содержание .. 8 9 10 11 ..
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 10
комнатной температуре в течение 30 минут. Удаляют раствор высушиванием и
добавляют
200 мл обесцвечивающего раствора R. Выдерживают при
перемешивании в течение
1 часа. Высушивают гель, добавляют кумасси
окрашивающий раствор R. Выдерживают в течение 30 минут. Обесцвечивают гель
путём пассивной диффузии обесцвечивающего раствора R до тех пор, пока на
чистом фоне не станут хорошо видны полосы. Отмечают положение и
интенсивность полос на электрофореграмме, как указано в монографии.
ИЗМЕНЕНИЯ ПОДРОБНОЙ МЕТОДИКИ (ПРЕДМЕТ ВАЛИДАЦИИ)
Там, где делается ссылка на общую методику изоэлектрического
фокусирования, изменения в методологии или методике изоэлектрического
фокусирования могут быть предметом валидации. Они включают в себя:
- использование имеющихся в продаже гелей заводского производства, а также
окрашивающих и обесцвечивающих наборов,
- использование фиксированных градиентов рН,
- использование стержневых гелей,
- использование кассет геля различных размеров, включая ультратонкие (0,2 мм)
гели,
- изменения в методике нанесения образца, включающие различные объёмы
образца или использование шаблонов или фитильков, изготовленных не из бумаги,
- использование альтернативных условий перемещения, включающих изменения
электрического поля в зависимости от размеров геля и оборудования, а также
использование фиксированных времен миграции вместо субъективной
интерпретации стабильности полосы,
- включение стадии предварительного фокусирования,
- использование автоматизированного оборудования,
- использование гелей агарозы.
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ФОКУСИРОВАНИЯ
Если используются альтернативные способы по отношению к подробной
методике, они должны быть валидированы. Для валидации разделения могут быть
использованы следующие критерии:
- образование устойчивого градиента рН с желаемыми характеристиками,
оцениваемого, например, с помощью окрашенных маркеров рН с известными
величинами изоэлектрических точек,
- сравнение с электрофореграммами, полученными при использовании химического
образца сравнения для исследуемого образца,
- любые другие критерии валидации, указанные в монографии.
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ОБЩЕЙ МЕТОДИКИ
Изменения общей методики, необходимые при анализе некоторых веществ,
могут быть подробно описаны в частных статьях. Они включают:
- добавление в гель мочевины
(обычно
3 M концентрации достаточно для
поддерживания белка в растворённом состоянии, но может быть использована
концентрация до 8 M): некоторые белки в изоэлектрической точке выпадают в
осадок, в этом случае для того, чтобы белок оставался в растворе в гель вводится
мочевина; при использовании мочевины следует применять только свежие её
растворы, чтобы не допустить карбамоилирования белка;
- использование альтернативных способов окрашивания;
- использования добавок для геля, таких как неионные детергенты (например,
октилглюкозид) или цвиттерионные детергенты (например, CHAPS или CHAPSO), и
добавление амфолита к образцу для предотвращения процессов агрегации и
преципитации белков.
ПОЛОЖЕНИЯ, КОТОРЫЕ СЛЕДУЕТ ПРИНИМАТЬ ВO ВНИМАНИЕ, ИСПОЛЬЗУЯ
ДАННЫЙ МЕТОД
Образцы могут наноситься на любой участок поверхности геля, но для того,
чтобы защитить белки от экстремальных величин рН, образцы не должны
наносится в непосредственной близости от электродов. В ходе выполнения анализа
аналитик может нанести белок на гель в трёх местах (посередине и на обоих
концах). Образцы белка, наносимые на противоположные концы геля, могут быть
различными.
Известно явление, называемое катодным дрейфом, при котором градиент рН
с течением времени разрушается. Это может происходить, если фокусирование в
геле происходит слишком долго. Причины данного явления не совсем ясны, но
факторами, вызывающими катодный дрейф, могут быть электроэндоосмос и
абсорбция диоксида углерода. Для исследования этой проблемы могут быть
использованы фиксированные градиенты рН.
В течение фокусирования важно проводить эффективное охлаждение
(приблизительно 4°C) ёмкости, в которую помещён гель. Высокие напряжённости
электрического поля, используемые во время изоэлектрического фокусирования,
могут приводить к перегреванию и влиять на качество фокусируемого геля.
2.3. ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
2.3.1. РЕАКЦИИ ПОДЛИННОСТИ
(ИДЕНТИФИКАЦИИ) НА ИОНЫ И
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ГРУППЫ
АЛКАЛОИДЫ
Несколько миллиграммов или указанное в частной статье количество
испытуемого образца растворяют в
5 мл воды Р, прибавляют кислоту
хлористоводородную разведенную Р до кислой реакции раствора (2.2.4), затем 1
мл раствора калия йодвисмутата Р, тотчас образуется оранжевый или
оранжево-красный осадок.
АЛЮМИНИЙ
Около 15 мг испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл
кислоты хлористоводородной разведенной Р и около
0,5 мл реактива
тиоацетамида Р; осадок не образуется. Затем прибавляют по каплям раствор
натрия гидроксида разведенный Р; образуется гелеобразный белый осадок,
растворяющийся при последующем прибавлении раствора натрия гидроксида
разведенного Р. К полученному раствору постепенно прибавляют раствор
аммония хлорида Р, вновь образуется гелеобразный белый осадок.
АМИНЫ АРОМАТИЧЕСКИЕ ПЕРВИЧНЫЕ
Испытуемый раствор, указанный в частной статье, подкисляют кислотой
хлористоводородной разведенной Р, или
0,05 г испытуемого образца
растворяют в кислоте хлористоводородной разведенной Р образца прибавляют
0,2 мл раствора натрия нитрита Р и через 1-2 мин прибавляют полученный
раствор к 1 мл раствора β-нафтола Р; появляется интенсивно оранжевое или
красное окрашивание и, как правило, образуется осадок такого же цвета.
АММОНИЯ СОЛИ
К испытуемому раствору, указанному в частной статье, прибавляют 0,2 г магния
оксида Р. Через жидкость пропускают воздух и выходящий воздух направляют в
смесь 1 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и 0,05 мл раствора
метилового красного Р; окраска индикатора переходит в желтую. Затем
прибавляют
1 мл свежеприготовленного раствора
100 г/л натрия
кобальтинитрита Р; образуется желтый осадок.
АММОНИЯ СОЛИ И СОЛИ ЛЕТУЧИХ ОСНОВАНИЙ
Около 20 мг испытуемоого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 2 мл
раствора натрия гидроксида разведенного Р. При нагревании раствора
выделяются пары аммиака, которые обнаруживаются по запаху и щелочной
реакции (2.2.4).
АЦЕТАТЫ
a) Испытуемый образец нагревают с равным количеством кислоты
щавелевой Р; выделяется кислота уксусная, обнаруживаемая по запаху и
кислой реакции (2.2.4).
b) Около 30 мг испытуемого образца растворяют в 3 мл воды Р. К полученному
раствору или к 3 мл раствора, указанного в частной статье, последовательно
прибавляют 0,25 мл раствора лантана нитрата Р, 0,1 мл 0,05 М раствора йода и
0,05 мл раствора аммиака разведенного Р2. Смесь осторожно нагревают до
кипения; в течение нескольких минут образуется синий осадок или появляется
синее окрашивание.
c) # К
2 мл нейтрального раствора, содержащего испытуемый образец в
количестве, эквивалентном около 20-60 мг ацетат-иона (СНзСОО-), прибавляют 0,2
мл раствора 30 г/л железа(III) хлорида Р; появляется красно-бурое окрашивание,
исчезающее при прибавлении кислот минеральных разведенных.
d) #
2 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве,
эквивалентном около
20-60 ацетат-иона
(СНзСОО-), нагревают с равным
количеством кислоты серной концентрированной Р и
0,5 мл спирта Р;
образуется этилацетат, обнаруживаемый по запаху.
