Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 59

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  57  58  59  60   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 59

 

 

можно судить по содержанию белкового или уг-

леводного компонента, но последний путь на-

дежнее. Содержание в плазме гексоз, связанных

с белком, свидетельствует об общем количестве

гликопротеидов, а определение гексоз, которые

растворимы в хлорной кислоте и нерастворимы

в фосфорновольфрамовой, служит показателем
количества серомукоидов.

Большинство цветных реакций на сахара

может быть также использовано для определе-
ния углеводных компонентов гликопротеидов.

Из них наиболее подходящим для определения
гексоз орциновый метод, а для определения

сиаловых кислот — резорциновый метод и метод

с уксусно-сернокислым реактивом.

Хотя клиническая трактовка результатов

определения перечисленных выше веществ во

многом схожа, содержание отдельных углевод-

ных компонентов изменяется не всегда строго
параллельно, так как индивидуальные белки

острой фазы содержат их в разных количествах
и все зависит от того, какой конкретный протеид
преимущественно изменился. По этой причине

в клинике, в частности в ревматологической,
стремятся одновременно определять несколько

различных показателей.

Протеогликаны. Этими соединениями очень

богато межклеточное вещество соединительной

ткани, патологические процессы в которой отра-

жаются на обмене углеводного компонента —

гликозаминогликанов (ГАГ) и содержании их

в моче. Протеогликаны весьма гидрофильны,

они способны впитывать большое количество
воды, чем и определяется их более старое назва-

ние «мукополисахариды». Гистохимически они
выявляются по способности к метахроматиче-

ской окраске, т. е. окрашиванию в цвет, отлич-
ный от цвета красителя.

ГАГ состоят из повторяющихся дисахарид-

ных единиц, каждая из которых содержит
аминосахар и уроновую кислоту или галактозу;

другие углеводы (фукоза, сиаловые кислоты,

манноза и ксилоза) присутствуют  л и ш ь в

ничтожных количествах. При определении ГАГ

в крови или в моче их обычно сначала выделяют,

используя способность образовывать осадки

с четвертичными аминами, содержащими длин-
ную углеводную цепь, в частности с цетилтриме-

тиламмонием, а затем определяют углеводный
компонент специфической реакцией в карбазо-

лом или орцином. Результаты определения ГАГ

карбазоловым и орциновым методом очень часто
не совпадают, что имеет определенное диагнос-

тическое значение.

Известно 7 типов ГАГ, из них 5 содержат

в своем составе глюкуроновую кислоту, шес-

той — идуроновую кислоту, называемую также

галактуроновой, а седьмой — галактозу. Глюку-

роновую кислоту содержит гиалуроновая кисло-

та, хондроитин-4-сульфат (хондроитинсуль-

фат А), хондроитин-6-сульфат (хондроитин-
сульфат С), гепарин и гепарансульфат;
дерматансульфат (хондроитинсульфат В) со-

держит идуроновую кислоту, а кератосульфат

или кератансульфат — галактозу. Глюкуроно-

вая кислота в реакции с орцином дает такое же
окрашивание, как и идуроновая, в то же время

карбазоловая реакция интенсивнее развивается

с глюкуроновой кислотой, чем с идуроновой.
На этом основан простой метод, позволяющий

судить об относительном содержании дерматан-

сульфатов по так называемому коэффициенту

К/О, который рассчитывают путем деления

содержания ГАГ, определенного по карбазоло-
вой реакции, на их содержание, определенное

по реакции с орцином; разумеется, оба резуль-

тата должны быть выражены в молях. Для
чистого образца дерматансульфата этот коэф-
фициент равен 0,67, для прочих ГАГ (за ис-
ключением, конечно, кератансульфата) он

выше.

