВАНИЕ

В зависимости от соглашения с компетентным органом возможно

использование других типов тестов, при условии, что они как минимум так же

точны, как приведенные ниже тесты и имеют соответствующую

специфичность.

Микроорганизм

Тип теста

Птичий аденовирус

Ферментный иммуносорбентный анализ

Птичий вирус энцефаломиелита

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус

инфекционного

птичьего Ферментный иммуносорбентный анализ

бронхита

Вирус инфекционного птичьего

Нейтрализация сыворотки

ларинготрахеита

Вирусы птичьего лейкоза

Ферментный иммуносорбентный анализ

на вирус и нейтрализация сыворотки на

антитела

Вирус птичьего нефрита

Флюоресцирующее антитело

Птичьи реовирусы

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус птичьего ретикулоэндотелиоза

Флюоресцирующее антитело

Возбудитель птичьей анемии

Флюоресцирующее антитело

Гемагглютинирующий птичий

Подавление гемагглютинации

аденовирус (вирус синдрома снижения

яйценоскости 76 - ССЯ 76)

Вирус инфекционной бурсальной

Нейтрализация сыворотки для каждого

болезни

серотипа, присутствующего в стране

происхождения

Вирус гриппа А

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус заболевания Марека

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус ньюкаслской болезни

Подавление гемагглютинации

Вирус ринотрахеита индюшек

Ферментный иммуносорбентный анализ

Mycoplasma gallisepticum

Агглютинация и, для подтверждения

положительной реакции, подавление

гемагглютинации

Mycoplasma synoviae

Агглютинация, для подтверждения

положительной реакции, подавление

гемагглютинации

Salmonella pullorum

Агглютинация

ПОСЛЕДУЮЩЕЕ ТЕСТИРОВАНИЕ

В зависимости от соглашения с компетентным органом возможно

использование других типов тестов, при условии, что они как минимум так же

точны, как приведенные ниже тесты и имеют соответствующую

специфичность.

Микроорганизм

Тип теста

Птичий аденовирус

Ферментный иммуносорбентный анализ

Птичий вирус энцефаломиелита

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус

инфекционного

птичьего Ферментный иммуносорбентный анализ

бронхита

Вирус инфекционного птичьего

Нейтрализация сыворотки

ларинготрахеита

Вирусы птичьего лейкоза

Ферментный иммуносорбентный анализ

на вирус и нейтрализация сыворотки на

антитела

Вирус птичьего нефрита

Флюоресцирующее антитело

Микроорганизм

Тип теста

Птичьи реовирусы

Флюоресцирующее антитело

Вирус птичьего ретикулоэндотелиоза

Флюоресцирующее антитело

Возбудитель птичьей анемии

Флюоресцирующее антитело

Гемагглютинирующий птичий

Подавление гемагглютинации

аденовирус (вирус синдрома снижения

яйценоскости 76 - ССЯ 76)

Вирус инфекционной бурсальной

Иммунодиффузия для каждого

болезни

серотипа, присутствующего в стране

происхождения

Вирус гриппа А

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус заболевания Марека

Ферментный иммуносорбентный анализ

Вирус ньюкаслской болезни

Подавление гемагглютинации

Вирус ринотрахеита индюшек

Ферментный иммуносорбентный анализ

Mycoplasma gallisepticum

Агглютинация и, для подтверждения

положительной реакции, подавление

гемагглютинации

Mycoplasma synoviae

Агглютинация, для подтверждения

положительной реакции, подавление

гемагглютинации

Salmonella pullorum

Агглютинация

5.2.3. СУБСТРАТЫ КЛЕТОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВАКЦИН, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ

ЛЮДЬМИ

Эта общая глава касается диплоидных штаммов культур клеток и

перевиваемых линий культур клеток, используемых для производства вакцин для

применения людьми; конкретные вопросы, связанные с вакцинами,

приготовленными при помощи технологии рекомбинантной ДНК, описываются в

монографии «Продукции технологии рекомбинантной ДНК (0784)».