АЦЕТИЛ
Около 15 мг или указанное в частной статье количество испытуемоого образца
помещают в пробирку длинной около 180 мм и наружным диаметром 18 мм и
прибавляют 0,15 мл кислоты фосфорной Р. Пробирку закрывают пробкой, через
которую пропущена небольшая пробирка длинной около
100 мм и наружным
диаметром 10 мм, содержащая воду Р и выполняющая роль холодильника. На
внешнюю поверхность меньшей пробирки помещяют 1 каплю раствора лантана
нитрата Р. Если субстанция относительно легко гидролизуется, устройство
помещают на 5 мин в водяную баню, затем вынимают меньшую пробирку. Для
трудно гидролизуемых субстанций смесь медленно нагревают на открытом пламени
до кипения. Каплю снимают, смешивают на фарфоровой пластинке с 0,05 мл 0,01 М
раствора йода. На край капли наносят 0,05 мл раствора аммиака разведённого Р2;
через 1-2 мин в месте соединения двух капель появляется синее окрашивание,
которое усиливается и сохраняется в течение короткого промежутка времени.
БАРБИТУРАТЫ (ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ N-ЗАМЕЩЕННЫХ)
Около
5 мг испытуемого образца растворяют в
3 мл метанола Р,
прибавляют 0,1 мл раствора, содержащего 100 г/л кобальта нитрата Р и 100
г/л кальция хлорида Р, перемешивают и прибавляют при встряхивании 0,1 мл
раствора натрия гидроксида разведенного Р, появляется фиолетово-синее
окрашивание и образуется осадок.
БЕНЗОАТЫ
а) К 1 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл
раствора железа
(III) хлорида Р1; образуется розовато-желтый осадок,
растворимый в эфире Р.
b)
0,2 г испытуемого образца, при необходимости измельченного,
помещают в пробирку, смачивают 0,2 мл или 0,3 мл кислоты серной Р,
осторожно нагревают дно пробирки; на внутренних стенках пробирки
появляется белый налет.
с) 0,5 г испытуемого образца растворяют в 10 мл воды Р. К полученному
раствору или к 10 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5
мл кислоты хлористоводородной Р; образуется осадок, который после
перекристаллизации из теплой воды Р и высушивания под вакуумом
(2.2.32) имеет температуру плавления (2.2.14) от 120°С до 124°С.
БРОМИДЫ
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 3 мг бромид-иона
(Вг-), растворяют в
2 мл воды Р. Полученный раствор или 2 мл раствора,
указанного в частной статье, подкисляют кислотой азотной разведенной Р,
прибавляют
0,4 мл раствора серебра нитрата Р1, перемешивают и
отстаивают; образуется светло-желтый творожистый осадок. Осадок
отделяют центрифугированием и промывают тремя порциями воды Р по 1
мл каждая. Эти операции проводят быстро в защищенном от яркого света
месте, при этом допускается, чтобы жидкость над осадком не была
полностью прозрачной. Полученный осадок суспендируют в 2 мл воды Р и
прибавляют 1,5 мл раствора аммиака Р; осадок медленно растворяется.
b) Навеску испытуемого образца, эквивалентную около 5 мг бромид-иона
(Вг-), или количество образца, указанное в частной статье, помещают в
небольшую пробирку, прибавляют 0,25мл воды Р, около 75 мг свинца (IV)
оксида Р, 0,25 мл кислоты уксусной Р и осторожно встряхивают. Верхнюю
внутреннюю часть пробирки высушивают с помощью фильтровальной
бумаги и оставляют на 5 мин. Полоску фильтровальной бумаги необходимого
размера пропитывают, помещая ее край в каплю раствора фуксина
обесцвеченного Р и тотчас помещают пропитанную часть в пробирку. В
течение 10 с у нижнего края фильтровальной бумаги появляется фиолетовое
окрашивание, которое четко отличается от красной окраски фуксина,
наблюдаемой в верхней пропитанной части полоски бумаги.
c) # К 1 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве,
эквивалентном около 2-30 мг бромид-иона (Вг-), прибавляют 1 мл кислоты
хлористоводородной разведенной Р, 0,5 мл свежеприготовленного раствора
50 г/л хлорамина Р, 1 мл хлороформа Р и взбалтывают; хлороформный слой
приобретает желто-бурую окраску.
ВИСМУТ
а) 0,5 г испытуемого образца растворяют в 10 мл кислоты хлористоводородной
разведённой Р. Полученный раствор или 10 мл раствора, указанного в частной
статье, кипятят в течение 1 мин, охлаждают и при необходимости фильтруют. К 1 мл
полученного раствора прибавляют 20 мл воды Р; образуется белый или светло-
жёлтый осадок, цвет которого после прибавления от 0,05 мл до 0,1 мл раствора
натрия сульфида Р изменяется на коричневый.
b) Около 45 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл кислоты азотной
разведенной Р. Полученный раствор или 10 мл раствора, указанного в частной
статье, кипятят в течение 1 мин, охлаждают и при необходимости фильтруют. К 5
мл полученного раствора прибавляют 2 мл раствора 100 г/л тиомочевины Р;
появляется желтовато-оранжевое окрашивание или образуется оранжевый
осадок. Затем прибавляют 4 мл раствора 25 г/л натрия фторида Р; раствор не
обесцвечивается в течение 30 мин.
с) # Навеску испытуемого образца, содержащую около 50 мг иона висмута,
взбалтывают с
5 мл кислоты серной разведенной Р и фильтруют. К
фильтрату прибавляют
2 капли раствора калия йодида Р1; образуется
черный осадок, растворимый в избытке реактива с образованием раствора
желтовато-оранжевого цвета.
ЖЕЛЕЗО
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 10 мг железа-иона
(Fe2+), растворяют в
1 мл воды Р. К полученному раствору или к
1 мл
раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл раствора калия
феррицианида Р; образуется синий осадок, не растворяющийся при
прибавлении кислоты хлористоводородной разведенной Р.
b) Навеску испытуемого образца, содержащую около 1 мг железа-иона
(Fe3+), растворяют в 30 мл воды Р. К полученному раствору или к 3 мл раствора,
указанного
в
частной
статье,
прибавляют
1
мл кислоты
хлористоводородной разведенной Р и 1 мл раствора калия тиоционата Р;
появляется красное окрашивание. Отбирают две порции полученного
раствора по 1 мл каждая. К одной порции прибавляют 5 мл спирта изоамилового
Р или 5 мл эфира Р, встряхивают и оставляют до расслоения; органический слой
окрашивается в розовый цвет. К другой порции прибавляют 2 мл раствора
ртути (II) хлорида Р; красное окрашивание раствора исчезает.
с) Навеску испытуемого образца, содержащую не менее 1 мг железа-
иона (Fе3+), растворяют в 1 мл воды Р. К полученному раствору или к 1 мл
раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл раствора калия
ферроцианида Р; образуется синий осадок, не растворяющийся при
прибавлении 5 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р.