Увеличение экскреции ГАГ с мочой служит

признаком повреждения соединительной ткани

вследствие иммунного процесса, воспаления или

же врожденного дефекта обмена. При приобре-

тенных заболеваниях (ревматизм, склеродер-

мия) увеличение коэффициента К/О характерно

для более тяжелых, деструктивных процессов,

в то время как при преобладании фибротиче-

ских, склеротических и дистрофических процес-

сов коэффициент падает, видимо, потому, что
появляются гетерогенные Протеогликаны с высо-

ким содержанием идуроновой кислоты.

Унификация методов. В 1972 г. унифициро-

в а н ы резорциновый метод определения сиало-

вых кислот и определения связанных с белками
гексоз и гексоз, связанных с серомукоидом

орциновым методом.

Л ит е р а т у р а. Астахова Т. А, Балаба-

нова Р. М. Гликозаминогликаны мочи при

системной склеродермии.— Тер. арх., 1980,
№ 12, с. 100^104; Видершайн Г. Я. Биохимиче-

ские основы гликозидозов.— М.: Медицина,

1980.

5.5.3. Сиаловые кислоты

Унифицированный резорциновый метод.

П р и н ц и п . При нагревании гликопротеидов

плазмы с трихлоруксусной кислотой отщепля-

ются сиаловые кислоты, которые в свою очередь

гидролизуются с образованием свободной ней-

раминовой кислоты и уксусной кислоты. Резор-
цин в присутствии солей меди дает с нейрамино-

вой кислотой синее окрашивание.

Р е а к т и в ы . 1. Меди сульфат, 0,1 моль/л:

растворяют 624 мг сульфата меди (медный купо-

рос, CuSO

4

-5Н

2

O) в 25мл воды. 2. Резорцин

2 г/л. Резорциновый реактив готовят, растворяя

200 мг резорцина в 10 мл воды, затем добавляют
80 мл концентрированной НС1 (отн. плотность

1,19) и 0,25 мл раствора сульфата меди, после

смешивания общий объем доводят до 100 мл

водой. Реактив годен к употреблению через 4 ч

после приготовления, при хранении в холодиль-

нике стоек. 3. Экстрагирующий реактив: смеши-
вают 85 мл бутилацетата и 15 мл бутилового

спирта. 4. Трихлоруксусная кислота, 50 г/л.
5. Калибровочные растворы. Основной раствор
содержит 0,5 мг кристаллической ацетилней-

раминовой кислоты (мол. масса 309) в 1 мл воды.

Из него готовят калибровочные растворы.

235

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Основной

раствор

ацетил-

нейрами-

К И С Л О Т Ы

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

Во-

МЛ

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

Содержание

мкг

50

100

150

200

250

НМОЛЬ

162

324

485

647

809

Соответствует

концентрации

в плазме

мг/л

200

400

600

800

1 000

ММ ОЛЬ /Л

0,65

1,29

1,94

2,59

3,24

Х о д  о п р е д е л е н и я . К 0,1 мл плазмы или

сыворотки приливают 1,9мл раствора трихлор-

уксусной кислоты, ставят на 7  м и н на кипящую

водяную баню для гидролиза, затем охлаждают

и фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл

прозрачного фильтрата добавляют 0,5 мл воды

и 1 мл резорцинового реактива, закрывают

стеклянными пробками и ставят на водяную

кипящую баню еще на 15 мин. После этого

охлаждают, добавляют 3 мл экстрагирующего

реактива, встряхивают и оставляют на 15 мин

для расслоения фаз. Окраска переходит в верх-

ний слой, который отсасывают и фотометрируют

при длине волны 575—590 нм в кювете с длиной

оптического пути 0,5 см против холостого опыта,

при постановке которого к 1 мл воды добавляют

1 мл резорцинового реактива. Остальные про-

цедуры те же, что и в основном опыте. Для

построения калибровочного графика берут но

1 мл калибровочных растворов, приготовленных

согласно таблице, добавляют по 1 мл резорцино-

вого реактива и обрабатывают так же, как

в основном опыте.

