ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год)

Параллельно проводят контрольный опыт.

Таблица 2.5.4.-3

Предполагаемое значение

Масса навески вещества, в граммах

от 0 до 30

от 1,1 до 0,7

от 31 до 50

от 0,7 до 0,5

от 51 до 100

от 0,5 до 0,25

от 101 до 150

от 0,25 до 0,15

более 150

менее 0, 15

# При анализе твердых жиров навеску растворяют в

6 мл эфира Р,

прибавляют 20,0 мл 0,1 М раствора йода хлорида Р. Дальнейшее определение

проводят как указано выше.

2.5.5. ПЕРЕКИСНОЕ (ПЕРОКСИДНОЕ) ЧИСЛО

I называют количество эквивалентов (в

ммоль) активного кислорода, соответствующее количеству пероксидов,

содержащееся в

1000 г испытуемого вещества, определяемое методами,

приведенными ниже.

Если нет указаний в частной статье, используют метод А. Замена метода

А методом Б в этом случае требует проведения валидации.

МЕТОД А

Около

5,00 г испытуемого вещества помещают в коническую колбу с

притертой стеклянной пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют 30 мл смеси:

хлороформ Р

- кислота уксусная ледяная Р

(2:3). Колбу встряхивают до

растворения вещества, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора калия йодида

Р, перемешивают в течение 1 мин и прибавляют 30 мл воды Р. Полученный раствор

титруют 0,01 М раствором натрия тиосульфата, медленно добавляя титрованный

раствор при непрерывном перемешивании почти до полного исчезновения желтой

окраски. Затем прибавляют 5 мл раствора крахмала Р и продолжают титровать,

интенсивно перемешивая до обесцвечивания раствора.

Параллельно проводят контрольный опыт.

Объем 0,01 М раствора натрия тиосульфата Р, израсходованный на

титрование в контрольном опыте, не должен превышать 0,1 мл.

Пероксидное число рассчитывают по формуле:

10×(V

1 -

)

где:

— объем 0,01 М раствора натрия тиосульфата, израсходованный на

титрование испытуемого вещества, в миллилитрах;

— объем 0,01 М раствора натрия тиосульфата, израсходованный на

титрование в контрольном опыте, в миллилитрах;

m — масса навески испытуемого вещества, в граммах.

МЕТОД В

Испытания проводят в защищенном от света месте.

Навеску испытуемого вещества, в соответствии с таблицей 2.5.5.-1, помещают

в коническую колбу с притертой стеклянной пробкой, прибавляют 50 мл смеси:

триметилпентан Р - кислота уксусная ледяная Р (2:3).

Таблица 2.5.5.-1

Предполагаемое значение

Масса навески испытуемого

пероксидного числа

вещества, в граммах

от 0 до 12

от 2,00 до 5,00

от 12 до 20

от 1,20 до 2,00

от 20 до 30

от 0,80 до 1,20

от 30 до 50

от 0,500 до 0,800

от 50 до 90

от 0,300 до 0,500

Колбу закрывают пробкой и содержимое перемешивают до растворения

вещества. К полученному раствору мерной пипеткой прибавляют

0,5 мл

насыщенного раствора калия йодида Р. Колбу закрывают пробкой, оставляют на

60 ± 1 с, тщательно встряхивая раствор не менее трех раз, прибавляют 30 мл воды

Р и титруют 0_,1 М раствором натрия тиосульфата, добавляя титрованный раствор

постепенно при постоянном и интенсивном перемешивании почти до полного

исчезновения желтой окраски йода. Затем прибавляют около 0,5 мл раствора

крахмала Р1 и продолжают титрование при постоянном интенсивном

перемешивании вблизи точки эквивалентности с целью полного высвобождения

йода из слоя органического растворителя. Раствор натрия тиосульфата прибавляют

по каплям, до исчезновения синей окраски.

Если объем 0,1 М раствора натрия тиосульфата, израсходованный на

титрование, менее 0,5 мл, определение повторяют с 0,01 М раствором натрия

тиосульфата при постоянном и интенсивном перемешивании.

Примечание: Для пероксидных чисел около 70 и более наблюдается задержка

обесцвечивания индикатора крахмала от

15 с до

30 с, что обусловлено

способностью триметилпентана всплывать на поверхность водной фазы. Поэтому

необходимо время для смешивания растворителя с титрованным раствором для

полного высвобождения йода. Для пероксидных чисел менее

15 рекомендуют

использовать 0,01 М раствор натрия тиосульфата. С целью предотвращения

расслоение фаз и быстрого высвобождения йода, к реакционной смеси допускается

прибавление небольшого количества (0,5 % - 1 % (м/м)) эмульгатора с высоким

гидрофильно-липофильным балансом (ГЛБ).

Параллельно проводят контрольный опыт.

Если объем титрованного раствора, израсходованный на титрование в

контрольном опыте, превышает

0,1

мл, испытание повторяют со

свежеприготовленными реактивами.

I рассчитывают по формуле:

×(V

-V

)×c

=¹⁰⁰⁰

где:

с - концентрация раствора натрия тиосульфата, в молях на литр;

- объем раствора натрия тиосульфата, израсходованный на титрование

вещества, в миллилитрах;

- объем раствора натрия тиосульфата, израсходованный на титрование в

контрольном опыте, в миллилитрах;

т - масса навески испытуемого вещества, в граммах.

2.5.6. ЧИСЛО ОМЫЛЕНИЯ

Числом омыления

называют массу (в мг) калия гидроксида, необходимую

для нейтрализации свободных кислот и омыления сложных эфиров, содержащихся в

1 г испытуемого вещества.

Навеску испытуемого вещества (в соответствии с Табл.2.5.6.-1, если нет

других указаний в частной статье) помещают в колбу из боросиликатного стекла

вместимостью 250 мл, снабженную обратным холодильником.

# Если испытуемое вещество в целях консервации было насыщено углерода

диоксидом, перед взвешиванием его выдерживают в выпарительной чашке в

течение 24 ч в вакуум-эксикаторе.

Таблица 2.5.6.-1

Предполагаемое значение числа

Масса навески испытуемого вещества,

омыления

в граммах

от 3 до 10

от 12 до 15

от 10 до 40

от 8 до 12

от 40 до 60

от 5 до 8

от 60 до 100

от 3 до 5

от 100 до 200

от 2,5 до 3

от 200 до 300

от 1 до 2

от 300 до 400

от 0,5 до 1

Прибавляют

25,0 мл

0,5 М раствора калия гидроксида спиртового и

несколько стеклянных шариков. К колбе присоединяют обратный холодильник и

нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, если нет других указаний в

частной статье. Прибавляют 1 мл раствора фенолфталеина Р1 и горячий раствор

тотчас титруют 0,5 М раствором кислоты хлористоводородной.

Параллельно проводят контрольный опыт.

