Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 77

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  75  76  77  78   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 77

 

 

принимают лимфоцит, присоединивший 3—5

эритроцитов. В ряде случаев эритроциты плотно

окутывают лимфоцит, образуя так называемую

морулу. Интерпретация этого феномена крайне

разноречива. Нередко он отражает методичес-

кие неточности постановки. Феномен розетко-

образования может быть усилен путем обра-

ботки эритроцитов нейраминидазой.

Определение Т-лимфоцитов методом спон-

танного розеткообразования с эритроцитами ба-

рана (Е-РОК).  П р и н ц и п . Тимусзависимые

Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов

барана, которые выступают, таким образом, спе-

цифическим маркером для их распознавания

(Е-РОК:  E r y t h r o c y t e — розеткообразующие

клетки).

П р и б о р ы и  о б о р у д о в а н и е .  1 .

Центрифуга ЦЛК-1. 2. Холодильник (бытовой).

3. Термостат. 4. Микроскоп люминесцентный

(МЛ-2 или другие типы). 5. Камера Горяева.

6. Счетчик клеток. 7. Автоматические пипетки

или микропипетки. 8. Пробирки силиконирован-

ные или пластиковые. 9. Штатив для пробирок.

Р е а к т и в ы . 1. Среда 199, раствор Хенкса.

2. Гепарин (готовят раствор из расчета

25 ЕД/мл крови). 3. Фосфатный буфер рН 7,4.

4. 0,01 % раствор акридинового оранжевого.

5. 0,1 % раствор эозина, 0,1 % раствор трипа-

нового синего на дистиллированной воде. 6. Ги-

пак (изопак, верографин, уротраст). 7. Фиколл-

400 (полисахарид с молекулярной массой

400000). 8. Эритроциты барана.

Х о д  о п р е д е л е н и я . 10 мл крови из

локтевой вены вносят в пластиковую пробирку

с раствором гепарина (256 ЕД/мл) и осторожно

перемешивают. Гепаринизированную кровь раз-

водят фосфатным буфером рН 7,4 в соотношении

1 : 2; 9 мл смеси осторожно наслаивают на раст-

вор фиколл-гипак плотности 1,077 г/мл (12 ча-

стей 9 % фиколла и 5 частей 33,9 % гипака плот-

ности 1,077 г/мл). Пробирки центрифугируют

40 мин при 1500 об/мин.

В связи с тем что могут использоваться раз-

ные системы центрифуг, необходимо применять

такие режимы центрифугирования, чтобы сила

разделения в интерфазе составила 400 g. Вели-

чину центробежного ускорения G вычисляют по

формуле:  G = l , l - n

2

- R - 1 0 -

5

 (n — число оборо-

тов в минуту, R — радиус от центра оси центри-

фуги до границы соприкосновения смеси фи-

колл-гипака с разделяемой суспензией в см).

После центрифугирования слой лимфоцитов

осторожно пипеткой извлекают из интерфазы

и дважды отмывают буферным раствором. Кон-

центрацию клеток доводят до 2—4 млн. в 1 мл

в среде 199 ', содержащей 10 % раствор телячь-

ей сыворотки или сыворотки IV (АВ) группы

крови человека. При использовании последней

необходима инактивация при 56 °С в течение

30 мин и абсорбция эритроцитами. Для этого

0,5 мл осадка отмытых эритроцитов добавляют

1

 Можно использовать любой буферный

раствор рН 7,0—7,2 без ионов Са

 + +

 (наличие

ионов Са

+ +

 способствует конгломерации кле-

ток, их коагуляции).

к 1 мл сыворотки и инкубируют в течение 1 ч при

37 °С, периодически встряхивая. Желательна

абсорбция сыворотки пулом лейкоцитов, учиты-

вая возможность наличия антилейкоцитарных

антител. При использовании человеческой сыво-

ротки необходимо учитывать влияние аутоцито-

лимфотоксинов, проявляющих максимум актив-

ности при 4 °С.

Перед использованием суспензии лимфоци-

тов проверяют их жизнеспособность. Равные

объемы 0,1 % раствора водного эозина на среде

Хенкса или Рингера двойной концентрации без

глюкозы и 0,1 % раствора трипанового синего

на дистиллированной воде смешивают перед

употреблением и 1—2 капли добавляют к капле

сус,пензии клеток и часть смеси переносят в

камеру Горяева. Окрашенные (мертвые) клетки

просчитывают на 100 клеток в поле зрения. При

правильной обработке процент мертвых кле-

ток не превышает 3.