ЙОДИДЫ
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 4 мг йодид-иона (I-),
растворяют в 2 мл воды Р. Полученный раствор или 2 мл раствора, указанного в
частной статье, подкисляют кислотой азотной разведенной Р, прибавляют 0,4 мл
раствора серебра нитрата Р1, перемешивают и отстаивают до образования
светло-желтого творожистого осадка. Осадок отделяют центрифугированием и
промывают 3 порциями воды Р по 1 мл каждая. Эту операцию проводят быстро
в защищенном от яркого света месте, при этом допускается, чтобы жидкость
над осадком не была полностью прозрачной. Осадок суспендируют в 2 мл воды Р
и прибавляют 1,5 мл раствора аммиака Р; осадок не растворяется.
b) К 0,2 мл раствора испытуемого образца, содержащего около 5 мг йодид-иона (I-
) в 1 мл, или к 0,2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл
кислоты серной разведенной Р, 0,1 мл раствора калия дихромата Р, 2 мл воды Р,
2 мл хлороформа Р, встряхивают в течение нескольких секунд и оставляют до
расслоения; хлороформный слой приобретает фиолетовую или фиолетово-
красную окраску.
с)
# При нагревании 0,1 г испытуемого образца с 1 мл кислоты серной Р
выделяются фиолетовые пары йода.
КАЛИЙ
а) 0,1 г испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному раствору
или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл раствора
натрия карбоната Р и нагревают; осадок не образуется. К горячему раствору
прибавляют
0,05 мл раствора натрия сульфида Р; осадок не образуется.
Раствор охлаждают в ледяной воде, прибавляют 2 мл раствора 150 г/л кислоты
винной Р и отстаивают; образуется белый кристаллический осадок.
b) Около
40 мг испытуемого образца растворяют в
1 мл воды Р. К
полученному раствору или к 1 мл раствора, указанного в частной статье,
прибавляют
1 мл кислоты уксусной разведенной Р и
1 мл свеже
приготовленного раствора
100 г/л
натрия кобальтинитрита Р; тотчас
образуется желтый или оранжево-желтый осадок.
с)
# Соль калия, внесенная в бесцветное пламя, окрашивает его в
фиолетовый цвет или при рассматривании через синее стекло - в пурпурно-
красный.
КАЛЬЦИЙ
а) К
0,2 мл нейтрального раствора, содержащего испытуемый образец в
количестве около 0,2 мг кальций-иона (Са2+) в 1 мл, или к 0,2 мл раствора,
указанного в частной статье, прибавляют
0,5 мл раствора
2 г/л
глиоксальгидроксианила Р в спирте Р, 0,2 мл раствора натрия гидроксида
разведенного Р и 0,2 мл раствора натрия карбоната Р. Смесь встряхивают
с 1 мл или 2 мл хлороформа Р и прибавляют от 1 мл до 2 мл воды Р;
хлороформный слой приобретает красную окраску.
b) Около 20 мг или указанное в частной статье количество испытуемого
образца растворяют в
5 мл кислоты уксусной Р. К полученному раствору
прибавляют
0,5 мл раствора калия ферроцианида Р; раствор остается
прозрачным. К раствору прибавляют около
50 мг аммония хлорида Р;
образуется белый кристаллический осадок.
c)
# К 1 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве 2-
20 мг кальций-иона
(Са2+), прибавляют
1 мл раствора 40 г/л аммония
оксалата Р; образуется белый осадок, нерастворимый в кислоте уксусной
разведенной Р и растворе аммиака Р, растворимый в разведенных
минеральных кислотах.
d)
# Соль кальция, смоченная кислотой хлористоводородной Р и
внесенная в бесцветное пламя, окрашивает его в оранжево-красный цвет.
КАРБОНАТЫ И ГИДРОКАРБОНАТЫ
а) 0,1 г испытуемого образца помещают в пробирку и суспендируют в 2 мл
воды Р. К полученной суспензии или к 2 мл суспензии, указанной в частной
статье, прибавляют 3 мл кислоты уксусной разведенной Р. Пробирку тотчас
закрывают притертой пробкой со стеклянной трубкой, дважды изогнутой
под прямым углом; наблюдается бурное выделение пузырьков газа без цвета
и запаха. Пробирку осторожно нагревают и пропускают выделяющийся газ
через
5 мл раствора бария гидроксида Р; образуется белый осадок,
растворяющийся при прибавлении избытка кислоты хлористоводородной
P1.
b)
# 0,2 г испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора магния сульфата Р;
образуется белый осадок (отличие от гидрокарбонатов, растворы которых
образуют осадок только при кипячении смеси).
Примечание. Для получения насыщенного раствора магния сульфата, к 100
г магния сульфата Р прибавляют 100 мл воды Р и оставляют на 24 ч при
частом взбалтывании. Раствор фильтруют.
с)
# 0,2 г испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору прибавляют 0,05 мл раствора фенолфталеина Р; появляется красное
окрашивание
(отличие от гидрокарбонатов, растворы которых остаются
бесцветными).
КСАНТИНЫ
К нескольким миллиграммам или к указанному в частной статье
количеству испытуемого образца прибавляют 0,1 мл раствора пероксида
водорода концентрированного Р,
0,3 мл кислоты хлористоводородной
разведенной Р и упаривают на водяной бане до получения сухого желтовато-
красного остатка. К остатку прибавляют 0,1 мл аммиака разведенного Р2; цвет
остатка изменяется на фиолетово-красный.
ЛАКТАТЫ
Навеску испытуемого образца, эквивалентную около
5 мг кислоты
молочной, растворяют в 5 мл воды Р. К полученному раствору или к 5 мл
раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл бромной воды Р, 0,5
мл кислоты серной разведенной Р и нагревают на водяной бане, периодически
перемешивая стеклянной палочкой, до обесцвечивания раствора. К
раствору прибавляют 4 г аммония сульфата Р и перемешивают, прибавляют
по каплям, не перемешивая, 0,2 мл раствора 100 г/л натрия нитропруссида
Р в кислоте серной разведенной Р, осторожно прибавляют, также не
перемешивая,
1 мл раствора аммиака концентрированного Р и
отстаивают в течение 30 мин; на границе двух жидкостей образуется темно-
зеленое кольцо.
МАГНИЙ
Около 15 мг испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл
раствора аммиака разведенного Р1; образуется белый осадок,
растворяющийся при прибавлении 1 мл раствора аммония хлорида Р. К
полученному раствору прибавляют
1
мл раствора динатрия
гидрофосфата Р; образуется белый кристаллический осадок.
МЫШЬЯК
а)
5 мл испытуемого раствора нагревают на водяной бане с равным
объемом реактива гипофосфита Р; образуется коричневый осадок.
b) # Мышьяк (III) (арсениты). К 0,3 мл раствора, содержащего испытуемый
образец в количестве около 30 мг арсенит-иона (АsОз3-), прибавляют 0,5 мл
кислоты хлористоводородной разведенной Р и 0,1 мл раствора натрия сульфида
Р;
образуется
желтый осадок,
нерастворимый в кислоте
хлористоводородной Р, растворимый в растворе аммиака Р.
с) # Мышьяк (V) (арсенаты). К 0,3 мл раствора, содержащего испытуемый
образец в количестве около 1 мг арсенат-иона (AsО43-), прибавляют по 1 мл
раствора 100 г/л аммония хлорида Р, раствора аммиака Р и раствора 100 г/л
магния сульфата Р, образуется белый кристаллический осадок,
растворимый в кислоте хлористоводородной разведенной Р (отличие от
арсенитов).