Число омыления Is вычисляют по формуле:

28,5×(V

-V

)

где:

V1 — объем 0,5 М раствора кислоты хлористоводородной, израсходованный на

титрование испытуемого вещества, в миллилитрах;

V2 — объем 0,5 М раствора кислоты хлористоводородной, израсходованный на

титрование в контрольном опыте, в миллилитрах;

т - масса навески испытуемого вещества, в граммах;

28,05 - масса калия гидроксида, соответствующая 1 мл 0,5 М раствора кислоты

хлористоводородной, в миллиграммах.

2.5.7. НЕОМЫЛЯЕМЫЕ ВЕЩЕСТВА

Термин «Неомыляемые вещества» применяется к веществам, нелетучим при

температуре от

100ºС до

105ºС, которые экстрагируются органическим

растворителем из испытуемого вещества после его омыления. Содержание

неомыляемых веществ вычисляют в процентах (м/м).

Следует использовать стеклянную посуду со шлифами без смазки.

Навеску испытуемого вещества (m, г), указанную в частной статье, помещают

в колбу вместимостью 250 мл, снабженную обратном холодильником. Прибавляют

50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р и нагревают на водяной бане в

течение 1 ч, периодически перемешивая круговыми движениями. Затем охлаждают

до температуры ниже

25ºС и количественно переносят содержимое колбы в

делительную воронку с помощью 100 мл воды Р. Полученный раствор осторожно

встряхивают с тремя порциями эфира, свободного от пероксидов, Р по 100 мл

каждая. Все эфирные извлечения собирают в отдельную делительную воронку, в

которую предварительно помещают 40 мл воды Р, осторожно встряхивают в течение

нескольких минут, позволяют смеси полностью расслоиться, после чего

отбрасывают водный слой. Эфирный слой промывают двумя порциями воды Р, по

40 мл каждая. Затем тщательно промывают поочередно 40 мл 30 г/л раствора калия

гидроксида Р и 40 мл воды Р; повторяют данную процедуру три раза. Затем

эфирный слой несколько раз промывают 40 мл воды Р, до отсутствия щелочной

реакции в водном слое по фенолфталеину. Эфирный слой количественно переносят

в доведенную до постоянной массы колбу с помощью эфира, свободного от

пероксидов Р.

Эфир отгоняют с соответствующими предосторожностями и к остатку

прибавляют 6 мл ацетона Р. Затем аккуратно удаляют растворитель в потоке

воздуха. Остаток в колбе сушат до постоянной массы при температуре от 100ºС до

105ºС, охлаждают в эксикаторе и взвешивают (а, г).

Содержание неомыляемых веществ вычисляют по формуле:

100×а

Неомыляемые вещества

где:

а - масса остатка, г;

m - масса испытуемого вещества, г.

Остаток растворяют в 20 мл спирта Р, предварительно нейтрализованного по

раствору фенолфталеина Р, и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида

спиртовым. Если объем

0,1 М раствора натрия гидроксида спиртового,

пошедшего на титрование, более 0,2 мл, расслоение слоев прошло не полностью;

при этом взвешенный остаток не может рассматриваться как

«Неомыляемые

вещества». В этом случае испытания необходимо повторить.

2.5.8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИННОГО АЗОТА В СОЕДИНЕНИЯХ, КОТОРЫЕ

СОДЕРЖАТ ПЕРВИЧНУЮ АРОМАТИЧЕСКУЮ АМИНОГРУППУ

# Нитритометрическое титрование применяют для количественного

определения соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую

аминогруппу, для определения гидразидов, а также ароматических нитросоединений

после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы.

Растворяют указанное количество испытуемого вещества в 50 мл кислоты

хлористоводородной разбавленной Р или в другом указанном растворителе и

прибавляют 3 г калия бромида Р. Охлаждают в воде со льдом и затем медленно

титруют, при постоянном перемешивании,

0,1 М раствором натрия нитрита

поддерживая температуру раствора около 15°C, если нет других указаний в частной

статье.

# Перед началом титрования прибавляют 0,1 М раствор натрия нитрита со

скоростью

2 мл/мин. К концу титрования

(приблизительно за

0,5 мл до

эквивалентного количества) скорость титрования уменьшают до 0,05 мл/мин.

# Конечную точку титрования определяют электрометрическими методами

(2.2.19 или

2.2.20) или с помощью внутренних индикаторов, или внешнего

индикатора.

# При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного электрода

применяют платиновый электрод, электродом сравнения служит хлоридсеребряный

или насыщенный каломельный электрод.

# В качестве внешнего индикатора используют йодкрахмальную бумагу.

Титрование проводят, пока через 1 мин, если нет других указаний в частной статье,

после прибавления 0,1 М раствора натрия нитрита капля титруемого раствора,

взятая с помощью стеклянной палочки, не будет вызывать синее окрашивание

бумаги. Параллельно проводят контрольный опыт.

# В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин

00 (0,2 мл

раствора тропеолина 00 Р), тропеолин в смеси с метиленовым синим (0,2 мл

раствора тропеолина 00 Р и 0,1 мл раствора метиленового синего Р) или раствор

нейтрального красного 5 г/л (0,1 мл раствора в начале титрования и 0,1 мл в конце

титрования). Титрование с тропеолином

00 проводят до перехода окраски от

красной к желтой, со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим - от красно-

фиолетовой к голубой, с нейтральным красным - от красно-фиолетовой к синей.

Выдержку в конце титрования с нейтральным красным увеличивают до 2 мин.

2.5.9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА ПОСЛЕ МИНЕРАЛИЗАЦИИ СЕРНОЙ КИСЛОТОЙ

# Прибор для определения азота (Рис. 2.5.9.-1) состоит из парообразователя

1 с предохранительной трубкой 2, сменных грушевидных колб с длинным горлом 3,

воронки для ввода раствора натрия гидроксида

4 с зажимом или краном

брызгоуловителя

6, прямого холодильника

7 и сменных конических колб

приемников 8. В случае применения прибора, в котором для соединения отдельных

частей используются резиновые трубки и пробки, перед первым употреблением их

необходимо прокипятить в течение 10 мин в 5% растворе натрия гидроксида и

тщательно промыть водой Р.

ПОЛУМИКРОМЕТОД

Указанную массу испытуемого вещества (m, г), содержащего около 2 мг азота,

помещают в колбу для сжигания, прибавляют 4 г измельченной смеси, состоящей из

100 г калия сульфата Р, 5 г меди сульфата Р и 2,5 г селена Р, и три стеклянных

шарика. Смывают прилипшие к горлу колбы частицы 5 мл кислоты серной Р, таким

образом, чтобы кислота стекала по стенкам колбы. Содержимое колбы

перемешивают круговыми движениями. Во избежание чрезмерных потерь серной

кислоты горло колбы неплотно закрывают пробкой

(например, подходящей

грушевидной пробкой с коротким отростком). Колбу нагревают, постепенно доводя

до кипения с конденсацией серной кислоты в горле колбы; при этом необходимо

следить за тем, чтобы верхняя часть колбы не перегревалась. Нагревание

продолжают в течение

30 мин, если нет других указаний в частной статье.