Р а с ч е т проводят по калибровочному гра-

фику.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . В норме

содержание сиаловых кислот составляет

2,0—2,33 ммоль/л независимо от того, выра-

жаются результаты определения в свободной

нейраминовой кислоте или же в ее ацетилиро-

ванной форме — сиаловых кислотах. При выра-

жении результатов в весовых единицах содержа-

ние нейраминовой кислоты составляет 620—

730 мг/л.

Л и т е р а т у р а . Svennerholm L. The  q u a n -

t i t a t i v e  e s t i m a t i n g of cerebrosides in nervous

tissue.— J. of Neurochemistry, 1956,  v o l . 1 ,

№ 1, p. 42—53.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Содержа-

ние сиаловых кислот возрастает при самых

разнообразных воспалительных процессах, а

также при опухолях, инфаркте миокарда. В це-

лом диагностическое значение такое же, как

и остальных гликопротеидных показателей.

5.5.4. Связанные с белком гексозы

Унифицированный орциновый метод.

П р и н ц и п . Гликопротеиды осаждают вместе

с белками сыворотки или плазмы спиртом, оса-

док отмывают, растворяют в щелочи и опреде-

ляют в нем гексозы по реакции с орцином.

Количество гексоз характеризует общее содер-

жание гликопротеидов.

Серомукоиды — это особый вид гликопротеи-

дов, которые растворимы в хлорной кислоте, но

нерастворимы в фосфорновольфрамовой кисло-

те. Для их определения остальные белки

осаждают хлорной кислотой; добавляя к надоса-

дочной жидкости фосфорновольфрамовую кис-

лоту, осаждают серомукоиды, осадок отмывают,

растворяют в щелочи и определяют содержание

гексоз по реакции с орцином. Количество гексоз

характеризует общее содержание серомукоидов.

Р е а к т и в ы . 1. Орциновый реактив. Гото-

вят смешиванием двух реактивов: А — серная

кислота и Б — раствор орцина, 16 г/л. Реактив

А готовят, осторожно добавляя к 40 мл воды

60 мл концентрированной серной кислоты; реак-

тив Б готовят, растворяя 1,6 г орцина в 100мл

воды. Оба реактива стойкие. Непосредственно

перед определением смешивают 7,5 мл реактива

А и 1 мл реактива Б. 2. 96 % этиловый спирт

(этанол). 3. Натр едкий, 0,1 н. раствор. 4. Хлор-

ная кислота, 0,6 моль/л, содержит 6 % HCIO4.

5. Фосфорновольфрамовая кислота, 50 г/л.

Готовят, растворяя 5 г ее в 100 мл 2 н. НС1.

6. Калибровочный раствор, содержащий 45 мг

галактозы и 45 мг маннозы в 100 мл воды.

Сахара высушивают в эксикаторе над фосфор-

ным ангидридом. В связи с тем, что оба вещест-

ва имеют одинаковую молекулярную массу,

получается раствор, содержащий смесь гексоз

в общей концентрации 5 ммоль/л.

О п р е д е л е н и е  о б щ е г о  к о л и ч е с т -

в а  с в я з а н н ы х с  б е л к а м и  г е к с о з .

К 0,1 мл исследуемой сыворотки или плазмы

приливают 5 мл 96 % этилового спирта, переме-

шивают и центрифугируют 5 мин. Осадок тща-

тельно взбалтывают в 5 мл 96 % этанола, снова

центрифугируют и .удаляют надосадочную

жидкость. Осадок растворяют в 1 мл 0,1 н.

NaOH, добавляют 8,5 мл орцинового реактива,

перемешивают и ставят на водяную баню при

80 °С точно на 15 мин; следует избегать попада-

ния прямого дневного света. Охлаждают в тем-

ноте в холодной воде и фотометрируют в кювете

с длиной оптического пути 1 см при длине волны

560 нм против холостого опыта, при постановке

которого берут вместо осадка, растворенного

в щелочи, воду или 0,1 н. NaOH.