НАТРИЙ
а) 0,1 г испытуемого образца растворяют в 2 мл воды Р. К полученному
раствору или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 2 мл
раствора 150 г/л калия карбоната Р и нагревают до кипения; осадок не
образуется. К раствору прибавляют 4 мл раствора калия пироантимоната Р и
нагревают до кипения, затем охлаждают в ледяной воде и при
необходимости потирают внутренние стенки пробирки стеклянной палочкой;
образуется плотный осадок белого цвета.
b) Навеску испытуемого образца, эквивалентную около 2 мг натрий-иона
(Na+), растворяют в 0,5 мл воды Р. К полученному раствору или к 0,5 мл
раствора, указанного в частной статье, прибавляют
1,5
мл
метоксифенилуксусной кислоты реактива Р, охлаждают в ледяной воде
в течение
30 мин; образуется объемный белый кристаллический осадок.
Смесь помещают в воду при температуре 20°С и перемешивают в течение 5
мин; осадок не исчезает. К смеси прибавляют
1 мл раствора аммиака
разведенного Р1; осадок полностью растворяется. К полученному раствору
прибавляют 1 мл раствора аммония карбоната Р; осадок не образуется.
с)
# Соль натрия, смоченная кислотой хлористоводородной Р и
внесенная в бесцветное пламя, окрашивает его в желтый цвет.
НИТРАТЫ
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 1 мг нитрат-иона
(NOз-), или количество, указанное в частной статье, прибавляют к смеси 0,1
мл нитробензола Р и 0,2 мл кислоты серной Р и через 5 мин охлаждают в
ледяной воде. Продолжая охлаждение, медленно при перемешивании
прибавляют 5 мл воды Р, 5 мл раствора натрия гидроксида концентрированного
Р,
5 мл ацетона Р, взбалтывают и отстаивают; верхний слой
приобретает темно-фиолетовую окраску.
b)
# Раствор, содержащий испытуемый образец в количестве, около 2
мг нитрат-иона
(NOз-), не обесц вечив ает раств ор
1 г/л калия
перманганата Р, подкисленный кислотой серной разведенной Р (отличие
от нитритов).
# НИТРИТЫ
а)
# Несколько кристаллов антипирина растворяют в фарфоровой
чашке в 0,1 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р, прибавляют 0,1
мл раствора, содержащего около
1 мг нитрит-иона
(NО2-); появляется
зеленое окрашивание (отличие от нитратов).
b)
# К навеске испытуемого образца, эквивалентной
30 мг нитрит-иона,
прибавляют 1 мл кислоты серной разведенной Р; выделяются желто-бурые пары
(отличие от нитратов).
РТУТЬ
а) Около 0,1 мл раствора испытуемого образца помещают на тщательно
очищенную поверхность медной фольги; появляется темно-серое пятно,
которое при натирании становится блестящим. Фольгу высушивают и
нагревают в пробирке; пятно исчезает.
b) К раствору, указанному в частной статье, прибавляют раствор натрия
гидроксида разведенный Р до сильнощелочной среды
(2.2.4); образуется
плотный осадок желтого цвета (ртути II соединений).
с) # К 1 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве,
эквивалентном 10-30 мг ртуть-иона (Hg2+), прибавляют осторожно по каплям
раствор калия йодuдa P; образуется красный осадок, растворимый в избытке
этого реактива.
САЛИЦИЛАТЫ
а) К 1 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл раствора
железа
(III) хлорида Р1; появляется фиолетовое окрашивание, которое не
исчезает после прибавления 0,1 мл кислоты уксусной Р, # но исчезает при
прибавлении кислоты хлористоводородной разведенной Р; при этом образуется
белый кристаллический осадок салициловой кислоты.
b) 0,5 г испытуемого образца растворяют в 10 мл воды Р. К полученному раствору
или к 10 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл кислоты
хлористоводородной Р. Полученный осадок после перекристаллизации из
горячей воды Р и высушивания под вакуумом (2.2.32) имеет температуру
плавления (2.2.14) от 156°С до 161°С.
СВИНЕЦ
а) 0,1 г испытуемого образца растворяют в 1 мл кислоты уксусной Р. К
полученному раствору или к 1 мл раствора, указанного в частной статье,
прибавляют
2 мл раствора калия хромата Р; образуется желтый осадок,
растворяющийся при прибавлении
2 мл раствора натрия гидроксида
концентрированного Р.
b) 50 мг испытуемого образца растворяют в 1 мл кислоты уксусной Р. К
полученному раствору или к
1 мл раствора, указанного в частной статье,
прибавляют 10 мл воды Р и 0,2 мл раствора калия йодида Р, образуется желтый
осадок. Смесь кипятят в течение 1-2 мин; осадок растворяется. Раствору дают
остыть; вновь образуется осадок в виде блестящих желтых пластинок.
СЕРЕБРО
а) Около 10 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл воды Р. К полученному
раствору или к 10 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,3 мл
кислоты хлористоводородной Р1, образуется белый творожистый осадок,
растворяющийся при прибавлении 3 мл раствора аммиака разведенного Р1.
b) # К 1 мл раствора испытуемого образца, эквивалентного 5 мг иона серебра,
прибавляют раствор аммиака разведенного Р1 до растворения образующегося
вначале осадка, затем прибавляют
2-3 капли раствора формальдегида Р и
нагревают; на стенках пробирки образуется блестящий налет металлического
серебра.
СИЛИКАТЫ
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, смешивают в
свинцовом или платиновом тигле с помощью медной проволоки с около 10 мг
натрия фторида Р и несколькими каплями кислоты серной Р до образования
суспензии. Тигель накрывают тонкой прозрачной пластиковой пластинкой с
висящей каплей воды Р и осторожно нагревают; через короткий промежуток
времени вокруг капли воды появляется белое кольцо.
СУЛЬФАТЫ
a) Около 45 мг испытуемого образца растворяют в 5 мл воды Р. К полученному
раствору или к 5 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл
кислоты хлористоводородной разведенной Р и
1 мл раствора бария
хлорида Р1; образуется белый осадок.
b) К суспензии, полученной в результате реакции (а), прибавляют 0,1 мл 0,05 М
раствора йода; желтая окраска йода не исчезает (отличие от сульфитов и
дитионитов), но обесцвечивается при прибавлении по каплям раствора
олова хлорида Р
(отличие от йодатов). Смесь кипятят; осадок не
окрашивается (отличие от селенатов и вольфраматов).
# СУЛЬФИТЫ
а) К 2 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве 10-30 мг
сульфит-иона
(SОз2-), прибавляют
2 мл кислоты хлористоводородной
разведенной Р и встряхивают; постепенно выделяется сернистый газ,
обнаруживаемый по характерному резкому запаху.
2-
b) К указанному в частной статье раствору, содержащему сульфит-ион (SO3
), прибавляют 0,1 мл 0,5 М раствора йода; реактив обесцвечивается.
СУРЬМА
Около 10 мг испытуемого образца растворяют при нагревании в растворе 0,5 г
калия-натрия тартрата Р в 10 мл воды Р и охлаждают. К 2 мл полученного
раствора или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют по каплям
раствор натрия сульфида Р; образуется оранжево-красный осадок,
растворяющийся при прибавлении раствора натрия гидроксида разведенного
Р.