П р и г о т о в л е н и е  э р и т р о ц и т о в

б а р а н а . Используют эритроциты одного жи-

вотного или смесь, полученную от нескольких.

Эритроциты можно хранить в течение 2 нед при

4 °С в растворе Олсвера (глюкоза — 2,05 г,

цитрат натрия — 0,8 г, хлорид натрия — 0,42 г,

дистиллированная вода—100 мл), рН этого

раствора устанавливают равным 6,1 с помощью

10 % раствора лимонной кислоты. Перед упо-

треблением эритроциты барана 3—4 раза отмы-

вают фосфатным буфером и готовят 0,5 % (по

объему) взвесь клеток.

П о д г о т о в к а и  у ч е т  р е а к ц и и  р о -

з е т к о о б р а з о в а н и я . Реакцию проводят

по методу, описанному Jondal и соавт. в 1972 г.

В пластиковые пробирки (от 2 до 5) вносят

0,1 мл взвеси лимфоцитов и добавляют равный

объем 0,5 % взвеси эритроцитов барана. Соотно-

шение эритроциты: лимфоциты не должно пре-

вышать 50 : 1. Инкубируют смесь в термостате

37 °С в течение 10 мин. Затем пробы центри-

фугируют 5 мин при 1000 об/мин (для ЦЛК-1)

и оставляют на ночь в холодильнике при темпе-

ратуре 4 °С. Подсчет клеток мы рекомендуем

проводить в камере Горяева. Существующий

метод фиксации суспензии глютаровым альде-

гидом с последующим приготовлением мазков

и просчетом розеток в окрашенных препаратах

позволяет накапливать стекла и анализировать

результаты реакций в другой, свободной от по-

становки или менее загруженный, день. Однако

глутаровый альдегид изменяет поверхность

эритроцитов барана, вызывает неспецифическое

прилипание их к клеткам крови человека. Не

исключено, что глутаровый альдегид десеквест-

рирует скрытые антигены в мембране бараньих

эритроцитов, к которым имеются рецепторы у

лимфоцитов человека. Более перспективен в

этом плане ацетальдегид, фиксация которым

эритроцитов стандартизирует определение

Т-лимфоцитов и делает возможным обоснован-

ное сопоставление результатов, полученных раз-

ными лабораториями.

Для просчета клеток в камере Горяева оса-

док клеток в извлеченных из холодильника про-

бирках осторожно ресуспендируют пастеровской

пипеткой (несколько раз медленно набирают и

11

307

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

выпускают клеточную взвесь) и добавляют

0,02 мл 0,01 % раствора в фосфатном буфере

акридинового оранжевого. Этот краситель дает

ярко-зеленую люминесценцию при возбуждении

ультрафиолетом. Через 2—3 мин заполняют ка-

меру Горяева и определяют процент Е-РОК пу-

тем подсчета 300 лимфоцитов в люминесцент-

ном микроскопе. Это значительно облегчает и

ускоряет процедуру счета ярко светящихся лим-

фоцитов, окруженных розоватыми эритроци-

тами.

В день взятия крови на Т-лимфоциты необ-

ходимо проводить общий анализ крови, который

дает возможность высчитывать абсолютные зна-

чения Т-клеток.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы Т-клеток,

определенные нами у 150 здоровых доноров:

54,3±0,98 %; 979,8±16,8 кл/мкл.

Определение активных Т-лимфоцитов, обра-

зующих розетки с эритроцитами барана (ЕА-

РОК). Все подготовительные операции выпол-

няют так, как это описано для Е-РОК, за исклю-

чением сыворотки, которую при определении ЕА-

РОК не добавляют в инкубационную среду, и

длительной холодовой инкубации. После термо-

статирования 10 мин при 37 °С и последующего

центрифугирования при 1000 об/мин (для

ЦЛК-1) в течение 5 мин проводили подсчет

Т-активных  л и м ф о ц и т о в способом, описанным

выше для общих Т-клеток.

С о д е р ж а н и е Т-активных лимфоцитов у

150 здоровых доноров составило: 34,6 ±1,92 %,

840+123 кл/мл.