Тестирование, которое должно проводиться на различных этапах (клеточные

посевы, контрольный банк культур клеток, рабочий банк культур клеток, клетки на

максимальном уровне удваивания популяции или за его пределами, используемые

при производстве) приведены в Таблице 5.2.3.-1. Общие условия использования

культур и методов тестирования указаны ниже. Требования к использованию для

производства вакцины диплоидные линий или клеток, которые прошли несколько

пересевов без образования банка культур клеток, содержатся в отдельной

монографии о вакцине, о которой идет речь.

Диплоидные штаммы клеток. Диплоидная штаммы клеток обладает

высокой, но ограниченной способностью размножения in vitro.

Перевиваемые линии клеток. Перевиваемые линии клеток обладают

способностью неограниченного размножения

«in vitro»; клетки зачастую имеют

различия в кариотипе по сравнению с диплоидными линиями; их можно получить из

здоровой ткани или опухоли.

Для вакцин, предназначенных для инъекций, производимых в перевиваемых

линиях клеток, в процессе очистки обеспечивается снижение количества клеток-

субстратов ДНК до уровня, равного не более 10 нг на одну человеческую дозу, кроме

случаев, когда необходимо иное.

Система банк культур клеток. Производство вакцин с использованием

диплоидных и перевиваемых линий клеток основано на системе банков культур

клеток. Возраст клеток in vitro считается от контрольного банка культур клеток.

Каждый рабочий банк культур клеток готовится из одного или нескольких

контейнеров контрольного банка культур клеток. Использование, идентификация и

управление запасами контейнеров тщательно документируются.

Среды и субстанции животного или человеческого происхождения.

Состав сред, применяемых для изоляции и всей последующей культуры подробно

записывается, а применяемые субстанции животного происхождения не должны

иметь посторонних примесей.

При использовании человеческого альбумина необходимо обеспечить

соответствие монографии «Раствор человеческого альбумина (0255)».

Бычья сыворотка, применяемая при приготовлении и хранении клеточных

культур, должна тестироваться и быть стерильной и не зараженной бычьими

вирусами, в особенности вирусом бычьей диареи и микоплазмами.

Трипсин, используемый при приготовлении клеточных культур, должен

проверяться и быть стерильным и не зараженным микоплазмами и вирусами, в

особенности пестивирусами и парвовирусами

Посев клеток. Данные, необходимые для оценки пригодности посева клеток,

включают информацию об источнике, истории и характеристике, где это возможно.

Источник посева клеток. Для человеческих клеточных культур записывается

следующая информация о доноре: этническое и географическое происхождение,

возраст, пол, общее физиологическое состояние, использованная ткань или орган,

результаты каких-либо тестов на наличие патогенов.

Для животных клеточных культур записывается следующая информация об

источнике клеток: вид, штамм, условия разведения, географическое происхождение,

возраст, пол, общее физиологическое состояние, использованная ткань или орган,

результаты каких-либо тестов на наличие патогенов.

Клетки нейронального происхождения, такие как нейробластома и линии

клеток Р12, которые могут репродуцироваться возбудителем губчатообразной

энцефалопатии (их клетки чувствительны к прионам), не могут быть использованы

для производства вакцин.

История посева клеток. Записывается следующая информация: метод,

используемый для изоляции посева клеток, и любые другие процедуры,

применяемые для создания контрольного банка клеток, в особенности те, которые

могут подвергнуть клетки воздействию посторонних веществ.

Возможно, что полная информация об источнике происхождения культуры

клеток неизвестна. Где это оправдано и разрешено, банки культур клеток с

использованием таких культур, могут применяться в производстве таких вакцин.

Характеристика посева клеток. Следует изучить следующие свойства:

(1) природу клеток

(например, изоферменты, серология, состав нуклеиновой

кислоты);

(2) характеристики роста клеток и их морфологические свойства

(световые и

электронные микроскопы);

(3) для диплоидных клеток - кариотип;

(4) для диплоидных штаммов клеток - продолжительность жизни in vitro, выраженная

в уровне удвоения популяции.

Стабильность субстрата клеток. Необходимо продемонстрировать

соответствующую жизнестойкость культур клеток в предполагаемых условиях

хранения. Чтобы конкретный продукт мог быть подготовлен в культурах клеток,

необходимо продемонстрировать, что последовательное производство может быть

достигнуто с клетками на уровнях перехода в начале и в конце предполагаемого

срока использования.

