Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 86

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  84  85  86 

 

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 86

 

 

ка, соответствующую рекомендациям ВОЗ (за

исключением дисков с карбенициллином, кото-

рые содержат 2 концентрации — 25 мкг для

определения чувствительности у штаммов

Е. coli и Proteus и 100 мкг для штаммов

Ps. aeruginosa). На одну чашку следует поме-

щать 6—10 дисков на равном расстоянии друг

от друга и на расстоянии 2 см от края чашки.

Чашки инкубируют при 37°С в течение 18 ч

в перевернутом вверх дном положении. Учет

результатов производят, измеряя с помощью

линейки диаметры зоны задержки роста

микробов вокруг дисков, включая диаметр

диска.

Метод определения чувствительности с по-

мощью дисков является качественным, позво-

ляющим разделить испытуемые культуры на

чувствительные и устойчивые. Вместе с тем уста-

новлена корреляционная зависимость между

размерами зон задержки роста микробов и зна-

чениями МПК антибиотика, что позволяет оце-

нить количественно степень чувствительности

изучаемого штамма (табл. 75) .

7.5.2. Метод разведений

в питательных средах

Количественный метод определения чувстви-

тельности к антибиотикам позволяет установить

минимальную подавляющую концентрацию пре-

паратов. Имеются две модификации метода:

разведение в плотных и жидких питательных

средах.

Из стандарта антибиотиков готовят основ-

ной раствор.

Для этого навеску препарата в 5—10 мг рас-

творяют в дистиллированной воде или соответ-

ствующем растворителе так, чтобы в 1 мл содер-

жалось 1000 мкг препарата. Затем из основного

раствора готовят серию разведений антибиотика

в питательных средах.

М е т о д р а з в е д е н и й в п л о т н о й  п и -

т а т е л ь н о й  с р е д е . Плотную питательную

среду (среды для определения чувствитель-

ности бактерий к антибиотикам) разливают во

флаконы по 100 мл при определении чувстви-

тельности одновременно у 100 культур. При

меньшем количестве испытуемых культур можно

использовать меньшие объемы питательной

среды. В каждый флакон вносят 1,5—2 мл буль-

она, содержащего такое количество антибиотика,

чтобы в 1 мл среды создавалась заданная кон-

центрация препарата (например, в 100 мл среды

вносят 10 000 мкг антибиотика в объеме 1,5—2мл,

тогда в 1 мл среды будет содержаться 100 мкг

препарата). Тщательно перемешивают и разли-

вают в чашки Петри примерно по 20 мл. На

поверхность подсушенного агара с помощью

штампа-репликатора наносят испытуемые куль-
туры. Используют 18-часовые бульонные культу-

ры или взвесь с 18-часовой агаровой культуры,

1

 См. Методические указания по определе-

нию чувствительности.— М., 1983.

по мутности соответствующей стандарту № 10

ГКИ им. Л. А. Тарасевича. Можно разделить

чашку на сектора и посев культур производить

штрихом.

Чашка с питательной средой, не содержа-

щая антибиотика, является контролем роста

культур.

Чашки с посевом инкубируют при 37 °С

18—24 ч. Диапазон разведения антибиоти-

ков зависит от установленных критериев чув-

ствительности для испытуемого вида микроор-

ганизмов.

При учете результатов отмечают наимень-

шую концентрацию антибиотика, задерживаю-

щую рост испытуемой культуры (МПК).

Метод двукратных разведений в жидкой

питательной среде. Готовят серию двукратных

разведений антибиотика в мясо-пептонном буль-

оне или бульоне, приготовленном на переваре

Хоттингера, который разливают в 10 пробирок

по 2 мл. В первую пробирку вносят 2 мл раст-

вора антибиотика определенной концентрации,

тщательно перемешивают и 2 мл из этой про-

бирки переносят в следующую и так далее до

предпоследней пробирки, из которой 2 мл уда-

ляют. Затем во все 10 пробирок вносят по 0,2 мл

суточной бульонной культуры или взвеси, содер-

жащей 10

5

—10

6

 микробных тел в 1 мл, приготов-

ленной путем смыва бульоном из 18-часовой

агаровой суточной культуры. Последняя про-

бирка не содержит антибиотика и является

контролем роста культуры. Пробирки инкуби-

руют при 37 °С в течение 18—24 ч. При учете

результатов отмечают последнюю пробирку, в

которой наблюдается полная задержка роста

микробов.

Концентрация антибиотика в 1 мл

среды соответствует МПК по отношению к испы-

туемой культуре и определяет степень ее чув-

ствительности к антибиотику.