ТАРТРАТЫ
а) Около 15 мг испытуемого образца растворяют в 5 мл воды Р. К полученному
раствору или к 5 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,05 мл
раствора 10 г/л железа (II) сульфата Р и 0,05 мл раствора пероксида водорода
разведенного Р; появляется неустойчивое желтое окрашивание. После
обесцвечивания раствора к нему прибавляют по каплям раствор натрия
гидроксида разведенный Р; появляется интенсивное синее окрашивание.
b) К 0,1 мл раствора испытуемого образца около 15 мг/мл кислоты винной, или к
0,1 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,1 мл раствора 100 г/л
калия бромида Р, 0,1 мл раствора 20 г/л резорцина Р, 3 мл кислоты серной Р и
нагревают на водяной бане от
5 мин до
10 мин; появляется темно-синее
окрашивание. Раствор охлаждают и вливают в воду Р; окраска раствора
изменяется на красную.
ФОСФАТЫ (ОРТОФОСФАТЫ)
а) К
5 мл раствора, указанного в частной статье, при необходимости
нейтрализованного, прибавляют
5 мл раствора серебра нитрата Р1;
образуется желтый осадок, цвет которого не изменяется при кипячении и
который растворяется при прибавлении раствора аммиака Р.
b)
1 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют
2 мл
молибденованадиевого реактива Р и перемешивают; появляется желтое
окрашивание.
с)
# К 1 мл раствора испытуемого образца, содержащего 10-30 мг иона
фосфата, в кислоте азотной разведенной Р, прибавляют
2 мл раствора
аммония молибдата Р и нагревают; образуется желтый кристаллический
осадок, растворимый в растворе аммиака разведенного Р1.
d)
# К 1 мл раствора испытуемого образца, содержащего 10-30 мг иона
фосфата, прибавляют 1 мл раствора аммония хлорида Р, 1 мл раствора
аммиака разведенного Р1 и
0,5 мл раствора
100г/л магния сульфата Р;
образуется белый кристаллический осадок, растворимый в разведенных
минеральных кислотах.
ХЛОРИДЫ
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 2 мг хлорид-иона (СI-),
растворяют в 2 мл воды Р. Полученный раствор или 2 мл раствора, указанного в
частной статье, подкисляют кислотой азотной разведенной Р, прибавляют 0,4 мл
раствора серебра нитрата Р1, перемешивают и отстаивают; образуется белый
творожистый осадок, который центрифугируют и промывают тремя порциями
воды Р по 1 мл каждая. Эту операцию проводят быстро в защищенном от
яркого света месте, при этом допускается, чтобы жидкость над осадком не
была полностью прозрачной. Осадок суспендируют в 2 мл воды Р и прибавляют
1,5 мл раствора аммиака Р; осадок быстро растворяется; допускается наличие
нескольких крупных частиц, растворяющихся медленно.
b) Навеску испытуемого образца, содержащую около 15 мг хлорида (СI-), или
количество, указанное в частной статье, помещают в пробирку, прибавляют 0,2 г
калия дихромата Р и 1 мл кислоты серной Р. У входного отверстия пробирки
помещают фильтровальную бумагу, пропитанную
0,1 мл раствора
дифенилкарбазида Р (при этом пропитанная бумага не должна соприкасаться с
калия дихроматом); бумага окрашивается в фиолетово-красный цвет.
ЦИНК
а) 0,1 г испытуемого образца растворяют в 5 мл воды Р. К полученному раствору
или к 5 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,2 мл раствора
натрия гидроксида концентрированного Р; образуется белый осадок. Затем
прибавляют еще 2 мл раствора натрия гидрооксида концентрированного Р;
осадок растворяется. К полученному раствору прибавляют
10 мл раствора
аммония хлорида Р; раствор остается прозрачным. К раствору прибавляют 0,1 мл
раствора натрия сульфида Р; образуется белый хлопьевидный осадок.
b) # К 2 мл раствора, содержащего испытуемый образец в количестве 5-20 мг
цинк-иона (Zn2+), прибавляют 0,5 мл раствора калия ферроцианида Р; образуется
белый осадок, нерастворимый в кислоте хлористоводородной разведенной Р.
ЦИТРАТЫ
а) Навеску испытуемого образца, содержащую около 50 мг кислоты лимонной,
растворяют в 5 мл воды Р. К полученному раствору или к 5 мл раствора, указанного
в частной статье, прибавляют 0,5 мл кислоты серной Р и 1 мл раствора калия
перманганата Р. Раствор нагревают до обесцвечивания, прибавляют 0,5 мл
раствора 100 г/л натрия нитропруссида Р в кислоте серной разведенной Р, 4 г
кислоты сульфаминовой Р. К смеси прибавляют раствор аммиака
концентрированный Р до щелочной реакции среды, прибавляя его по каплям
до полного растворения кислоты сульфаминовой. Прибавление избытка
раствора аммиака концентрированного Р приводит к появлению фиолетового
окрашивания, переходящего в фиолетово-синее.
b)
# К
1 мл нейтрального раствора, содержащего испытуемый образец в
количестве 2-10 мг цитрат-иона, прибавляют 1 мл раствора 200 г/л кальция хлорида
Р; раствор остаётся прозрачным; при кипячении раствора образуется белый осадок,
растворимый в кислоте хлористоводородной разведенной Р.
с) # К количеству образца, эквивалентному 1-2 мг цитрат-иона, прибавляют 0,5
мл ангидрида уксусного Р и нагревают; через
20-40 с появляется красное
окрашивание.
ЭФИРЫ СЛОЖНЫЕ
К 30 мг или к указанному в частной статье количеству испытуемого образца
прибавляют 0,5 мл раствора 70 г/л гидроксиламина гидрохлорида Р в метаноле
Р,
0,5 мл раствора 100 г/л калия гидроксида Р в спирте Р, нагревают при
взбалтывании и охлаждают. Полученный раствор подкисляют кислотой
хлористоводородной разведенной Р, прибавляют 0,2 мл раствора железа (III)
хлорида Р1, разбавленного в 10 раз; появляется синевато-красное или красное
окрашивание.
2.3.2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЖИРНЫХ МАСЕЛ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
Определение проводят методом тонкослойной хроматографии
(2.2.27),
используя в качестве тонкого слоя октадецилсилильный силикагель для
высокоэффективной тонкослойной хроматографии.
Испытуемый раствор. Если нет других указаний в частной статье, около 20 мг
(каплю) жирного масла растворяют в 3 мл метиленхлорида Р.
Раствор сравнения. Около 20 мг (1 каплю) масла кукурузного Р растворяют в 3
мл метиленхлорида Р.
На линию старта хроматографической пластинки отдельно наносят по 1 мкл
испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку дважды
хроматографируют на расстояние 0,5 см, используя в качестве подвижной фазы
эфир Р, и дважды хроматографируют на расстояние 8 см, используя в качестве
подвижной фазы смесь растворителей: метиленхлорид Р - кислота уксусная
ледяная Р - ацетон Р (20:40:50). Затем пластинку сушат на воздухе, опрыскивают
раствором 100 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в спирте Р, нагревают при
температуре 120°С в течение 3 мин и просматривают при дневном освещении.
Типичная хроматограмма для идентификации жирных масел
приведена на Рис. 2.3.2.-1.
Рис. 2.3.2.-1 — Типичная хроматограмма для идентификации жирных масел
/
1 - арахисовое масло; 2 - оливковое масло; 3 - кунжутное масло; 4 - кукурузное
масло; 5 - миндальное масло; 6 - соевое масло; 7 - подсолнечное масло; 8 -
рапсовое масло; 9 - рапсовое масло (не содержащее эруковой кислоты); 10 - масло
зародышей пшеницы
2.3.3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФЕНОТИАЗИНОВ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ
Определение проводят методом тонкослойной хроматографии
(2.2.27),
используя в качестве тонкого слоя кизельгур G Р.