Посторонние возбудители инфекций. Культур клеток для производства

вакцин не должны иметь посторонних возбудителей инфекций. Тесты на выявление

посторонних веществ проводятся, как показано в Таблице 5.2.3.-1.

В зависимости от происхождения и культуральной истории культур клеток

может потребоваться провести тесты на конкретные выбранные потенциальные

контаминанты, в особенности те, о которых известно, что они инфицируют вид, от

которого взяты клетки, в латентной форме, например, обезьяний вирус 40 у макак-

резусов. Для культур клеток, произошедших от грызунов, для определения вирусов,

характерных для конкретных видов, проводят тесты на выработку антител на

мышах, крысах и хомяках.

Ниже описано, как культур клеток анализируются на наличие ретровирусов.

Колонии клеток, в которых обнаружено присутствие ретровирусов, способных

размножаться, не подходят для производства вакцин.

Опухолеродность. Культура клеток для приготовления живых вакцин не

должна вызывать новообразований на любом уровне удвоения популяции,

используемом для производства вакцин. Если для производства других типов вакцин

используется культур клеток, вызывающая новообразования, процесс очистки

должен демонстрировать, что остаточное количество клеток-субстратов ДНК

снижено до 10 нг на одну человеческую дозу вакцины, кроме случаев, когда

предусмотрено иное, и что количество клеткок-субстратов белка снижено до

приемлемого уровня.

Культура клеток, о которой известно, что она может вызывать

новообразования, не нуждается в дальнейшем тестировании. Если культур клеток

имеет опухолеродный потенциал неизвестного характера, ее либо рассматривают

как опухолеродную, либо проверяют на опухолеродность с использованием теста in

vitro, описанного ниже. Если результат теста in vitro отрицательный или

неопределенно положительный, проводится приведенный ниже тест in vivo. Тесты

проводятся с использованием клеток на максимальном уровне удвоения популяции,

который будет применяться при производстве вакцин, или за его пределами.

Культуры клеток MRC-5, WI-38 и FRhL-2 признаны неопухолеродными и не

требуют дополнительного тестирования.

Хромосомная характеристика. Необходимо доказать, что диплоидный

штамм клеток имеет диплоидный набор хромосом. Если удаление неповрежденных

клеток во время обработки после сбора не подтвердилось, необходимо провести

более детальную характеристику диплоидной колонии клеток при помощи анализа

кариотипа. Необходимо исследовать пробы из четырех пересевах, равномерно

распределенных по всей протяженности жизни колонии клеток. Для точного

подсчета хромосом и частоты гиперплоидии, гипоплоидии, полиплоидии,

повреждений и структурных аномалий следует исследовать минимум 200 клеток в

метафазе.

Культуры клеток MRC-5, WI-38 и FRhL-2 признаны диплоидными и хорошо

охарактеризованными; если они не модифицированы генетически, дополнительные

характеристики не требуются.

Таблица 5.2.3.-1. Тестирование колоний клеток

Тест

Посев Контрольный

Рабочий

Клетки на

клеток

банк клеток

банк

максимальном

(КБК)

культур

уровне

клеток

удвоения

(РБК)

популяции,

или за его

пределами,

используемые

для

производства

1. ПРИРОДА И ЧИСТОТА

Морфология

Соответствующий

выбор из следующих

тестов: биохимический

(например,

изоферменты),

иммунологический

(например,

гистосовместимость),

цитогенетические

маркеры, состав

нулеиновой кислоты

Кариотип (диплоидные

+⁽¹⁾

колонии клеток)

Продолжительность

жизни (диплоидные

колонии клеток)

2. ПОСТОРОННИЕ ВЕЩЕСТВА

Заражение бактериями

или грибами

Микоплазмы

Тесты клеточных

культур

Совместная

+⁽²⁾

культивация

Тесты животных и яиц

+⁽²⁾

Конкретные тесты на

+⁽²⁾

возможные

загрязняющие

вещества в

зависимости от

происхождения клеток

(см. выше пункт

«Посторонние

возбудители

инфекций»

Ретровирусы

+⁽³⁾

3. ОПУХОЛЕРОДНОСТЬ

Опухолеродность

+⁽⁴⁾

⁽¹⁾Диплоидная природа устанавливается для каждого рабочего банка культур клеток,

но с использованием клеток на максимальном уровне удвоения популяции,

используемом для производства, или за его пределами.