Выбор метода определения чувствительности

к антибиотикам у испытуемых культур зависит

от целей исследования и возможности лабора-

тории.

Наиболее доступным и простым является

метод диффузии в агар с применением дисков.

Он широко используется в повседневной лабо-

раторной практике. Однако результаты, полу-

чаемые этим методом, можно расценивать как

качественные. Метод серийных разведений дает

более точные количественные результаты,

позволяющие сопоставить чувствительность изу-

чаемой культуры, определенную лабораторным

путем, с дозами препаратов, достигаемыми в ор-

ганизме больного.

Этот метод более трудоемок, чем метод

дисков, требует большей затраты времени

и посуды. Его используют в повседнев-

ной лабораторной практике при необходимости

получения количественных показателей чувстви-

тельности выделенного возбудителя для разра-

ботки индивидуального режима применения

препаратов больным.

Метод разведения в плотной питательной

среде позволяет одновременно определять чув-

ствительность у 25 —30 штаммов микроорганиз-

мов. Этот метод позволяет также определять

343

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

чувствительность к препарату у разных вариан-

тов микробной популяции, в то время как мето-

дом разведения в жидкой питательной среде

определяют чувствительность у всей популяции

в целом.

П и т а т е л ь н ы е  с р е д ы  д л я  о п р е -

д е л е н и я  ч у в с т в и т е л ь н о с т и  б а к -

т е р и й к  а н т и б и о т и к а м . Среда №  1 :

бульон Хоттингера с содержанием 120—

140 мг % аминного азота — 1000 мл,

агар-агар — 15 г, натрия фосфат двуза-

мещенный — 3 г, рН после стерилизации —

7,2—7,4.

Среда № 2: мясо-пептонный бульон  1 : 2 —

1000 мл, агар-агар — 15 г, натрия фосфат дву-

замещенный — 3 г, рН после стерилизации —

7,2—7,4.

Среда АГВ. Сухая питательная среда, в со-

став которой входят сухой питательный бульон,

агар-агар порошковидный («Тафуинский»),

крахмал растворимый, натрия фосфат двузаме-

щенный.

Среду готовят из сухого порошка в со-

ответствии с указанием, имеющимся на эти-

кетке; рН после стерилизации 7,4 ± 0,2.

Для гемофильных микроорганизмов, не ра-

стущих на обычных питательных средах, в пере-

численные выше питательные среды добавляют

5 % дефибринированной или гемолизированной

крови.

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 1175 от 21.11.79 г. «Об унификации клини-

ческих лабораторных методов исследова-

ния».— М., 1981.—86 с.

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 558 от 08.07.78 г. «Об унификации микро-

биологических методов исследования при

туберкулезе».— М., 1978.— 72 с.

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 380 от 16.04.75 г. «О состоянии и перспек-

тивах развития лабораторной клинико-диаг-

ностической службы в стране».— М., 1975.—

122 с.

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 250 от 13.03.75 г. «Об унификации методов

определения чувствительности микроорганиз-

мов к химиотерапевтическим препаратам».—

М., 1975.—40 с.

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 960 от 15.10.74 г. «Об унификации клиниче-

ских лабораторных методов исследования».—

М., 1974.—313 с.

Приказ Министерства здравоохранения СССР

№ 290 от 11.04.72 г. «Об унификации клини-

ческих лабораторных методов исследова-

ний».— М., 1972.— 199 с.

Альтгаузен А. Я. Клиническая лабораторная

диагностика.— М.: Медгиз, 1959.— 332 с.

Баркаган 3. С. Геморрагические заболевания

и синдромы.— М.: Медицина, 1980.— 336 с.

Биохимические методы исследования в клинике

(Справочник)/Под ред. А. А. Покровского.—

М.: Медицина, 1969.—652 с.

Взятие и доставка биоматериалов для лабора-

торных исследований в клинико-диагностиче-
ские лаборатории (Методические рекоменда-

ции).— М., 1979.— 105 с.

Кассирский И. А., Алексеев Г. А. Клиническая

гематология. Изд. 4-е, испр. и доп.— М.:

Медицина, 1970.— 800 с.

Кац А. М., Канторович А. С. Руководство по

приборам и оборудованию для медико-биоло-

гических исследований.— Л.: Медицина,

1976.— 255 с.

Комаров Ф. И., Коровкин Б. Ф., Меньшиков В. В.

Биохимические исследования в клинике.—

Л.: Медицина, 1976.— 383 с.

Многотомное руководство по микробиологии,

клинике и эпидемиологии инфекционных бо-

лезней/Под ред. Н. Н. Жукова-Вережни-

кова,— М.: Медгиз, 1962, т. 1.— 730 с.