Пластинку помещают в закрытую камеру с необходимым количеством
пропитывающей смеси, содержащей 10% (об/об) феноксиэтанола Р в растворе
50 г/л полиэтиленгликоля 300 Р в ацетоне Р, таким образом, чтобы она была
погружена в пропитывающую смесь примерно на
5 мм. Когда фронт
растворителей пройдет 17 см от нижнего края пластинки, ее вынимают из камеры
и тотчас используют для хроматографирования. Хроматографирование
проводят в том же направлении, что и пропитывание.
Испытуемый раствор.
20 мг испытуемой субстанции растворяют в
хлороформе Р и доводят до 10 мл тем же растворителем.
Раствор сравнения. 20 мг соответствующего ФСО растворяют в хлороформе Р
и доводят тем же растворителем до 10 мл.
На линию старта хроматографической пластинки отдельно наносят по 2 мкл
испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку помещают в камеру
со смесью петролейного эфира Р и диэтиламина Р
(50:1), насыщенной
феноксиэтанолом Р (т.е., от 3 мл до 4 мл феноксиэтанола Р прибавляют к
вышеуказанной смеси растворителей, взбалтывают до образования
устойчивой мутности, декантируют и используют верхний слой, который
может быть мутным). Хроматографирование проводят в темном месте. Когда
фронт растворителей пройдет 15 см от линии старта, пластинку вынимают из
камеры, помещают в УФ-свет с длиной волны 365 нм и через несколько минут
проводят оценку хроматограммы.
На хроматограмме испытуемого раствора должно обнаруживаться пятно
на уровне пятна на хроматограмме раствора сравнения, соответствующее
ему по цвету флуоресценции и величине. Затем пластинку опрыскивают
раствором 10% (об/об) кислоты серной Р в спирте Р. На хроматограмме
испытуемого раствора должно обнаруживаться пятно на уровне пятна на
хроматограмме раствора сравнения, соответствующее ему по окраске и ее
стабильности в течение не менее 20 мин.
2.3.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗАПАХА
От 0,5 г до 2,0 г испытуемого образца распределяют тонким слоем на часовом
стекле диаметром от 6 см до 8 см; через 15 мин определяют запах или делают
вывод о его отсутствии.
2.4. ИСПЫТАНИЯ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ПРИМЕСЕЙ
2.4.1. АММОНИЯ СОЛИ
Метод А применяют, если нет других указаний в частной статье.
МЕТОД А
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, помещают в
пробирку, растворяют в
14 мл воды Р, при необходимости подщелачивают
раствором натрия гидроксида разведенным Р и доводят объем раствора водой Р
до 15 мл. Прибавляют 0,3 мл раствора калия тетрайодмеркурата щелочного Р.
В качестве эталона используют раствор, полученный прибавлением к 10 мл
эталонного раствора аммония (1 ррт NH4) Р 5 мл воды Р и 0,3 мл раствора калия
тетрайодмеркурата щелочного Р. Пробирки закрывают.
Через 5 мин желтая окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее
окраски эталона.
МЕТОД В
Количество тщательно растертого испытуемого образца, указанное в частной
статье, помещают в сосуд вместимостью
25 мл, снабженный полиэтиленовой
пробкой, и растворяют или суспендируют в 1 мл воды Р. Прибавляют 0,30 г магния
оксида тяжелого Р, помещают в сосуд под пробку полоску серебряно-марганцевой
бумаги Р, смоченную несколькими каплями воды Р, таким образом, чтобы отрезок
бумаги размером 5x5 мм находился ниже нижнего края пробки, после чего сосуд
немедленно закрывают пробкой. Перемешивают содержимое сосуда круговыми
движениями, не допуская попадания брызг на бумагу, и выдерживают в водяном
термостате при температуре 40°С в течение 30 мин.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят
эталон. К указанному в частной статье количеству эталонного раствора аммония
(1 ррт NH4) Р прибавляют 1 мл воды Р, 0,30 г магния оксида тяжелого Р и далее
поступают, как с испытуемым раствором.
Серая окраска серебряно-марганцевой бумаги Р, полученная в опыте с
испытуемым раствором, должна быть не интенсивнее окраски серебряно-
марганцевой бумаги Р, полученной в опыте с эталоном.
# МЕТОД С
Применяют для образцов, содержащих щелочноземельные и тяжелые
металлы.
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, помещают в
пробирку, растворяют в минимальном объеме воды Р, прибавляют при охлаждении
2 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р и 2 мл раствора натрия
карбоната Р. Раствор разводят водой Р до указанной в частной статье
концентрации, взбалтывают и фильтруют. 10 мл полученного фильтрата помещают
в пробирку, доводят объем раствора водой Р до 15 мл и прибавляют 0,3 мл
раствора калия тетрайодмеркурата щелочного Р.
В качестве эталона используют смесь 10 мл эталонного раствора аммония (I
ррт NH4) Р, 5 мл воды Р и 0,3 мл раствора калия тетрайодмеркурата щелочного
Р. Пробирки закрывают.
Через
5 мин желтая окраска испытуемого раствора должна быть не
интенсивнее окраски эталона.
# МЕТОД D
Применяют для образцов, содержащих более 300 ррт примеси железа.
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, помещают в
пробирку, растворяют в 10 мл воды Р, прибавляют 2 капли раствора натрия
гидрооксида разведенного Р и 3 мл раствора 200 г/л калия-натрия тартрата Р.
Тщательно перемешивают, доводят объем раствора водой Р до
15 мл и
прибавляют 0,3 мл раствора калия тетрайодмеркурата щелочного Р. Пробирку
закрывают.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в тех же условиях готовят
эталон, используя вместо 10 мл испытуемого раствора 10 мл эталонного раствора
аммония (1 ррт NH4) Р.
Через 5 мин желтая окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее
окраски эталона.
2.4.2. МЫШЬЯК
МЕТОД А
Прибор (см. Рис. 2.4.2.-1) состоит из конической колбы вместимостью 100
мл, закрытой стеклянной притертой пробкой, через которую проходит
стеклянная трубка длиной около 200 мм, с внутренним диаметром 5 мм.
Нижняя часть трубки вытянута до внутреннего диаметра
1,0 мм; на
расстоянии
15 мм от кончика трубки расположено боковое отверстие
диаметром от 2 мм до 3 мм. Трубка помещена таким образом, чтобы боковое
отверстие находилось минимум на 3 мм ниже нижней поверхности пробки.
Верхний конец трубки должен иметь совершенно плоскую притертую
поверхность, расположенную под прямым углом к оси трубки. Другая
стеклянная трубка длиной 30 мм с таким же внутренним диаметром и такой
же плоской притертой поверхностью помещается сверху первой и плотно
прикрепляется к ней двумя пружинами.
Нижнюю трубку неплотно заполняют 50-60 мг свинцово-ацетатной ваты Р
или помещают небольшой ватный тампон и скрученную в трубочку полоску
свинцово-ацетатной бумаги Р, массой
50-60 мг. Между плоскими
поверхностями трубок помещают кусочек ртутно-бромидной бумаги Р
такого размера, чтобы закрыть отверстие трубки (15x15) мм.
Указанное количество испытуемого образца помещают в коническую колбу
и растворяют в 25 мл воды Р или указанный объем испытуемого раствора
помещают в коническую колбу; доводят объем раствора водой Р до 25мл.