Определение теофиллинчувствительности Т-

клеток.  П р и н ц и п . Препараты, повышающие

уровень внутриклеточного цАМФ (теофиллин,

аденозин), ингибируют реакцию спонтанного ро-

зеткообразования между зрелыми Т-лимфоци-

тами и эритроцитами барана.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Используемые

реактивы и оборудование аналогичны для опи-

санного выше метода определения Т-активных

лимфоцитов. Исключение составляет теофиллин

(химически чистое соединение), 0,3 М раствор

которого на дистиллированной воде, подогретой

до 60 °С, готовят каждый раз при постановке

метода. Охлажденный до комнатной темпера-

туры теофиллин добавляют в инкубационную

среду (без добавления сыворотки), термоста-

тируют, центрифугируют и просчитывают клетки

так же, как и Т-активные. Выявляют 2 субпопу-

ляции: теофиллинчувствительные Т-клетки, т.е.

лимфоциты, утратившие способность к розетко-

образованию под влиянием обработки теофил-

лином, и теофиллинустойчивые Т-клетки.

У здоровых доноров соотношение теофиллин-

чувствительных и устойчивых Т-клеток состав-

ляет 1 : 3.

Выявление Т-лимфоцитов, образующих ро-

зетки с аллогенными и аутологичными эритро-

цитами.  П р и н ц и п . Существуют субпопу-

ляции лимфоцитов, образующих розетки с алло-

генными и аутологичными эритроцитами.

П р и б о р ы ,  о б о р у д о в а н и е и  р е а к -

т и в ы  о п и с а н ы выше. Суспензию лимфо-

цитов выделяют уже описанным выше
методом.

Эритроциты человека: необходимо исполь-

зовать эритроциты  0 ( 1 ) резусотрицателынж

группы крови. Следует брать, по возможности,

кровь нескольких постоянных доноров. Приго-

товление эритроцитов аналогично описанному

методу для эритроцитов барана. К взвеси лим-

фоцитов в тех же соотношениях добавляют одно-

временно эритроциты барана и эритроциты че-

ловека. Просчитывают лимфоциты, связавшие

эритроциты и барана, и человека. Реакцию с

аутологичными эритроцитами проводят так же,

как с аллогенными.

6.6.2. В-лимфоциты

Определение В-клеток методом розеткообра-

зования с эритроцитами барана в системе ЕАС.

П р и н ц и п . Тимуснезависимые В-лимфоциты

имеют на своей мембране специфические детер-

минанты, позволяющие дифференцировать их от

Т-лимфоцитов. Таким детерминантом является

поверхностный (мембранный) иммуноглобулин

класса М. Число лимфоцитов, несущих иммуно-
глобулин A, G, Е или D, крайне незначительно

(А — 1—5 %, D и Е — 2—4 %), рецепторы для

Fc-фрагмента иммуноглобулина G для третьего

компонента комплемента (Сз). Выделяют и дру-

гие специфические рецепторы, в частности для

вируса Эпштейна—Барр, плазмоклеточный ан-

тиген, антиген 1а. Однако последние не нашли

еще отражения в клинической практике. Чаще

применяется метод выявления В-клеток по

их способности образовывать розетки с ба-

раньими эритроцитами, нагруженными антите-

лами в среде комплемента. Такие эритроциты

маркируют и Fc, и Сз рецепторы В-лимфоцитов.

Приборы и реактивы те же, что и для метода

определения Т-лимфоцитов. Аналогично готовят

и суспензию лимфоцитов.

А н т и с ы в о р о т к у ,  с о д е р ж а щ у ю

а н т и т е л а к  э р и т р о ц и т а м , готовят пу-

тем иммунизации кролика эритроцитами барана

или быка. Кролику в краевую вену уха вводят

3—5 мл 50 % суспензии эритроцитов. На 4—6-й

день у него берут кровь и получают сыворотку,

которая в этот период на высоте иммунного от-

вета преимущественно содержит антитела клас-

са М. Наилучший эффект получают при работе

с гамма-глобулиновой фракцией сыворотки, ко-

торую получают высаливанием в насыщенном

растворе аммиака или риванола. Антисыворотку

инактивируют и определяют ее гемолитический

и агглютинационный титр.

Можно использовать готовую и широко до-

ступную кроличью гемолитическую сыворотку.

К о м п л е м е н т . Источником комплемента

служат свежие сыворотки мышей. Беспородных

мышей декапитируют, кровь сливают в про-

бирку, получают сыворотку, которую затем сор-

бируют пулом человеческих эритроцитов и опре-

деляют активность комплемента в гемолитиче-

ской системе.