Охлаждают, растворяют твердый остаток, осторожно прибавляя к смеси 25 мл воды

Р, опять охлаждают и подсоединяют к прибору для перегонки с водяным паром.

Прибавляют

30 мл раствора натрия гидроксида концентрированного Р и

немедленно перегоняют, пропуская пар через смесь. Собирают около 40 мл отгона в

приемник, содержащий 20,0 мл 0,01 М раствора кислоты хлористоводородной и

достаточное количества воды Р для того, чтобы конец холодильника был погружен в

жидкость. В конце перегонки приемник опускают таким образом, чтобы конец

холодильника находился над поверхностью жидкости. Необходимо исключить

попадание жидкости на внешнюю поверхность холодильника из содержимого

приемника.

# По окончании отгонки конец холодильника промывают снаружи небольшим

количеством воды Р, собирая промывную воду в тот же приемник.

Отгон титруют 0,01 М раствором натрия гидроксида, используя в качестве

индикатора смешанный раствор метилового красного Р до перехода окраски из

красно-фиолетовой в зеленую (V₁ мл 0,01 М раствора натрия гидроксида).

Испытания повторяют, используя вместо испытуемого вещества около 50 мг

глюкозы Р.

0,01401×(V

-V

)

Содержание азота

где:

m - масса испытуемого вещества, г;

V1 - объем

0,01 М раствора натрия гидроксида, пошедшего на титрование

раствора, полученного после сжигания испытуемого вещества, мл;

V2 - объем

0,01 М раствора натрия гидроксида, пошедшего на титрование

раствора, полученного после сжигания глюкозы, мл.

Рис. 2.5.9.-1. Прибор для определения азота

2.5.10. МЕТОД СЖИГАНИЯ В КОЛБЕ С КИСЛОРОДОМ

# Сущность метода сжигания органических веществ в колбе с кислородом

состоит в разрушении органических веществ сожжением в атмосфере кислорода,

дальнейшем растворении образовавшихся продуктов горения в поглощающей

жидкости и последующем определении элементов, которые находятся в растворе в

виде ионов. Метод обычно используют для определения галогенов (хлора, брома,

йода, фтора), серы и фосфора.

# Если не указано иное, колба для сжигания это коническая колба

вместимостью от 750 мл до 1000 мл из термостойкого стекла со шлифом. В пробку

колбы впаяна платиновая проволока диаметром около 0,75 мм с корзиночкой или

спиралью на конце (держатель образца) (Рис. 2.5.10.-1), который находится на

расстоянии около 2 см от дна колбы. Колба для сжигания должна быть тщательно

вымыта и свободна от следов органических веществ и растворителей.

Указанное в частной статье количество мелкоизмельченного вещества

помещают в центр фильтровальной бумаги размером от

30 мм до 40 мм с

небольшой полосой шириной 10 мм и длиной 30 мм.

# Фильтровальную бумагу (Рис. 2.5.10.-2) заворачивают в виде пакетика,

оставляя узкую полоску. В случае испытания жидкостей, их помещают в капилляр,

запаянный парафином, или в капсулу из полиэтилена, нитропленки или

метилцеллюлозы. Для трудно летучих жидкостей возможно применение двойного

бумажного пакетика. При испытании мазеподобных веществ применяют капсулу из

нитропленки или пакет из вощёной бумаги. Капсулы и капилляры заворачивают в

пакетик из фильтровальной бумаги, оставляя узкую полоску. При анализе твердых и

мазеобразных соединений, сгорающих со вспышкой, к навеске прибавляют 3-5 мг

парафина. Приготовленную пробу помещают в держатель.

Если в частной статье указана бумага, пропитанная лития карбонатом, перед

использованием центр бумаги увлажняют насыщенным раствором лития

карбоната Р и сушат в сушильном шкафу. Испытуемое вещество заворачивают в

бумагу и помещают в держатель образца. Помещают в колбу воду Р или указанный

раствор, предназначенный для поглощения продуктов горения. С помощью трубки,

конец которой находится выше уровня жидкости, вытесняют воздух из колбы,

пропуская поток кислорода. Смачивают горловину колбы водой Р, поджигают узкий

конец фильтровальной бумаги с соблюдением мер предосторожности и закрывают

колбу пробкой.

# Для соблюдения мер предосторожности необходимо: надеть защитные очки,

колбу поместить в предохранительный чехол, установить защитный экран.

Во время сжигания необходимо придерживать пробку колбы рукой. После

сжигания колбу энергично встряхивают до полного растворения продуктов горения.

Колбу охлаждают в течение

5 мин, если нет других указаний, и осторожно

открывают. Обмывают дно, стенки колбы и держатель образца водой Р. Объединяют

продукты горения и жидкость после промывки. Определение проводят методом,

указанным в частной статье.

Рис. 2.5.10.-1. Прибор для сжигания в

кислороде

Рис. 2.5.10.-2. Фильтровальная бумага

для приготовления пакетика

2.5.11. КОМПЛЕКСОМЕТРИЧЕСКОЕ ТИТРОВАНИЕ

# Комлексометрическое титрование

- это группа методов титрования,

основанных на реакциях образования растворимых в воде комплексных соединений.

Комплексонометрическое

титрование

как

частный

случай

комплексометрического титрования основано на реакции комплексообразования

катионов металлов с комплексонами - аминополикарбоновыми кислотами и их

солями. Образующиеся комплексные соединения называют комплексонатами.

# Для комплексонометрического титрования в качестве титранта обычно

применяют динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, известную под

названиями: натрия эдетат, трилон Б, комплексон III, хелатон III и др.

# Натрия эдетат образует с катионами многовалентных металлов устойчивые

и хорошо растворимые в воде комплексонаты в стехиометрическом отношении 1:1 и

используется для количественного определения алюминия, висмута, кальция,

свинца, магния и цинка в лекарственных средствах.

# Индикаторы, применяемые для визуального обнаружения конечной точки

титрования, называются металлоиндикаторами. Большинство из них

(металло

хромные индикаторы) являются органическими красителями и обладают свойством

изменять окраску при образовании комплексных соединений с катионами металлов.

Металлоиндикаторы для комплексонометрии подбирают таким образом, чтобы их

взаимодействие с катионами определяемых металлов было обратимым и

устойчивость их комплексов была значительно меньше устойчивости

комплексонатов, образующихся в процессе титрования.

# Прямое титрование растворами натрия эдетата проводят следующим

образом: к анализируемому раствору, если необходимо, нейтрализованному,

прибавляют буферный раствор для создания требуемого значения рН, затем

прибавляют металлоиндикатор. В процессе титрования раствором натрия эдетата в

конечной точке титрования окраска раствора изменяется от окраски комплекса

металлоиндикатора с титруемым катионом металла до окраски свободного

металлоиндикатора.