Прибавляют 15мл кислоты хлористоводородной Р, 0,1 мл раствора олова (II)
хлорида Р, 5 мл раствора калия йдида Р, оставляют на 15 мин и затем прибавляют
5 г цинка активированного Р. Немедленно соединяют две части прибора,
колбу помещают в водяную баню, температура которой поддерживается
такой, чтобы обеспечить равномерное выделение газа
(# температура
водяной бани не должна превышать 40оС).
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях
проводят опыт с эталоном, состоящим из
1 мл эталонного раствора
мышьяка (1 ррт As) P и 24 мл воды Р.
По истечении не менее
2 ч окраска ртутно-бромидной бумаги,
полученная в опыте с испытуемым раствором, должна быть не
интенсивнее окраски ртутно-бромидной бумаги, полученной в опыте с
эталоном.
Рис. 2.4.2.-1. Прибор для испытания на мышьяк (метод А)
Размеры указаны в миллиметрах
МЕТОД В
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, помещают
в пробирку, содержащую 4 мл кислоты хлористоводородной Р и около 5 мг
калия йодида Р, и прибавляют 3 мл реактива гипофосфита Р. Смесь нагревают
на водяной бане в течение 15 мин, время от времени встряхивая.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях
готовят эталон, используя вместо испытуемого вещества 0,5 мл эталонного
раствора мышьяка (10 ррт As) P.
После нагревания на водяной бане окраска испытуемого раствора
должна быть не интенсивнее окраски эталона.
# Метод В применяют в случае определения наряду с мышьяком селена и
теллура, а также при определении мышьяка в образцах, содержащих сурьму,
висмут, ртуть и серебро, а также сульфиды и сульфиты, и в других случаях,
указанных в частных статьях.
2.4.3. КАЛЬЦИЙ
При приготовлении всех растворов, применяемых в данном испытании,
должна использоваться вода дистиллированная Р.
К 0,2 мл эталонного раствора кальция спиртового (100 ррт Са) Р прибавляют
1 мл раствора аммония оксалата Р. Через 1 мин прибавляют смесь 1 мл
кислоты уксусной разведенной Р и 15 мл раствора, содержащего указанное в
частной статье количество испытуемого образца, и встряхивают.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят
эталон, используя смесь 1 мл кислоты уксусной разведенной Р, 10 мл эталонного
раствора кальция водного (10 ррт Са) Р и 5 мл воды дистиллированной Р.
Через 15 мин опалесценция испытуемого раствора не должна превышать
опалесценцию эталона.
2.4.4. ХЛОРИДЫ
К 15 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 1 мл кислоты
азотной разведенной Р и выливают смесь в один прием в пробирку,
содержащую 1 мл раствора серебра нитрата Р2.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят
эталон, используя вместо 15 мл испытуемого раствора 10 мл эталонного раствора
хлорида (5 ррт Сl) Р и 5 мл воды Р. Пробирки помещают в защищенное от света
место.
Через
5 мин пробирки просматривают на черном фоне горизонтально
(перпендикулярно оси пробирок). Опалесценция испытуемого раствора не
должна превышать опалесценцию эталона.
2.4.5. ФТОРИДЫ
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, 0,1 г песка Р,
промытого кислотой, и 20 мл смеси равных объемов кислоты серной Р и воды Р
помещают во внутреннюю пробирку прибора, изображенного на Рис. 2.4.5.-1.
Рубашку, заполненную тетрахлорэтаном Р, нагревают до т е м пе р ат у ры
кипения тетрахлорэтана
(146°С). Подсоединяют генератор водяного пара и
отгоняют содержимое пробирки с перегретым водяным паром, собирая отгон в
мерную колбу вместимостью 100 мл, содержащую 0,3 мл 0,1 М раствора натрия
гидроксида и 0,1 мл раствора фенолфталеина Р. Объем раствора в пробирке во
время отгонки должен быть постоянным
(20 мл). Поддерживают щелочную
реакцию содержимого мерной колбы, при необходимости прибавляя по каплям
0,1 М раствор натрия гидроксида. Доводят объем раствора водой Р до метки и
перемешивают (испытуемый раствор).
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят
эталон, используя вместо испытуемого вещества 5 мл эталонного раствора
фторида (10 ррт F) Р.
В цилиндр со стеклянной притертой пробкой помещают 20 мл испытуемого
раствора, в другой такой же цилиндр - 20 мл эталона, затем в каждый цилиндр
прибавляют по 5 мл реактива аминометилализариндиуксусной кислоты Р.
Через 20 мин синяя окраска испытуемого раствора, появившаяся вместо
первоначальной красной, должна быть не интенсивнее окраски эталона.
Рисунок 2.4.5.-1. Прибор для испытания на фториды
Размеры указаны в миллиметрах
2.4.6. МАГНИЙ
К 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного, как указано в
частной статье, прибавляют 0,1 г динатрия тетрабората Р. Определяют рН
раствора и при необходимости доводят до рН
8,8-9,2, используя кислоту
хлористоводородную разведенную Р или раствор натрия гидроксида
разведенный Р. Раствор помещают в делительную воронку, встряхивают в
течение
1 мин с двумя порциями, по
5 мл каждая, раствора
1 г/л
гидроксихинолина Р в хлороформе Р, оставляют до расслоения и отбрасывают
органический слой. К водному слою прибавляют 0,4 мл бутиламина Р и 0,1 мл
триэтаноламина Р. Определяют рН раствора и при необходимости доводят до
рН 10,5-11,5. Прибавляют 4 мл раствора 1 г/л гидроксихинолина Р в хлороформе
Р, встряхивают в течении
1 мин, оставляют до расслоения, нижний слой
отбирают и используют для испытания.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях
готовят эталон, используя вместо 10 мл раствора испытуемого вещества смесь
1 мл эталонного раствора магния (10 ррт Mg) Р и 9 мл воды Р.
Окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски эталона.
2.4.7. МАГНИЙ И ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫЕ МЕТАЛЛЫ
К 200 мл воды Р прибавляют 0,1 г гидроксиламина гидрохлорида Р, 10 мл
амиачного буферного раствора рН 10,0 Р, 1 мл 0,1 М раствора цинка сульфата и
около 15 мг индикаторной смеси протравного черного 11 P. Нагревают до
температуры около 40°С. Полученный раствор титруют 0,01 М раствором натрия
эдетата до перехода окраски раствора от фиолетовой к синей. К полученному
раствору прибавляют указанное в частной статье количество испытуемого
вещества, растворенное в 100 мл воды Р, или используют указанный в частной
статье раствор. Если окраска раствора становится фиолетовой, снова титруют
до перехода окраски раствора к синей.
Объем 0,01 М раствора натрия эдетата, израсходованный на второе
титрование, не должен превышать объем титранта, указанный в частной
статье.
2.4.8. ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ
МЕТОД А
К 12 мл водного раствора, указанного в частной статье, прибавляют 2 мл
буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученную смесь прибавляют к
1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и немедленно перемешивают.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят
эталон, используя вместо 12 мл испытуемого раствора смесь 10 мл эталонного
раствора свинца (1 ррт или 2 ррт Pb) P, указанного в частной статье, и 2 мл
испытуемого раствора.
Готовят контрольный раствор, используя смесь
10 мл воды Р и 2 мл
испытуемого раствора. В сравнении с контрольным раствором эталон должен
иметь светло-коричневую окраску.
Через 2 мин коричневая окраска испытуемого раствора должна быть не
интенсивнее окраски эталона.
МЕТОД В
Испытуемый образец растворяют в органическом растворителе с
минимально необходимым количеством воды (например, диоксан или ацетон
с добавлением 15% воды).