С е н с и б и л и з а ц и я  э р и т р о ц и т о в .

Смешивают равные объемы 1 % взвеси бараньих

эритроцитов (предпочтительнее эритроциты бы-

ка) и антисыворотки к виду эритроцитов, ис-

308

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

пользуемых в реакции (или кроличьей гемоли-

тической сыворотки) в субагглютинирующем

разведении. Смесь инкубируют 40 мин при 37 °С,

осторожно встряхивая каждые 10 мин. После

термостатирования эритроциты трижды отмы-

вают фосфатным буфером до 10 мин при

1500 об/мин. Супернатант отбрасывают, а к

осадку добавляют первоначальный объем фос-

фатного буфера и равный объем абсорбирован-

ной  м ы ш и н о й сыворотки, содержащей компле-

мент в разведении 1 : 10. Смесь помещают в тер-
мостат при 37 °С на 30 мин. Вновь эритроциты

трижды отмывают. При отмывании их центри-

фугируют осторожно при 1000 об/мин 5 мин,

чтобы не вызвать агглютинации эритроцитов. Го-

товят 0,5 % суспензию эритроцитов и просмат-

ривают под микроскопом. При наличии агглюти-

н а ц и и эритроцитов суспензия непригодна. Го-

товые эритроциты, нагруженные антителами и

комплементом (ЕАС), можно хранить в холо-

дильнике (4 °С) 4—5 дней.

О п р е д е л е н и е  Е А С  л и м ф о ц и т о в .

К 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,1 мл

сенсибилизированных эритроцитов. Оптималь-

ное соотношение эритроцитов к лимфоцитам

равно 20 : 1. Смесь инкубируют 45 мин при 37 °С,

после чего пробирки помещают в лед. Подсчет

В-клеток проводят описанным выше способом

(см. «Определение Т-клеток»).

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е .  И з реко-

мендаций ВОЗ и нашего более чем 10-летнего

опыта определения Т- и В-клеток при различных

заболеваниях ясно, что информативность этого

вида иммунологического анализа ограничена.

Это исследование абсолютно показано при пер-

в и ч н ы х иммунодефицитных состояниях не толь-

ко для их типирования, но и для дифференци-

рования от вторичных иммунодефицитных со-

стояний. Диагностическая значимость подсчета

Т- и В-лимфоцитов выявлена при идентифика-

ции лимфопролиферативных расстройств. Учи-

тывая то обстоятельство, что лимфоциты при

различных стрессорных воздействиях под влия-

н и е м эндогенных гормонов некоторых лекарст-

венных препаратов мигрируют из периферической

крови в лимфоток, лимфоидные органы, рыхлую

соединительную ткань, широкое применение ис-

следований Т- и В-клеток крови в клинической

практике малообоснованно. Диагностическую

ценность несут исследования этих лимфоцитов

в синовиальной жидкости при ревматоидном

артрите, в моче при верификации определенных

форм поражения почек. Очевидна необходи-

мость изучения реакции Т-клеток на различные

медикаментозные препараты, используемые в

настоящее время клиникой в качестве иммуно-

модуляторов, для объективизации их назначе-

ния в каждом конкретном случае. Выявление

значительного снижения Т-клеток может способ-

ствовать утверждению в диагнозе амилоидоза.

Можно ожидать, что изучение субпопуляций

Т-лимфоцитов, их соотношения друг с другом и

в общем пуле лимфоцитов будет более инфор-

мативно в оценке ряда патологических состоя-
н и й и эффективности выбранной терапии.

Т-активная субпопуляция представляет со-

бой преимущественно клетки, несущие супрес-

сорную функцию (есть исследования, характе-

ризующие их и как клетки-помощники). Теофил-

линчувствительные клетки представлены субпо-

пуляцией супрессоров, а теофиллинустойчи-

вые — клетками-помощниками. Т-клетки, обра-

зующие розетки с аутоэритроцитами, как пола-

гают, несут киллерную функцию и играют ос-

новную роль в механизмах аутоагрессии.

Изучение динамики эффекторных звеньев

клеточного иммунитета отражает активность

процесса, помогает правильно подобрать тера-

пию, уточнить механизмы медикаментозной

чувствительности. Но, как правило, эти методы

используют для научных исследований.