# При обратном титровании к испытуемому раствору прибавляют натрия

эдетат и его избыток оттитровывают при определенном значении рН в присутствии

соответствующего металлоиндикатора растворами солей цинка, магния, свинца и

др.

# Допускается использование в качестве титранта 0,05 М раствор натрия

эдетата, что должно быть указано в частной статье.

АЛЮМИНИЙ

20,0 мл раствора, указанного в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл, прибавляют 25,0 мл 0,1 М раствора натрия эдетата и 10

мл смеси равных объемов раствора 155 г/л аммония ацетата Р и кислоты

уксусной разведенной Р, кипятят в течение 2 мин и затем охлаждают. Прибавляют

50 мл этанола Р и 3 мл свежеприготовленного 0,25 г/л раствора дитизона Р в

этаноле Р. Титруют избыток натрия эдетата 0,1 М раствором цинка сульфата до

перехода зеленовато-синей окраски раствора в красно-фиолетовую.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 2,698 мг AI.

# Допускается проводить определение алюминия по следующей методике:

Точную навеску испытуемого вещества, эквивалентную 0,02-0,03 г алюминия,

растворяют в 2 мл 1 М раствора кислоты хлористоводородной и 50 мл воды Р.

Прибавляют

50 мл

0,05 М раствора натрия эдетата и нейтрализуют

1 М

раствором натрия гидроксида, используя в качестве индикатора метиловый

красный Р. Раствор нагревают до кипения и выдерживают на кипящей водяной бане

в течение

10 мин, охлаждают, прибавляют

50 мг индикаторной смеси

ксиленолового оранжевого Р, 5 г гексаметилентетрамина Р и титруют избыток

натрия эдетата

0,05 М раствором свинца нитрата до розовато-фиолетового

окрашивания.

1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата соответствует 1,349 мг AI.

ВИСМУТ

Раствор, указанный в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл. Доводят объем водой Р до 250 мл и затем, если нет других

указаний в частной статье, прибавляют по каплям, при перемешивании, раствор

аммиака концентрированный Р до помутнения смеси. Затем прибавляют 0,5 мл

кислоты азотной Р, нагревают при температуре около

70°C до полного

исчезновения помутнения. Прибавляют около

50 мг индикаторной смеси

ксиленолового оранжевого Р и титруют 0,1 М раствором натрия эдетата до

перехода розовато-фиолетовой окраски раствора в желтую.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 20,90 мг Bi.

КАЛЬЦИЙ

Раствор, указанный в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл и доводят объем водой Р до 300 мл. Прибавляют 6,0 мл

раствора натрия гидроксида концентрированного Р и около 15 мг индикаторной

смеси кальконкарбоновой кислоты Р. Титруют 0,1 М раствором натрия эдетата

до перехода фиолетовой окраски раствора в синюю.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 4,008 мг Ca.

# Допускается проводить определение кальция по следующей методике:

Точную навеску препарата, эквивалентную 0,04-0,05 г кальция, растворяют,

как указано в частной статье, в воде Р или кислоте хлористоводородной

разбавленной Р. Доводят объем раствора водой Р до 50 мл, прибавляют 10 мл

буферного раствора с рН 9,5-10,0; 0,1 г индикаторной смеси хромового темно-синего

(0,25 г хромового темно-синего и

25 г натрия хлорида растирают в ступке и

перемешивают) или 7 капель раствора хромового темно-синего (0,5 г хромового

темно-синего растворяют в 10 мл аммиачного буферного раствора (рН от 9,5 до

10,0) и доводят объем раствора 95 % спиртом до 100 мл, срок годности раствора 1

мес) и титруют

0,05 М раствором натрия эдетата до сине-фиолетового

окрашивания.

1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата соответствует 2,004 мг Ca.

МАГНИЙ

Раствор, указанный в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл и доводят объем раствора до 300 мл водой Р. Прибавляют 10

мл аммиачного буферного раствора рН 10,0 Р и около 50 мг индикаторной смеси

протравного черного 11 Р (эриохром черный Т). Раствор нагревают до температуры

около 40°C и титруют при этой температуре 0,1 М раствором натрия эдетата до

перехода фиолетовой окраски раствора в синюю.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 2,431 мг Mg.

# Допускается проводить определение магния по следующей методике:

Точную навеску испытуемого вещества, эквивалентную 0,02-0,03 г магния,

растворяют, как указано в частной статье. Прибавляют

50 мл воды Р, 10 мл

буферного раствора с рН 9,5-10,0; 0,1 г индикаторной смеси протравного черного

11 Р (эриохром черный Т) или 7 капель раствора протравного черного 11 Р

(эриохром черный Т) и титруют 0,05 М раствором натрия эдетата до синего

окрашивания.

1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата соответствует 1,215 мг Mg.

СВИНЕЦ

Раствор, указанный в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл и доводят объем раствора водой Р до 200 мл. Прибавляют

около

50 мг индикаторной смеси ксиленолового оранжевого Р, а затем

гексаметилентетрамина Р до появления фиолетово-розовой окраски раствора.

Затем титруют 0,1 М раствором натрия эдетата до перехода фиолетово-розовой

окраски раствора в желтую.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 20,72 мг Pb.

ЦИНК

Раствор, указанный в частной статье, помещают в коническую колбу

вместимостью 500 мл и доводят объем раствора водой Р до 200 мл. Прибавляют

около

50 мг индикаторной смеси ксиленолового оранжевого Р, а затем

гексаметилентетрамина Р до появления фиолетово-розовой окраски раствора.

После этого дополнительно прибавляют 2 г гексаметилентетрамина Р и титруют

0,1 М раствором натрия эдетата до перехода фиолетово-розовой окраски

раствора в желтую.

1 мл 0,1 М раствора натрия эдетата соответствует 6,54 мг Zn.

2.5.12. ВОДА: ПОЛУМИКРОМЕТОД (#Метод К.Фишера)

Для титрования используют сосуд вместимостью 60 мл, снабженный двумя

платиновыми электродами, трубкой для подвода азота, пробкой, в которую

вставляется конец бюретки, и трубкой, заполненной осушающим агентом.

Испытуемое вещество вносят в сосуд через трубку, расположенную с

противоположной стороны по отношению к трубке-осушителю, которая должна

закрываться притертой пробкой. В процессе титрования раствор перемешивают с

помощью магнитной мешалки или посредством продувания высушенного азота

через раствор.

Конечную точку титрования обнаруживают амперометрически. Электрическая

схема состоит из потенциометра с сопротивлением около 2000 Ом, подключенного к

источнику постоянного тока с напряжением

1,5 В, который обеспечивает

необходимую разность потенциалов. Разность потенциалов отрегулирована таким

образом, чтобы через платиновые электроды, соединенные последовательно с

микроамперметром, проходил небольшой начальный ток. При прибавлении реактива

стрелка микроамперметра отклоняется, но сразу же возвращается в исходное

положение. В конце реакции полученное отклонение должно быть неизменным в

течение 30 с.