К
12 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют
2 мл
буферного раствора рН
3,5 Р и перемешивают. Полученную смесь
прибавляют к
1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и немедленно
перемешивают.
Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях
готовят эталон, используя вместо 12 мл испытуемого раствора смесь 10 мл
эталонного раствора свинца (1 ррт или 2 ррт Рb), как указано в частной статье, и
2 мл испытуемого раствора. Эталонный раствор свинца (1 ррт или 2 ррт Рb)
готовят путем разведения эталонного раствора свинца
(100 ррт Рb) Р
растворителем, применяемым для растворения испытуемого вещества.
Готовят контрольный раствор, используя смесь
10 мл растворителя,
применяемого для растворения испытуемого вещества, и 2 мл испытуемого
раствора. В сравнении с контрольным раствором эталон должен иметь
светло-коричневую окраску.
Через 2 мин коричневая окраска испытуемого раствора должна быть не
интенсивнее окраски эталона.
МЕТОД С
В фарфоровый или кварцевый тигель помещают 4 мл раствора 250 г/л
магния сульфата Р в кислоте серной разведенной Р и прибавляют
количество испытуемого образца, указанное в частной статье (не более 2 г).
Перемешивают тонкой стеклянной палочкой и осторожно нагревают. Если
смесь жидкая, осторожно выпаривают на водяной бане до сухого остатка,
затем постепенно нагревают до обугливания и продолжают нагревание до
получения почти белого или в крайнем случае, сероватого остатка.
Сжигание проводят при температуре не более
800оС. Оставляют до
охлаждения, затем остаток в тигле смачивают
несколькими каплями
кислоты серной разведенной Р. Выпаривают до сухого остатка, вновь
сжигают и оставляют до охлаждения. Общее время сжигания не должно
превышать 2 ч. Остаток из тигля количественно переносят в пробирку двумя
порциями кислоты хлористоводородной разведенной Р, по 5 мл каждая.
Прибавляют
0,1 мл раствора фенолфталеина Р, затем нейтрализуют
раствором аммиака концентрированным Р до появления розовой окраски.
Охлаждают, прибавляют кислоту уксусную ледяную Р до обесцвечивания
раствора и прибавляют еще
0,5 мл кислоты уксусной ледяной Р. При
необходимости фильтруют и промывают фильтр водой Р. Доводят объем
раствора водой Р до 20 мл и перемешивают. 12 мл полученного раствора
помещают в пробирку, прибавляют 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и
перемешивают. Полученную смесь прибавляют к
1,2 мл тиоацетамидного
реактива Р и немедленно перемешивают.
Параллельно готовят эталон, используя 4 мл раствора 250 г/л магния
сульфата Р в кислоте серной разведенной Р и указанный объем
эталонного раствора свинца (10 ррт РЬ) Р. Сжигают в тех же условиях, что
и
испытуемое
вещество,
количественно
переносят
кислотой
хлористоводородной, прибавляют раствор аммиака и затем кислоту
уксусную. Доводят объем раствора до 20 мл водой Р и перемешивают. К 10
мл полученного раствора прибавляют
2 мл раствора, полученного при
обработке испытуемого вещества, и 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и
перемешивают. Полученную смесь прибавляют к 1.2 мл тиоацетамидного
реактива Р и немедленно перемешивают.
Готовят контрольный раствор, используя смесь 10 мл воды Р и 2 мл
раствора, полученного при обработке испытуемого вещества. В сравнении с
контрольным раствором эталон должен иметь светло-коричневую окраску.
Через 2 мин коричневая окраска испытуемого раствора должна быть не
интенсивнее окраски эталона.
МЕТОД D
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, помещают
в фарфоровый или кварцевый тигель и тщательно смешивают с 0,5 г магния
оксида Р1. Сжигают при слабом красном калении
(около
600°С) до
образования однородного остатка белого или серовато-белого цвета. Если
после 30 мин сжигания смесь остается окрашенной, тигель оставляют до
охлаждения, содержимое перемешивают тонкой стеклянной палочкой и
повторяют сжигание. При необходимости операцию повторяют. Нагревают
при температуре 800°С около 1 ч. Остаток из тигля количественно переносят в
пробирку двумя порциями по 5 мл смеси равных объемов раствора кислоты
хлористоводородной Р1 и воды Р. Прибавляют
0,1мл раствора
фенолфталеина Р, затем подщелачивают раствором аммиака
концентрированным Р до появления розовой окраски. Охлаждают,
подкисляют кислотой уксусной ледяной Р до обесцвечивания раствора и
прибавляют еще 0,5 мл кислоты уксусной ледяной Р. При необходимости
фильтруют и промывают фильтр водой Р. Доводят объем раствора водой Р
до 20 мл и перемешивают. 12 мл полученного раствора помещают в пробирку,
прибавляют 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученную
смесь прибавляют к
1,2 мл реактива тиоацетамида Р и немедленно
перемешивают.
Параллельно готовят эталон следующим образом. К 0,5 г магния оксида
Р1 прибавляют указанный в частной статье объем эталонного раствора
свинца (10 ррт Рb) Р. Высушивают в сушильном шкафу при температуре от
100°С до
105°С, затем сжигают в тех же условиях, что и испытуемое
вещество, количественно переносят кислотой хлористоводородной,
прибавляют раствор аммиака и затем кислоту уксусную. Доводят объем
раствора до 20 мл водой Р и перемешивают. К 10 мл полученного раствора
прибавляют
2 мл раствора, полученного при обработке испытуемого
вещества, и 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученную
смесь прибавляют к
1,2 мл реактива тиоацетамида Р и немедленно
перемешивают.
Готовят контрольный раствор, используя смесь 10 мл воды Р и 2 мл
испытуемого раствора. В сравнении с контрольным раствором эталон
должен иметь светло-коричневую окраску.
Через 2 мин коричневая окраска испытуемого раствора должна быть не
интенсивнее окраски эталона.
МЕТОД Е
Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, растворяют
в 30 мл или в указанном объеме воды Р.
В держатель устройства для стерильного фильтрования, на подложку
которого помещен мембранный фильтр (размер пор
3 мкм), а сверху
него - предфильтр (Рис. 2.4.8.-1), устанавливают шприц вместимостью 50 мл
без поршня.
Испытуемый раствор помещают в шприц и вводят поршень, развивая
такое давление, чтобы профильтровался весь раствор. Открывают
держатель и вынимают предфильтр таким образом, чтобы мембранный
фильтр не загрязнился примесями. В противном случае его заменяют другим
мембранным фильтром и операцию повторяют в тех же условиях.
К фильтрату или к указанному в частной статье объему фильтрата
прибавляют 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученную
смесь прибавляют к 1,2 мл реактива тиоацетамида Р и перемешивают,
оставляют на
10 мин и вновь фильтруют, как описано выше, но
расположение
фильтров изменяют таким образом, чтобы жидкость
проходила вначале через мембранный фильтр, а затем - через предфильтр
(Рис.
2.4.8.-1). Давление поршня шприца должно быть умеренным и
постоянным для обеспечения медленного и равномерного фильтрования.
После окончания фильтрования держатель открывают, мембранный
фильтр вынимают и высушивают при помощи фильтровальной бумаги.
Эталон готовят аналогично, используя указанный в частной статье объем
эталонного раствора свинца (1 ррт Рb) Р.
Окраска мембранного фильтра, полученная в опыте с испытуемым
раствором, должна быть не интенсивнее окраски мембранного фильтра,
полученной в опыте с эталоном.
содержание .. 8 9 10 11 ..