6.6.3. Реакция миграции лейкоцитов

П р и н ц и п . Подвижность лейкоцитов пе-

риферической крови, их миграция к очагам

тканевой деструкции, хемотаксис к ауто- и ге-

тероантигенам, перераспределение между лим-

фоидными органами при стрессорно-адаптивных

реакциях являются составляющей компонентой

общей системы реактивности, способности к со-

х р а н е н и ю постоянства внутренней среды.

Сенсибилизированные к определенному ан-

тигену лимфоциты резко снижают скорость под-

вижности в среде, в которую вносят этот анти-

ген. Реакция осуществляется при непосредствен-

ном взаимодействии антигенспецифических ре-

цепторов с антигеном, а также через воздействие

фактора, ингибирующего миграцию клеток, вы-

деляющегося при контакте со специфическим

антигеном. Этот феномен позволяет продемон-

стрировать органоспецифическую клеточно-

опосредованную гиперчувствительность.

Реакция торможения миграции агармигра-

ционным тестом.  П р и б о р ы и  о б о р у д о -

в а н и е . 1. Пластиковые или стеклянные  ч а ш к и

диаметром 50 мм. 2. Пробойники для агара

диаметром 2,5 мм. 3. Проекционный аппарат

«Микрофот» типа 5ПО-1.

Р е а к т и в ы . 1. Агар-агар (способ приго-

товления и очистки см. выше). 2. Трис-хлорид-

н ы й буфер рН 7,3. 3. Среда 199. 4. Сыворотка

крупного рогатого скота. 5. Гепарин. 6. Анти-

биотики (для консервации), нетоксичные для

клеток.

Х о д  р е а к ц и и .  3 % агар-агар  н а изото-

ническом растворе натрия хлорида, забуферен-
ном трис-хлоридным буфером рН 7,3, охлажден-

ном до 50 °С, добавляют к 10 мл смеси: 9 мл

среды 199,1 мл сыворотки крупного рогатого

скота, 3000 ЕД мономицина (смесь предвари-

тельно прогревают до 37 °С). Полученный гель

разливают в чашки (если используются стек-

лянные, то их необходимо силиконировать),

установленные строго горизонтально в коли-

честве, необходимом для создания слоя толщи-

ной 2 мм. В затвердевшем геле пробивают лунки

(2,5 мм) в количестве, обусловленном опытом.

Концентрацию антигена, которую необходимо

внести в смесь, высчитывают опытным путем

(по дозе, вызывающей наименьший разброс в

повторных постановках) для каждого антигена

и серии опытов.

309

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

В ы  д е л е н и е  л е й к о ц и т е  в . В пробир-

ку помещают 10 мл гепаринизированной крови

обследуемого (25 ЕД гепарина на 1 мл крови).

В течение 1 ч пробирку выдерживают в термо-

стате 37 °С под углом 45°. Через 50 мин про-

бирки переводят в вертикальное положение и

выдерживают еще 10 мин. После отстаивания

плазму осторожно отсасывают и переносят в

центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин

при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость уда-

ляют. Примесь эритроцитов в клеточном осадке

лизируют в гипотоническом растворе хлорида

натрия, для чего к клеточному осадку добав-

ляют 5 мл 0,35 % раствора и осторожно пасте-

ровской пипеткой ресуспендируют клетки, не

допуская образования пены, в течение 30—45 с.

После экспозиции к суспензии клеток немедлен-

но добавляют 0,6 мл 5 % раствора хлорида нат-

рия и тщательно перемешивают. В результате

раствор становится изотоничным. Полученную

взвесь лейкоцитов трижды отмывают средой

199 или фосфатным буфером рН 7,4.

Контрольные и опытные исследования про-

водят в 4 параллельных лунках, внося в каждую

из них по 5 мкл ресуспендированной лейковзвеси

(1,5 млн. клеток). Через 20 ч инкубации чашек

в термостате при 37 °С их заливают 10 % раст-

вором формалина (в целях фиксации клеток).

Через 4 ч слой агара осторожно удалают, чашки

промывают и высушивают. Результаты учиты-

вают путем проектирования полей миграции на

бумагу с помощью аппарата «Микрофот». Ин-

декс миграции (И) определяют по расчету соот-

ношения величин площадей миграции в опыте

и контроле по формуле:

/72 J2

,,

 Да U

0

где До — средний диаметр 4 зон миграции в

опыте; Д1 — средний диаметр 4 зон миграции

в контроле; dl — средний диаметр 4 централь-

ных лунок в опыте; dl — средний диаметр 4

центральных лунок в контроле.