Руководство по гематологии/Под ред. А. И. Во-

робьева, Ю. И. Лорие.— М.: Медицина,

1979.—584 с.

Руководство по иммунологии/Под ред. О. Е. Вя-

зова, Ш. X. Ходжаева.— М.: Медицина,

1973.— 391 с.

Руководство по клиническим лабораторным

исследованиям, основанное В. Е. Предтечен-

ским/Под ред. Е. А. Кост, Л. Г. Смирновой.—

М.: Медицина, 1964.— 960 с.

Руководство по клинической лабораторной диаг-

ностике/Под ред. В. В. Меньшикова.—М.:

Медицина, 1982.—576 с.

Руководство по клинической лабораторной диаг-

ностике/Под ред. М. А. Базарновой. Ч. 1 —

2.—Киев: Вища школа, 1981 — 1982.

Руководство по микробиологической диагно-

стике инфекционных болезней/Под ред.

К. И. Матвеева. Изд. 2-е.— М.: Медицина,

1973.—624 с.

Руководство по цитологической диагностике

опухолей человека/Под ред. А. С. Петровой,

М. П. Птохова.— М.: Медицина, 1976.— 304 с.

Рябов С. И., Наточин Ю. В., Бондаренко Б. Б.

Диагностика болезней почек.— Л.: Медицина,

1979.— 255 с.

Справочник по клиническим лабораторным ме-

тодам исследования/Под ред. Е. А. Кост. Изд.

2-е.—М.: Медицина, 1975.—383 с.

Тодоров И. Клинические лабораторные исследо-

вания в педиатрии/Под ред. Г. Г. Газенко.

Изд. 6-е.— София: Медицина и физкультура,

1968.— 1064 с.

ГОСТ 16263-70. Государственная система обес-

печения единства измерений. Метрология.
Термины и определения,— М.: Издательство

стандартов, 1982.— 52 с.

ГОСТ 11.004-74. Прикладная статистика. Пра-

вила определения оценок и доверительных

границ для параметров нормального распре-

деления.— М.: Издательство стандартов,

1974.— 20 с.

ГОСТ 8.417—81 (СТ СЭВ 1052—78). Государ-

ственная система обеспечения единства изме-

рений. Единицы физических величин.— М.:

Издательство стандартов, 1982.— 40 с.

ГОСТ 8.505-84. Метрологическая аттестация

методик выполнения измерений содержания

компонентов проб веществ и материалов.—

М.: Издательство стандартов, 1985.— 14 с.

(Jawets Е., Melnick J. L., Adelberg Е. А.) Джа-

вец Э., Мельник Дж. Л., Эйдельберг Э. А.
Руководство по медицинской микробиологии:

Пер. с англ.— М.: Медицина, 1982, т. 2.—

384 с.

345

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Methods of enzymatic analysis/Ed, by H. U. Berg-

meyer. 2th ed. Vol. 1—4.— New York—Lon-

don: Acad. Press, 1974.

К  р а з д е л у 1

Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непара-

метрических критериев статистики в медико-

биологических исследованиях.— Л.: Меди-

цина, 1973.— 141 с.

Единицы СИ в медицине: Пер. с англ./Отв. ред.

В. В. Меньшиков.— М.: Медицина, 1979.—

85 с.

Лабораторная диагностика: Сб. методических

материалов.— М.: СЭВ, 1984.— 45 с.

Меньшиков В. В., Делекторская Л. Н., Абра-

шина Е. В. Методические рекомендации по

применению в клинической лабораторной

диагностике наименований и обозначений еди-

ниц физических величин.— М., 1977.— 34 с.

Рокицкий П. Ф. Биологическая статистика.—

Минск: Вышэйшая школа, 1973.— 319 с.

A biblogist-s guide to principles and techniques

of practical biochemistry. Методы практиче-

ской биохимии/Под ред. Б. Уильямса, К. Уил-

сон: Пер. с англ.—М.: Мир, 1978.—268 с.

Barnett R. N. Clinical laboratory statistics.—

Boston: Little, Browe and company, 1974.—

197 p.

Dharan M. Total quality control in the clinical

laboratory.— Saint Louis: The C. V. Moshy

company, 1977.— 242 p.

(Lippert H.) Липперт Г. Международная си-

стема единиц (СИ) в медицине: Пер. с нем.

М. Н. Молоденкова.— М.: Медицина, 1980.-

208 с.

К - р а з д е л у 2

Алексеев-Беркман И. А. Клиническая копроло-

гия.—Л.: Медгиз, 1954.—312 с.