⁽²⁾ Тестирование проводится для каждого рабочего банка культур клеток, но с

использованием клеток на максимальном уровне удвоения популяции,

используемом для производства, или за его пределами.

(3)

Тестирование проводится для контрольного банка культур клеток, но с

использованием клеток на максимальном уровне удвоения популяции,

используемом для производства, или за его пределами.

⁽⁴⁾Культура клеток MRC-5, культура клеток WI-38 и культура клеток RFhL-2 признаны

неопухолеродными и не требуют тестирования. Тесты не проводятся на колониях

клеток, о которых известно или предполагается, что они опухолеродны.

МЕТОДЫ ТЕСТИРОВАНИЯ ДЛЯ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР

Идентификация. Для установления природы клеток примените анализ

состава нуклеиновой кислоты и соответствующие из приведенных ниже тестов:

(1) биохимические характеристики (изоферментный анализ);

(2) иммунологические характеристики (антигены гистосовместимости);

(3) цитогенные маркеры.

Контаминация клеток. Анализ состава нуклеиновой кислоты, проводимый

для идентификации, служит также для того, чтобы продемонстрировать отсутствие

заражающих клеток.

Контаминация бактериями и грибами. Контрольный банк культур клеток и

каждый рабочий банк культур клеток должны проходить тест на стерильность

(2.6.1.), выполняемый с использованием 10 мл надосадочной жидкости из клеточных

культур для каждого средства. Тест должен проводиться на 1 % контейнеров, но как

минимум на 2 контейнерах.

Микоплазмы (2.6.7.). Контрольный банк культур клеток и каждый рабочий

банк культур клеток должны проходить тест на микоплазмы культуральным методом

и методом клеточной культуры-индикатора. В тесте должны участвовать один или

несколько контейнеров.

Тесты на микроорганизмы-контаминанты. Клетки должны проходить тест

на гемадсорбирующие вирусы и тесты клеточных культур на другие посторонние

вещества, приведенные в главе

2.6.16 под заголовком

«Производственная

клеточная культура: контрольные клетки». Если клетки взяты от обезьян, они, кроме

того, инокулируются в клеточные культуры печени кролика для выявления реакции

на вирус герпеса В (cercopithecid herpesvirus 1).

Совместная культивация. Необходимо культивировать неповрежденные и

поврежденные клетки отдельно с другими системами клеток, в том числе

человеческих клеток и обезьяньих клеток. Следует проводить исследования для

выявления возможных морфологических изменений. Тесты проводятся на жидкостях

клеточных культур для обнаружения гемагглютинирующих вирусов. Клетки проходят

тест, если не обнаружено доказательств наличия какого-либо постороннего

вещества.

Ретровирусы. Проверка присутствия ретровирусов осуществляется с

помощью использования:

(1) анализов на инфекционность;

(2) трансмиссионной электронной микроскопии;

(3) если тесты

(1) и

(2) дали отрицательную реакцию, проводится анализ на

обратную транскриптазу

(в присутствии магния и марганца) на гранулах,

полученных высокоскоростным центрифугированием.

Тесты на животных. Следует ввести внутримышечно (или, для мышей,

питающихся молоком матери, подкожно) в каждую из следующих групп животных 10⁷

жизнеспособных клеток, разделенных поровну между животными в каждой группе:

(1) два помета детенышей мыши в возрасте менее 24 часов, общим числом не

менее 10 животных;

(2) десять взрослых мышей.

Следует ввести интрацеребрально в каждую из десяти взрослых мышей 10⁶

жизнеспособных клеток для обнаружения возможного присутствия вируса

лимфоцитарного хориоменингита.

Наблюдение за животными осуществляется в течение минимум 4 недель.

Следует также обследовать заболевших животных или животных, у которых

наблюдаются аномалии, для определения причины заболевания. Клетки проходят

тест, если не обнаружено доказательств наличия какого-либо постороннего

вещества. Тест считается недействительным, если менее 80% животных в каждой

группе остаются здоровыми и доживают до конца периода наблюдения.