Иодсернистый реактив Р (реактив К.Фишера) используют после определения

его титра по воде

(4.1.1). Используемые реактивы и растворы должны быть

безводными; необходимо принять меры предосторожности для исключения

воздействия на них атмосферной влаги. Йодсернистый реактив Р необходимо

беречь от света и желательно хранить в емкости, снабженной автоматической

бюреткой.

# Допускается использование йодсернистого реактива, выпускаемого

отечественными и зарубежными предприятиями в соответствии с требованиями

технических нормативных правовых актов, утвержденных в установленном порядке.

# Йодсернистый реактив представляет собой раствор серы диоксида, йода и

пиридина в метаноле. Взаимодействие реактива с водой протекает

стехиометрически по уравнениям:

I₂ + SO₂ + H₂O + 3C₅H₅N → 2C₅H₅N·HI + C₅H₅NSO₃

C₅H₅NSO₃ + CH₃OH → C₅H₅N·HSO₄CH₃

# Иодсернистый реактив, указанного выше состава, неприменим для анализа

соединений, реагирующих с одним или несколькими компонентами реактива, как,

например, аскорбиновая кислота, меркаптаны, сульфиды, гидрокарбонаты и

карбонаты щелочных металлов, альдегиды, кетоны и др.

# При определении воды в твердых веществах, нерастворимых в метаноле,

тонко измельченную навеску вещества взбалтывают с метанолом, после чего

титруют йодсернистым реактивом. Некоторые вещества или смеси можно

растворять в безводных уксусной кислоте, хлороформе, пиридине и других

растворителях.

Имеющиеся в продаже йодсернистые реактивы часто отличаются по

составу от йодсернистого реактива Р: в них пиридин заменен на другие

основания. Использование таких реактивов необходимо предварительно

валидировать с целью подтверждения в каждом конкретном случае,

стехиометрии и отсутствия несовместимости между испытуемым веществом

и реактивом (1.1 Общие замечания).

Если нет других указаний в частной статье, используют метод А.

МЕТОД А

Около 20 мл метанола безводного Р или растворителя, указанного в частной

статье, помещают в сосуд для титрования и титруют иодсернистым реактивом Р,

обнаруживая конечную точку титрования амперометрически. Указанное количество

испытуемого вещества быстро помещают в сосуд для титрования. Смесь

перемешивают в течение 1 мин и снова титруют йодсернистым реактивом Р,

обнаруживая конечную точку титрования амперометрически.

МЕТОД B

Около 10 мл метанола безводного Р или растворителя, указанного в частной

статье, помещают в сосуд для титрования и титруют йодсернистым реактивом Р,

обнаруживая конечную точку титрования амперометрически.

Затем быстро вносят в сосуд для титрования указанное количество

испытуемого вещества и точно измеренный объем йодсернистого реактива Р,

взятого в избытке приблизительно на 1 мл или объем, указанный в частной статье.

Сосуд закрывают пробкой, выдерживают в защищенном от света месте в течении 1

мин или в течение времени, указанного в частной статье, периодически

перемешивая содержимое сосуда. Избыток йодсернистого реактива Р титруют до

первоначального значения силы тока, используя метанол безводный Р или

растворитель, указанный в частной статье, к которому было прибавлено точно

известное количество воды Р, эквивалентное около 2,5 г/л.

# Конечную точку титрования допускается обнаруживать визуально по

изменению окраски титруемой жидкости от желтой до красновато-коричневой при

условии обеспечения необходимой точности.

2.5.13. АЛЮМИНИЙ В АДСОРБИРОВАННЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемое вещество гомогенизируют и переносят соответствующее

количество, содержащее от

5 мг до

6 мг алюминия, в колбу для сжигания

вместимостью 50 мл. Прибавляют 1 мл серной кислоты Р, 0,1 мл азотной кислоты

Р и несколько стеклянных шариков. Нагревают полученный раствор до его

помутнения из-за выделяющегося белого дыма. Если на данной стадии

наблюдается обугливание, прибавляют несколько капель азотной кислоты Р и

продолжают кипячение до исчезновение окраски. Смесь охлаждают несколько

минут, с осторожностью добавляют

10 мл воды Р и кипятят до получения

прозрачного раствора. Охлаждают, прибавляют 0,05 мл метилового оранжевого

раствор Р и нейтрализуют натрия гидроксида раствором концентрированным Р

(6,5 мл на 7 мл). Если образуется осадок, его растворяют, добавляя по каплям

достаточный объем серной кислоты разведенной Р. Переносят раствор в

коническую колбу вместимостью 250 мл, остатки в колбе для сжигания смывают 25

мл воды Р. Прибавляют 25,0 мл 0,02 М раствора натрия эдетата, 10 мл

ацетатного буферного раствора рН 4,4 Р, несколько стеклянных шариков и

осторожно кипятят в течение 3 мин, добавляют 0,1 мл пиридилазонафтола раствор

Р и титруют горячий раствор 0,02 М раствором меди сульфата до изменения цвета

раствора на пурпурно-коричневый.

Испытания повторяют без использования вакцины.

1 мл 0,02 М раствора натрия эдетата соответствует 0,5396 мг Al.

2.5.14. КАЛЬЦИЙ В АДСОРБИРОВАННЫХ ВАКЦИНАХ

Все растворы, используемые для данного исследования должны готовится

с использованием воды Р .

Кальций определяют атомно-эмиссионной спектрометрией (2.2.22, метод 1).

Исследуемое лекарственное средство гомогенизируют. К 1,0 мл прибавляют 0,2 мл

кислоты хлористоводородной разведенной Р и разводят до 3,0 мл водой Р.

Измеряют интенсивность излучения при длине волны 620 нм.

2.5.15. ФЕНОЛ В ИММУНОСЫВОРОТКАХ И ВАКЦИНАХ

Исследуемое лекарственное средство гомогенизируют. Разводят до

необходимого объема водой Р, чтобы получить раствор, содержащий 15 мкг/мл

фенола. Готовят ряд стандартных растворов с фенолом Р, содержащих 5 мкг, 10

мкг,

15 мкг,

20 мкг и 30 мкг/мл фенола соответственно. К 5 мл исследуемого

раствора и к 5 мл каждого стандартного раствора прибавляют 5 мл буферного

раствора рН 9,0 Р, 5 мл раствора 1 г/л аминопиразолона Р и 5 мл раствора 50г/л

калия ферроцианида Р. Дают отстояться

10 мин и измеряют интенсивность

окрашивания при длине волны 546 нм.

Строят градуировочный график и рассчитывают содержание фенола в

лекарственном средстве.

2.5.16. БЕЛОК В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Используют мерную колбу необходимого объема для

приготовления раствора, содержащего около

5 мг/мл сухого полисахарида.

Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема

водой Р. Помещают 1 мл раствора в стеклянную пробирку и добавляют 0,15 мл

раствора 400 г/л кислоты трихлоруксусной Р. Встряхивают, дают отстояться 15

мин, центрифугируют в течение 10 мин при скорости вращения 5000 об/мин и

удаляют надосадочную жидкость. К полученному осадку добавляют 0,4 мл 0,1 M

раствора натрия гидроксида Р.

Стандартные растворы. Разводят 0,100 г альбумина бычьего Р в 100 мл 0,1

M натрия гидроксида (основной раствор, содержащий 1 г/л белка). Разводят 1 мл

основного раствора до 20 мл 0,1 M раствором натрия гидроксида Р (рабочий

раствор 1 с концентрацией белка 50 мг/л). Разводят 1 мл основного раствора до 4

мл 0,1 M раствором натрия гидроксида Р (рабочий раствор 2 с концентрацией

протеина 250 мг/л). В 6 стеклянных пробирок помещают 0,10 мл, 0,20 мл и 0,40 мл

рабочего раствора 1 и 0,15 мл, 0,20 мл и 0.25 мл рабочего раствора 2. доводят

объем в каждой пробирке до 0,40 мл, используя 0,1 M раствор натрия гидроксида

Р.

Готовят контрольный раствор, используя 0,40 мл 0,1 M раствор натрия

гидроксида Р

В каждую пробирку добавляют

2 мл раствора медно-тартратногоо Р

встряхивают и дают отстояться в течение 10 мин. В каждую пробирку добавляют по

0,2 мл смеси равных объемов фосфомолибденовольфрамового реактива Р и воды

Р, приготовленной непосредственно перед использованием. Закрывают пробирки,

перемешивают, переворачивают их и дают отстояться в темном месте в течение 30

мин. Голубой цвет остается стабильным в течение 60 мин. При необходимости

центрифугируют для получения прозрачных растворов.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны

760 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Строят

градуировочный график на основе оптической плотности 6 стандартных растворов и

соответствующей концентрации белка и сравнивают с графиком показателей белка

в исследуемом растворе.

2.5.17. НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема

Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до

необходимого объема водой Р. При необходимости разводят исследуемый раствор

до достижения оптической плотности, подходящей к используемому прибору.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) при длине волны 260 нм, используя воду Р

в качестве раствора сравнения.

Оптическая плотность раствора 1 г/л нуклеиновой кислоты при длине волны

260 нм равна 20.

2.5.18. ФОСФОР В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема.

Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема

водой Р. Разводят раствор так, чтобы объем, используемый в опыте

(1 мл),

содержал около 6 мкг фосфора. Переносят 1,0 мл раствора в пробирку на 10 мл из

термостойкого стекла.

Стандартные растворы. 0,2194 г калия дигидрофосфата Р разводят в 500

мл воды Р таким образом, чтобы концентрация раствора была равна 0,1 мг/мл

фосфора. 5,0 мл раствора разводят до 100,0 мл водой Р. Переносят 0,5 мл, 1,0 мл и

2,0 мл разведенного раствора в три пробирки из термостойкого стекла. Готовят

контрольный раствор, используя 2,0 мл воды Р в пробирке из термостойкого стекла.

Во все пробирки добавляют 0,2 мл кислоты серной Р и подогревают на

масляной бане при 120 C в течение 1 ч, а затем при 160 C до появления белого

дыма (около 1 ч). Прибавляют 0,1 мл кислоты хлорной Р и нагревают при 160°C до

обесцвечивания раствора (около 90 мин). Охлаждают и прибавляют в каждую

пробирку 4 мл воды очищенной и 4 мл реактива аммония молибдата Р. Нагревают

на водяной бане при 37 C в течение 90 мин и охлаждают. Доводят объем до 10,0 мл

с помощью воды Р. Голубой цвет остается стабильным в течение нескольких часов.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны

820 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Строят

градуировочный график на основе оптической плотности трех стандартных

растворов и соответствующей концентрации фосфора и сравнивают с оптической

плотностью исследуемого раствора.

2.5.19. O-АЦЕТИЛ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема.

Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до

необходимого объема водой Р. Раствор разводят так, чтобы объемы, используемые

в опыте, содержали от

30 мкг до

600 мкг ацетилхолин хлорида

(O-ацетил).

Помещают 0,3 мл, 0,5 мл и 1,0 мл по два раза в 6 пробирок (3 реагирующих раствора

и 3 корректирующих раствора).

Стандартные растворы. Растворяют 0,150 г ацетилхолин хлорида Р в 10 мл

воды Р

(основной раствор, содержащий

15 г/л ацетилхолин хлорида).

Непосредственно перед использованием разводят 1 мл основного раствора до 50 мл

водой Р

(рабочая концентрация

300 мкг/мл ацетилхолин хлорида).

Непосредственно перед использованием разводят 1 мл основного раствора до 25 мл

водой Р (рабочая концентрация 2 - 600 мкг/мл ацетилхолин хлорида). Помещают 0,1

мл и 0,4 мл рабочей концентрации 1 дважды (реагирующий и корректирующий

растворы) в

4 пробирки и

0,6 мл и1,0 мл рабочей концентрации

2 дважды

(реагирующий и корректирующий растворы) в другие 4 пробирки.

Готовят контрольный раствор, используя 1 мл воды Р.

Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. Добавляют 1,0 мл 4 М

раствора кислоты хлористоводородной в каждую из корректирующих пробирок и в

контрольную пробу. Добавляют 2,0 мл щелочного раствора гидроксиламина Р в

каждую пробирку. Дают пройти реакции в течение 2 мин и добавляют в каждую из

пробирок с реагирующим раствором

1 мл

4 М раствора кислоты

хлористоводородной. Прибавляют 1,0 мл раствора 100 г/л железа хлорида Р в 0,1 М

растворе кислоты хлористоводородной в каждую пробирку, закрывают пробирки

пробками и сильно встряхивают для удаления пузырьков.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны

540 нм, используя контрольный раствор в качестве раствора сравнения. Для каждого

реагирующего раствора вычитают оптическую плотность соответствующего

корректирующего раствора. Строят градуировочный график на основании

скорректированных оптических плотностей для

4 стандартных растворов и

соответствующего содержания ацетилхолин хлорида и сравнивают с графиком

содержание ацетилхолин хлорида в исследуемом растворе для каждого

исследуемого объема. Рассчитывают среднее по трем величинам.

1 моль ацетилхолин хлорида (181,7 г) соответствует 1 молю O-ацетила (43,05

г).

2.5.20. ГЕКСОЗАМИНЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема.

Количественно переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до объема

водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы, используемые для опыта,

содержали от 125 мкг до 500 мкг глюкозамина (гексозамина). В градуированную

пробирку вносят 1,0 мл разведенного раствора.

Стандартные растворы. 60 мг глюкозамин гидрохлорида Р растворяют в

100 мл воды Р (основной раствор, содержащий 0,500 г/л глюкозамина). Помещают

0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл, и 1,0 мл рабочей концентрации в 4 градуированные

пробирки.

Готовят контрольную пробу, используя 1 мл воды Р.

Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. В каждую пробирку

прибавляют 1 мл (292 г/л) раствора кислоты хлористоводородной Р. Закрывают

пробирки пробками и помещают в водяную баню на 1 ч. Охлаждают до комнатной

температуры. В каждую пробирку

добавляют

0,05 мл

(5 г/л) раствора

тимолфталеина Р в спирте Р. Прибавляют раствор 200 г/л натрия гидроксида Р

до голубого окрашивания, а затем раствор 1 М кислоты хлористоводородной до

обесцвечивания раствора. Доводят объем в каждой пробирке до 10 мл водой Р

(нейтрализованные гидролизаты).

Во вторую серию градуированных пробирок объемом 10 мл вносят 1 мл

каждого нейтрализованного гидролизата. В каждую пробирку добавляют

1 мл

ацетилацетонового реактива

(смесь, приготавливаемая непосредственно перед

использованием - 1 объем ацетилацетона Р и 50 объемов раствора 53г/л натрия

карбоната безводного Р). Закрывают пробирки пробками и помещают на водяную

баню при температуре 90 C на 45 мин. Охлаждают до комнатной температуры. В

каждую пробирку добавляют

2,5 мл спирта Р и

1,0 мл раствора

диметиламинобензальдегида

(приготавлитвают

непосредственно

перед

использованием: растворяют 0,8 г диметиламинобензальдегида Р в 15 мл спирта

Р, добавляют 15 мл кислоты хлористоводородной Р) и доводят объем в каждой

пробирке до 10 мл спиртом Р. Пробирки закрывают, содержимое перемешивают

переворачивая пробирки и оставляют в темном месте на

90 мин. Измеряют

оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны 530 нм, используя

контрольную пробу в качестве раствора сравнения. Строят градуировочный график

на основании оптических плотностей для

4 стандартных растворов и

соответствующего содержания гексозамина и определяют значение количества

гексозамина в исследуемом растворе.

2.5.21. МЕТИЛПЕНТОЗЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида используют мерную колбу необходимого объема.

Содержимое контейнера количественно переносят в колбу и разводят до

необходимого объема водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы,

предназначенные для тестирования, содержали от

2 мкг до

20 мкг рамнозы

(метилпентозы). В три пробирки помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл разведенного

раствора.

Стандартные растворы. Разводят 0,100г рамнозы Р в

100мл воды Р

(основной раствор, содержащий

1г/л метилпентозы). Непосредственно перед

использованием разводят 1 мл основного раствора до 50 мл водой Р (рабочая

концентрация 20мг/л метилпентозы). В 5 пробирок помещают 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50

мл, 0,75 мл и 1,0 мл рабочей концентрации.

Готовят контрольную пробу с использованием 1 мл воды Р

Объем в каждой пробирке доводят до 1 мл с использованием воды Р.

Пробирки помещают в ледяную воду, прибавляют по каплям с постоянным

помешиванием по 4,5 мл охлажденной смеси, состоящей из одного объема воды Р и

6 объемов кислоты серной Р. Пробирки нагревают до комнатной температуры и

помещают на водяную баню на несколько минут. Охлаждают до комнатной

температуры. Добавляют в каждую пробирку 0,10 мл раствора 30 г/л цистеин

гидрохлорида Р приготовленного непосредственно перед применением.

Взбалтывают и дают отстояться в течение 2 ч.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине волны

396 нм и 430 нм, используя контрольную пробу в качестве раствора сравнения. Для

каждого раствора рассчитывают разницу между оптической плотностью, измеренной

при длине волны 396 нм и оптической плотностью, измеренной при длине волны 430

нм. Строят градуировочный график на основании разницы оптических плотностей

для 5 стандартных растворов и соответствующей концентрации метилпентозы, а

также строят график концентрации метилпентозы в исследуемом растворе для

каждого тестируемого объема. Рассчитывают среднюю величину по трем значениям.

2.5.22. УРОНОВЫЕ КИСЛОТЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Для приготовления раствора, содержащего около 5

мг/мл сухого полисахарида, используют мерную колбу необходимого объема.

Переносят содержимое контейнера в колбу и разводят до необходимого объема

водой Р. Раствор разводят таким образом, чтобы объемы, предназначенные для

исследования, содержали от 4 мкг до 40 мкг глюкуроновой кислоты (уроновых

кислот). В 3 пробирки помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл разведенного раствора.

Стандартные растворы. Растворяют 50 мг натрия глюкуроната Р в 100 мл

воды Р

(основной раствор, содержащий

0,4 г/л глюкуроновой кислоты).

Непосредственно перед использованием разводят 5 мл основного раствора до 50

мл, используя воду Р (рабочая концентрация глюкуроновой кислоты 40 мг/л). В 5

пробирок помещают

0,10 мл,

0,25 мл,

0,50 мл,

0,75 мл, и

1,0 мл рабочей

концентрации.

Готовят контрольную пробу, используя 1 мл воды Р.

Доводят объем в каждой пробирке до 1 мл водой Р. Помещают пробирки в

ледяную воду и, постоянно помешивая, по каплям добавляют в каждую пробирку по

5,0 мл боратного раствора Р. Закрывают пробирки пробками и помещают на 15

мин на водяную баню. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку

добавляют 0,20 мл раствора 1,25 г/л карбазола Р в этаноле Р. Закрывают пробирки

пробками и помещают на 15 мин на водяную баню. Охлаждают до комнатной

температуры. Измеряют оптическую плотность (2.2.25) каждого раствора при длине

волны 530 нм, используя контрольную пробу в качестве раствора сравнения.

Строят градуировочный график оптических плотностей для 5 стандартных

растворов и соответствующих концентраций глюкуроновой кислоты, и определяют

концентрации глюкуроновой кислоты в исследуемом растворе для каждого

тестируемого объема. Рассчитывают среднюю величину по трем значениям.

2.5.23. СИАЛОВАЯ КИСЛОТА В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Исследуемый раствор. Содержимое одного или нескольких контейнеров

количественно переносят в мерную колбу соответствующего объема. Чтобы

получить раствор с концентрацией полисахарида около

250 мкг/мл, содержимое

разводят до необходимого объема водой Р.

4,0 мл этого раствора переносят с

помощью шприца в 10 мл ультрафильтрационную кювету, пропускающую молекулы

с относительной молекулярной массой менее 50 000. Дважды промывают шприц

водой Р и промывную жидкость тоже переносят в ультрафильтрационную кювету.

Проводят ультрафильтрацию, постоянно перемешивая жидкость, в присутствии

азота под давлением около 150 kПa. Наполняют кювету водой Р каждый раз, когда

объем жидкости в ней уменьшается до 1 мл до тех пор, пока не профильтруется 200

мл, а оставшийся объем в кювете не будет составлять 2 мл. Используя шприц,

переносят оставшуюся жидкость в 10 мл мерную колбу. Промывают кювету 3 раза по

2 мл водой Р каждый раз. Смывную жидкость сливают в колбу и доводят объем до

10 мл водой Р (испытуемый раствор). В каждую из двух опытных пробирок вносят 2,0

мл испытуемого раствора.