Краевский В. Я- Атлас микроскопии осадков

мочи.— М.: Медицина, 1976.— 167 с.

Михайлова Н. Д. Пособие по копрологическим

исследованиям.— Л.: Медгиз, 1962.— 150 с.

Фишзон-Рысс Ю. И. Современные методы иссле-

дования желудочной секреции. (Методики,

нормативы, клинич. значение).— Л.: Меди-

цина, 1972.— 247 с.

К  р а з д е л у 3

Абрамов М. Г. Гематологический атлас.— М.:

Медицина, 1979. - 279 с.; 1985—344 с.

Алексеев Г. А., Берлинер Г. Б. Гемоглобину-

рии.— М.: Медицина, 1972.— 248 с.

Алмазов В. А., Афанасьев Б. В., Зарицкий А. Ю.

и др. Лейкопении.— Л.: Медицина, 1981.—

240 с.

Вылков И. Н. Патология лимфатических узлов/

Пер. с болг.— София: Медицина и физкуль-

тура, 1980.— 246 с.

Идельсон Л. И. Гипохромные анемии.— М.:

Медицина, 1981,— 190 с.

Морозова В. Т. Лабораторная диагностика лей-

козов.— Л.: Медицина, 1977.— 152 с.

Теодорович В. П., Абдулкадыров К.. М. Трепано-

биопсия костного мозга при некоторых гема-

тологических заболеваниях.— Л,: Медицина

1977.—95 с.

(Hayhoe F. G. J., Quaglino D.) Хейхоу Ф. Г. Дж.,

Кваглино Д. Гематологическая цитохимия:

Пер. с англ./Под ред. Н. С. Кисляк.— М.:

Медицина, 1983.— 319 с.

К  р а з д е л у 4

Балуда В. П., Баркаган 3. С., Гольдберг Е. Д.

и др. Лабораторные методы исследования

системы гемостаза/Под ред. Е. Д. Гольд-

берга,—Томск, 1980,— 313 с.

Бокарев И. Н., Буторов В. Н., Логинов Л. Е.

Применение хромогенных субстратов для

диагностики нарушений свертывания крови и

фибринолиза.— Тер. арх., 1981, № 2, с. 118—

124.

Детинкина Г. Н., Дьмкина И. М., Торик Ж. Н.

Предложения по унификации методов иссле-

дования системы гемостаза. Ч. 1, 2, 3.—

Лаб. дело, 1984, № 3, с. 140—143; № 4, с. 225—

232; № 5, с. 269—276.

Методы исследования фибринолитической си-

стемы крови/Под ред. Г. В. Андреенко.— М.:

Изд-во Московск. ун-та, 1981.— 132 с.

Наследственные нарушения свертывания крови:

Доклад научной группы ВОЗ: Пер. с англ.—

Серия техн. докл. ВОЗ. М.: Медицина, 1975.—

60 с.

Папаян А. В., Шабалов Н. П. Геморрагические

диатезы у детей: Руководство для врачей.—

Л.: Медицина, 1982.—287 с.

Bowie Е. 1. W., Thompson 1. Н., Didisheim P. et al.

Mayo  c l i n i c laboratory  m a n u a l of hemosta-

sis.—  P h i l a d e l p h i a : W. B. Saunders Company,

1971.— 186 p.

Caen J., Larrieu M. J., Samama M. L'hemostase

Methodes d'exploration et diagnostic  p r a t i -

que.— Paris: 1975.

Haemostasia  a n d thrombosis/Ed, by A. L. Bloom,

D. P. Thomas.— Edinburgh:  C h u r c h i l l Living-

stone, 1981.— 868 p.

Human blood coagulation, haemostasis and

thrombosis/Ed, by R. Biggs, C. R. Rizza.—

Oxford; Blackwell, 1976.—600 p.

Ingram G. I. H., Brozovic M., Slater N. G. P.

Bleeding disorders: Investigation and manage-

ment.—Oxford: Blackwell, 1982.—413 p.

Trombosis and bleeding disorders. Theory and

methods/Ed. N. U. Bang et al. Stuttgart:

Georg Thieme. 1971.— 554 p.

К  р а з д е л у 5

Асатиани В. С. Ферментные методы анализа.—

М.: Наука, 1969.— 740 с.

Каракашов А. В., Вичев Е. П. Микрометоды

в клинической лаборатории: Пер. с болг.---

София: Медицина и физкультура, 1968.--

256 с.

Clinical chemistry: Principles and technics/Ed

by R. J. Henry, D. C. Cannon, J. W.  W i n k e l -

346

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  84  85  86