Для клеток, полученных от какого-либо вида грызуна

(например, клеток

яичников китайского хомяка или клеток почек детеныша хомяка), проводятся тесты

на антитела на возможных возбудителей вируса у исследуемого вида. Тесты

проводятся на животных, которым вводятся клетки.

Тесты на яйцах. Используя посевной материал в количестве

10⁶

жизнеспособных клеток на каждое яйцо, следует ввести клетки в аллантоисную

полость десяти НЗКП куриных яиц с эмбрионами внутри (5.2.2)

9-11-дневного

возраста и в желточный мешок десяти НЗКП куриных яиц с эмбрионами внутри 5-6-

дневной свежести. Выдержать в течение не менее

5 дней. Протестировать

аллантоисную жидкость на наличие гемагглютининов, используя эритроциты

млекопитающих и птиц; проводить тест при температуре 5 ± 3 °С и 20-25 °С и

прочитайте результат через

30 и

60 минут. Клетки проходят тест, если не

обнаружено доказательств наличия какого-либо постороннего вещества. Тест

считается недействительным, если менее 80 % эмбрионов остаются здоровыми и

доживают до конца периода наблюдения.

Тесты на опухолеродность in vitro. Возможно использование следующих

систем тестов:

(1) формирование колоний в мягком агаровом геле;

(2) получение инвазивного роста клеток после инокуляции в культуры органов;

(3) исследование трансформационной деятельности с использованием, например,

системы анализа 3Т3 для активных онкогенов.

Тесты на опухолеродность in vivo. Тест состоит в сравнительном анализе

исследуемой культуры клеток и соответствующим положительным контрольным

результатом (например, онкогенных культур HeLa или Hep2).

Системы животных, показавшие себя пригодными для этого теста, включают:

(1) атимичных мышей (генотип Nu/Nu);

(2) новорожденных мышей, крыс или хомяков, подвергшихся действию

антитимоцитной сыворотки или глобулина;

(3) облученных мышей с удаленной вилочковой железой, получивших костный мозг

от здоровых мышей (Т^-, В⁺).

При выборе любой из систем животных культура клеток и базовые клетки

вводятся при помощи инъекций в различные группы животных по 10 животных в

каждой. В обоих случаях прививочный материал из 10⁷ клеток в виде взвеси

объемом 0,2 мл вводится внутримышечно или подкожно. Новорожденным животным

вводится 0,1 мл антитимоцитной сыворотки или глобулина на 0, 2, 7 и 14 день после

рождения. Сильнодействующая сыворотка или глобулин подавляет иммунные

механизмы растущих животных до уровня, при котором последующее введение 10⁷

положительных базовых клеток регулярно вызывает опухоли и метастазы.

Животных, которые сильно поражены и у которых наблюдаются признаки постоянно

растущих опухолей, следует убивать, не дожидаясь конца теста, чтобы избежать

ненужных страданий.

В конце периода наблюдения всех животных, включая базовые группы,

убивают и исследуют на наличие макроскопических и микроскопических признаков

разрастания привитых клеток в месте инъекции и в других органах (например,

лимфатических узлах, легких, почках и печени).

Во всех тестовых системах животных следует наблюдать и ощупывать через

регулярные промежутки времени для обнаружения уплотнений в месте инъекции.

Любые сформировавшиеся уплотнения необходимо измерять в двух

перпендикулярных измерениях и регулярно записывать эти измерения для того,

чтобы определить, наблюдается ли прогрессивный рост уплотнений. Животных, у

которых в периоде наблюдения уплотнения начинают уменьшаться, убивают до

того, как уплотнения перестанут прощупываться, и подвергают гистологическому

исследованию. Животные с прогрессивно растущими уплотнениями наблюдаются в

течение 1-2 недель. Половина животных, у которых не наблюдается формирования

уплотнений, наблюдается в течение 3 недель, а вторая половина - в течение 12

недель до того, как их убивают и подвергают гистологическому исследованию.