Реакция торможения миграции лейкоцитов

в прямом капиллярном тесте. Выделение лей-

коцитов проводят аналогично описанному выше.

Выделенные лейкоциты ресуспендируют в 0,1 мл

среды 299 или фосфатного буфера. Этой кле-

точной взвесью заполняют стеклянные капил-

ляры с внутренним диаметром 0,7 мм и длиной

12 см (капилляры необходимо точно калибро-

вать, так как от этого зависит стандартизация

объемов клеточной взвеси). С одного конца ка-

пилляр запаивают и центрифугируют при

1000 об/мин в течение 5 мин. Концы капилляров,

содержащие клетки, нарезают кусочками по 5—

6 мм и погружают в стеклянные камеры, запол-

ненные средой 199, закрепляя их в центре с по-

мощью вазелина, предварительно нанесенного

на дно камеры. Камеру герметически закрывают

(притирают с вазелином) покровным стеклом

и помещают в термостат при 37 °С на 20 ч в

строго горизонтальном положении. Оба конца

капилляра открыты (камеры готовят из стеклян-

ных колец  2 0 X 1 0 X 2 мм, фиксированных на

предметных стеклах смесью воск-парафин).

Концентрацию вносимого антигена рассчиты-

вают экспериментально и определяют в мкг/мл

по концентрации белка. На каждую концентра-

цию антигена и контроль используют по 2 ка-

пилляра и соответственно получают 4 зоны ми-

грации. Измерение зон миграции, исчисление их

площади проводят различными способами. Наи-

более распространен метод проектирования

чашек (камер) с мигрирующими лейкоцитами,

образующими облачко над капилляром, с ис-

пользованием фотопроектора на миллиметровую

бумагу или фотопленку. Проекцию зоны мигра-

ции обводят карандашом и высчитывают пла-

ниметром или (при использовании рентгенов-

ской пленки) вырезают и взвешивают. Индекс

миграции (И) определяют по формуле:

Приготовление и очистка антигенов доста-

точно полно отражены в ряде руководств (см.

рекомендованную литературу).

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Выявле-

ние сенсибилизированных к определенному ан-

тигену лимфоцитов говорит об участии этого

антигена в развитии специфической гиперчувст-

вительности и в ряде случаев может быть ис-

пользовано в диагностике опухолей, гломеруло-

нефрита, дифференциальной диагностике неспе-

цифических миокардитов и кардиопатий.

Л и т е р а т у р а . Петров Р. В. Иммуноло-

гия.— М.: Медицина, 1982; Руководство по им-

мунологии / Под ред. О. Е. Вязова, III X. Ход-

жаева.— М.: Медицина, 1973; Лимфоциты. Вы-

деление, фракционирование и характеристика

/ Под ред. Д. Натвига, П. Перлмана, X. Виг-

зеля.— М.: Медицина, 1980.

6.6.4. Фагоцитарная активность

нейтрофилов периферической крови

П р и н ц и п . Полиморфноядерные лейко-

циты, моноциты периферической крови способны

связывать на своей поверхности, поглощать и

переваривать микробную тест-культуру.

Обычно используют стафилококк штамма

209. Однако он практически не подвергается

внутриклеточному перевариванию и исключает

прямое изучение этой функции фагоцитоза.

Мы рекомендуем использовать штамм 9198.

П о с у д а и  о б о р у д о в а н и е .  ( . Х и м и -

ческие пробирки. 2. Предметные стекла. 3. Шли-

фовальное предметное стекло. 4. Пипетки мер-

ные. 5. Микроскоп. 6. Центрифуга.

Р е а к т и в ы . 1. Метанол. 2. Красители:

азур II, эозин. 3. Глицерин. 4. Среда 199.

5. Смесь донорских сывороток (2—3)  A B ( I V )

группы. 6. Изотонический раствор хлорида нат-

рия. 7. Набор стандартов для определения кон-

центрации микробных тел по мутности. 8. Су-

точная культура Staphilococcus epidermidis

шт. 9198.

Х о д  о п р е д е л е н и я . В стерильную про-

бирку с заранее внесенным раствором 0,6 мл ге-

310

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  75  76  77  78   ..