Стандартные растворы. Используют стандартные растворы, описанные в

частной статье.

Готовят 2 серии из 3 пробирок. В пробирки каждой серии помещают 0,5 мл,

1,0 мл и

1,5 мл стандартного раствора, соответствующего типу вакцины,

предназначенной для исследования, и корректируют водой Р объем в каждой

пробирке до 2-х мл. Готовят контрольную пробу, используя 2,0 мл воды Р в каждой

из двух пробирок.

В каждую пробирку добавляют 5,0 мл резорцинового реактива Р. Нагревают

при 105º С в течение 15 мин, охлаждают в холодной воде и переносят пробирки на

баню с ледяной водой. Во все пробирки добавляют 5 мл спирта изоамилового Р и

тщательно перемешивают. Помещают в емкость с ледяной водой на 15 минут.

Центрифугируют пробирки и держат их в емкости с ледяной водой до проведения

исследования методом абсорбционной спектрофотометрии. Измеряют оптическую

плотность (2.2.25) надосадочной жидкости при длинах волн 580 нм и 450 нм,

используя спирт изоамиловый Р в качестве раствора сравнения. Для каждой длины

волны рассчитывают оптическую плотность как среднее значений, полученных в

двух идентичных растворах. Вычитают среднее значение для контрольного раствора

из средних значений, полученных для других растворов.

Строят график, отражающий разницу между оптической плотностью при длинах волн

580 нм и

450 нм стандартных растворов как функцию содержания N-

ацетилнейраминовой кислоты и определяют концентрации N-ацетилнейраминовой

кислоты (сиаловой кислоты) в исследуемом растворе.

2.5.24. ДИОКСИД УГЛЕРОДА В ГАЗАХ

Диоксид углерода в газах определяется с помощью инфракрасного

анализатора (Рисунок 2.5.24.-1).

Рисунок 2.5.24.-1. - Инфракрасный анализатор

Инфракрасный анализатор включает в себя систему, генерирующую

идентичных инфракрасных пучка, состоящий из спиралей, электронагреваемых до

низкой температуры слабого каления и оснащенного рефлекторами. Один луч

проходит сквозь камеру, предназначенную для пробы, а другой сквозь референтную

камеру. Камера для пробы получает поток исследуемого газа, а референтная

камера содержит азот Р1. Две камеры детектора заполнены диоксидом углерода Р1

и автоматически получают выборочное излучение. Поглощение излучения вызывает

нагревание и дифференциальное расширение газа в двух камерах, позволяет

исследовать поглощение части испускаемого излучения диоксидом углерода в

исследуемом газе. Разница давления между двумя камерами детектора приводит к

растяжению металлической диафрагмы, разделяющей их. Эта диафрагма является

частью конденсатора, емкость которого меняется по мере изменения давления,

которое само по себе зависит от содержания диоксида углерода в исследуемом

газе. Поскольку инфракрасные лучи периодически блокируются вращающимся

прерывателем, происходит частотное модулирование электрического сигнала.

2.5.25. ОКСИД УГЛЕРОДА В ГАЗАХ

МЕТОД I

Прибор. Прибор (Рисунок 2.5.25.-1) состоит из следующих частей, соединенных

последовательно:

Рисунок 2.5.25.-1. - Прибор для определения угарного газа

Размеры представлены в миллиметрах

— U-образная трубка

(U₁), содержащая безводный силикагель Р, пропитанный

триоксидом хрома Р,

— Промывочная емкость (F₁), содержащая 100 мл раствора 400 г/л калия гидроксида Р,

— U- образная трубка (U₂), содержащая шарики калия гидроксида Р,

— U- образная трубка (U₃), содержащая фосфора (V) оксид Р, распределенный на

предварительно гранулированную плавленную пензу,

— U- образная трубка (U₄), содержащая 30 г йода (V) оксида перекристаллизованного Р

в гранулах, предварительно высушенного при температуре

200^оC и

поддерживаемого при температуре 120^оC (T) во время теста. Пентоксид йода

упакован в трубке в 1 см столбики, разделенные 1см столбиками стекловаты для

достижения эффективной длины 5 см,

— реакторная трубка (F₂) содержащая

2,0 мл раствора калия йодида Р и 0,15 мл

раствора крахмала Р.

Метод. 5,0 литров аргона Р пропускают через аппарат и при необходимости

обесцвечивают голубой цвет йодного раствора, добавляя минимально необходимое

количество свежеприготовленного 0,002 М раствора натрия тиосульфата Р. Газ

продолжают пропускать до тех пор, пока после прохождения 5,0 литров аргона Р

для обесцвечивания йодного раствора будет требоваться всего 0,045 мл 0,002 М

раствора натрия тиосульфата Р. Исследуемый газ, пропускают из цилиндра

через аппарат, учитывая предписанные в частной статье объем и скорость потока.

Остатки выделившегося йода в реакторной пробирке извлекают, пропустив через

аппарат 1,0 литр аргона Р. Выделившийся йод титруют 0,002 М раствором натрия

тиосульфата Р. Проводят контрольный опыт, используя одинаковый объем аргона

Р. Разница между объемами

0,002 М раствора натрия тиосульфата,

использованного при титровании не должна превышать указанное в частной статье

значение.

МЕТОД II

Моноксид углерода в газах может быть определен с помощью инфракрасного

анализатора (см. Рисунок 2.5.25.-2).

Рисунок 2.5.25.- 2. - Инфракрасный анализатор

Инфракрасный анализатор включает в себя систему, генерирующую

идентичных инфракрасных пучка, состоящую из спиралей, электронагреваемых до

низкой температуры слабого каления и оснащенную рефлекторами. Один луч

проходит сквозь камеру, предназначенную для пробы, а другой сквозь референтную

камеру. Камера для пробы получает поток исследуемого газа, а референтная

камера содержит азот Р1. Две камеры детектора заполнены оксидом углерода Р1 и

автоматически получают выборочное излучение. Поглощение этого излучения

вызывает нагревание и дифференциальное расширение газа в двух камерах,

позволяя исследовать поглощение части испускаемого излучения оксидом углерода

в газе. Разница давления между двумя камерами детектора приводит к растяжению

металлической диафрагмы, разделяющей их. Эта диафрагма является частью

конденсатора, емкость которого меняется по мере изменения давления, которое

само по себе зависит от содержания оксида углерода в исследуемом газе.

Поскольку инфракрасные лучи периодически блокируются вращающимся

прерывателем, происходит частотное модулирование электрического сигнала.

2.5.26. ОКСИД АЗОТА И ДИОКСИД АЗОТА В ГАЗАХ

Оксид азота и диоксид азота в газах определяется хемилюминесцентным

анализатором (Рисунок 2.5.26.-1).

ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 13