Каждое животное подвергается вскрытию, которое включает обследование на

предмет макроскопических признаков формирования опухолей в месте инъекции и в

других органах, таких как лимфатические узлы, легкие, мозг, селезенка, почки и

печень. Все опухолеобразные образования в месте инъекции подвергают

гистологическому анализу. Кроме того, так как некоторые культуры клеток могут

вызвать метастазы без признаков местного роста опухоли, необходимо провести

гистологическое исследование всех обнаруживаемых местных лимфатических узлов

и легких животных.

Тест считается недействительным, если менее чем у девяти из десяти

животных, которым были введены положительные базовые клетки, наблюдаются

прогрессивно растущие опухоли.

5.2.6. ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ВАКЦИН

Во время разработки вакцины на виде, для которого она предназначена,

проводятся тесты, демонстрирующие риски применения вакцины. Живые вакцины

готовятся только из штаммов организмов, безопасность которых подтверждена.

В тестах

«доза» означает количество продукции, которое будет

рекомендовано для применения, содержащее максимальный титр или

эффективность, который будет характерен для производственных серий. Для живых

вакцин серия или серии вакцины, приготовленная из самого мощного цикла, который

будет использоваться при производстве, должна участвовать в тестировании.

Безопасность каждой составляющей комбинированных вакцин и безопасность

комбинированного продукта должна быть доказана. Для инактивированных вакцин

тесты на безопасность, проводимые на комбинированной вакцине, должны

считаться достаточными для демонстрации безопасности отдельных компонентов.

Тесты, описанные ниже, модифицированные или дополненные тестами,

приведенными в разделе «Производство» соответствующей монографии, могут

выполняться в качестве части тестов, необходимых для демонстрации безопасности

вакцины во время ее разработки.

А. ЛАБОРАТОРНЫЕ ТЕСТЫ

Безопасность применения одной дозы. Для каждого из рекомендуемых

способов применения дайте по одной дозе восприимчивым животным каждого вида

и категории, для которой будет предназначена вакцина. Среди этих животных

должны находиться животные в самом раннем рекомендуемом возрасте и

беременные животные, если возможно. Животные должны наблюдаться и

обследоваться на наличие признаков ненормальных местных и соматических

реакций. Где это уместно, исследования должны включать подробные

макроскопические и микроскопические исследования места инъекции, проводимые

после смерти животного; обычно такие исследования не нужны для животных, не

используемых в пищу. Следует вести записи других объективных критериев, таких

как ректальная температура

(у млекопитающих), и измерения характеристик

животного. Ректальная температура записывается минимум за день перед

вакцинацией, во время вакцинации, через

4 часа после вакцинации и в

последующие 4 дня. Наблюдение и обследование животных проводится до тех пор,

пока можно ожидать реакции, но в некоторых случаях период наблюдения и

обследования продлевается до минимум 14 дней после применения вакцины.

В качестве части этих исследований следует рассматривать обследование

репродуктивной функции животного, когда имеются данные о том, что исходный

материал, из которого была получена продукция, может представлять фактор риска.

Где это предписывается монографией, проводится исследование репродуктивной

функции самцов и беременных и небеременных самок, а также вредное воздействие

на их потомство, включая тератогенное и абортивное воздействие.

Безопасность однократного применения превышенной дозы. Для каждого

из рекомендуемых способов применения следует дать по одной превышенной дозе

наиболее восприимчивой категории животных, для которых будет предназначена

вакцина, включая животных в самом раннем возрасте и беременных животных, если

возможно.обычно превышенная доза представляет собой 10 доз живой вакцины или

2 дозы инактивированного продукта. Животные должны наблюдаться и

обследоваться на наличие признаков местных и соматических реакций. Следует

вести записи других объективных критериев, таких как ректальная температура (у

млекопитающих), и измерения характеристик животного. Наблюдение и

обследование животных должно вестись в течение не менее 14 дней после приема

вакцины.

Безопасность повторного применения одной дозы. Для выявления каких-

либо отрицательных воздействий повторного применения одной дозы необходимо

дать наиболее восприимчивой категории животных, для которых предназначена

вакцина, повторную дозу, используя рекомендуемый способ применения. Животных

следует наблюдать и исследовать в течение не менее 14 дней после последнего

применения для выявления признаков соматических и местных реакций. Следует

вести записи других объективных критериев, таких как ректальная температура (у

млекопитающих), и измерения характеристик животного.

Остаточные вещества. Обычно нет необходимости в исследованиях наличия

остаточных веществ. Однако если в производстве ветеринарных вакцин

применяются вспомогательные лекарственные средства и/ или консерванты,

следует учитывать вероятность попадания остаточных веществ в продукты питания.

При необходимости следует исследовать воздействие этих остаточных веществ.

Кроме того, в дополнение к исследованиям распространения микроорганизмов,

описанным ниже, в случае с живыми вакцинами от установленных зоонотических

заболеваний может потребоваться определение остаточных организмов вакцины в

месте инъекции.

Отрицательное воздействие иммунологических функций. Если вакцина

может оказать отрицательное воздействие на иммунную реакцию вакцинированного

животного или его потомства, необходимо провести соответствующие тесты

иммунологических функций.

Особые требования к живым вакцинам. Живые вакцины должны проходить

следующие лабораторные тесты.

а) Распространение штамма вакцины. Распространение штамма вакцины от

вакцинированных к невакцинированным животным, для которых предназначена

вакцина, исследуется с применением рекомендуемого способа приема вакцины,

который вероятнее всего может вызвать такое распространение. Кроме того, может

быть необходимо изучить безопасность от распространения к виду, на который не

рассчитана вакцина и который может оказаться очень восприимчив к данному

штамму живой вакцины. Следует провести оценку того, сколько переходов штамма

от животного к животному возможно при нормальных обстоятельствах, а также

оценку вероятных последствий.

б) Распространение в вакцинированном животном. Необходимо провести тесты

экскрементов, мочи, молока, яиц, секреции ротовой, носовой полости и других

выделений на присутствие конкретного организма. Кроме того, могут потребоваться

исследования распространения штамма вакцины в теле животного, причем особое

внимание следует уделить местам, в которых склонны размножаться организмы. В

случае с живыми вакцинами от установленных зоонотических заболеваний у

животных, производящих продукты питания, такие исследования обязательны.

в) Реверсия вирулентности или ее увеличение. Для разведенных вакцин

используйте наименее разведенный материал уровня цикла для животных, для

которых они предназначены, между контрольной партии посевов и конечной

продукцией. Для других живых вакцин используйте материал того цикла, который

имеет вероятность наибольшей вирулентности для вида, для которого

предназначена вакцина. Первоначальная вакцинация должна проводится с

применением рекомендованного способа вакцинации, который имеет наибольшую

вероятность вызова реверсии вирулентности. После этого нужно предпринять не

менее пяти дополнительных последовательных циклов через животных, для которых

предназначена вакцинация. Если это невозможно технически из-за неспособности

организмов воспроизводиться на должном уровне, тест повторяется, и в виде, для

которого предназначена вакцина, проводится столько циклов, сколько возможно.

При необходимости можно провести размножение организма in vitro между двумя

циклами in vivo. Циклы проводятся тем способом применения вакцины, который

вероятнее всего приведет к реверсии вирулентности. Для каждого цикла

используется не менее двух полностью восприимчивых животных. На каждом цикле

демонстрируется присутствие живых вызванных вакциной организмов, в материале,

использованном для цикла. Проводится сравнение с безопасностью материала от

наиболее высокого удачного цикла с безопасностью материала, не участвовавшего

в циклах.

Что касается конкретных вирусов, монография может требовать большее

количество циклов в большем количестве животных, если имеющиеся данные

указывают на то, что это необходимо. Как минимум конечный цикл проводится с

использованием животных, которые наиболее подходят для оценки потенциального

риска.

г) Биологические свойства штамма вакцины. Для как можно более точного

определения внутренних биологических свойств штамма вакцины

(например,

нейротропизма) могут потребоваться другие тесты. Для векторных вакцин

проводится оценка риска изменения тропизма или вирулентности штамма и, при

необходимости, определенные тесты. Такие тесты систематически проводятся, если

в штамм в качестве структурного протеина включается посторонний генный продукт.

д) Рекомбинация или геномная перестройка штамма. Следует учитывать

вероятность рекомбинации или геномной перестройки полевых или других штаммов.

Б. ПОЛЕВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты лабораторных исследований должны обычно дополняться

подкрепляющими данными от полевых исследований.

ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 49