П о с т р о е н и е  к а л и б р о в о ч н о й

к р и в о й . 0,05—0,3 мл. основного калибровоч-

ного раствора доводят водой до объема 1 мл,

приливают 8,5 мл орцинового реактива и обра-

батывают дальше так же, как и опыт. Окраска

раствора, в который взято 0,3 мл калибровоч-

ного раствора, соответствует окраске опытной

пробы, в которую взята сыворотка, содержащая

15 ммоль/л гексоз. Окраска раствора, в кото-

рый взято 0,2 мл калибровочного раствора,

соответствует содержанию 10 ммоль/л гексоз

и т. д.

О п р е д е л е н и е  г е к с о з ,  с в я з а н -

н ы х с  с е р о м у к о и д о м .  К 1 м л сыворотки

или плазмы добавляют 1 мл воды и после пере-

м е ш и в а н и я осторожно по стенке приливают 2 мл

236

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

0,6 н. хлорной кислоты, перемешивают и остав-

ляют стоять 10 мин, после чего центрифугируют

10  м и н при 4000 об/мин. Надосадочную жид-

кость сливают в чистую пробирку, добавляют

2 мл 5 % раствора фосфорновольфрамовой

кислоты, перемешивают и центрифугируют.

Надосадочную жидкость удаляют, к осадку

добавляют 2 мл 96 % этилового спирта, снова

перемешивают и центрифугируют 10 мин при

4000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют,

осадок растворяют в 1 мл 0,1 н. NaOH, прили-
вают 8,5 мл орцинового реактива. Дальнейшее

определение проводят так же, как определение

общего количество связанных с белками гексоз.

П о с т р о е н и е  к а л и б р о в о ч н о г о

г р а ф и к а . 0,05—0,5 мл калибровочного

раствора доводят водой до объема 1 мл и прили-

вают 8,5 мл орцинового реактива; дальнейшее

определение проводят так же, как и в опыте.

Окраска раствора, в который взято 0,5 мл калиб-

ровочного раствора, соответствует содержанию

гексоз, связанных с серомукоидом 2,5 ммоль/л.

Окраска раствора, в который взято 0,4 мл

калибровочного раствора, соответствует содер-

жанию в сыворотке 2 ммоль/л связаных с серо-

мукоидом гексоз и т. д.

П р и м е ч а н и е . Препараты орцина обыч-

но нуждаются в дополнительной очистке.

Для этого препарат нагревают на водяной

бане  п р и 60—65 °С, при этом образуются

два слоя — собственно расплавленный орцин

и вода, нагревание продолжают до тех пор,

пока вся вода не испарится. Осадок при

нагревании растворяют в минимальном коли-

честве бензола, добавляют активированный

уголь, перемешивают, в горячем виде

фильтруют и охлаждают. При этом выпадают

кристаллы орцина. Перекристаллизацию

повторяют дважды.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . Общее ко-

личество гексоз, связанных с белками сыворотки

или плазмы, составляет в норме 5,8—6,6 ммоль/л,

из них с серомукоидом связано 1,2—1,6 ммоль/л.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Самые раз-

нообразные воспалительные процессы приводят

к увеличению содержания связанных с белками

или серомукоидом сыворотки гексоз. Наиболь-

шее диагностическое значение имеет их опреде-

ление для выявления вяло текущих воспали-

тельных процессов, повышение этих показате-

лей свидетельствует об активации процесса,
даже если клинические симптомы еще не про-

явились. Чаще всего связанные с белками гексо-

зы исследуют ревматологи.

5.5.5. Гексуроновые кислоты

Содержание гексуроновых кислот, входящих

в состав гликозаминогликанов мочи, опреде-

ляется карбазоловым и орциновым методами.

П р и н ц и п . Гликозаминогликаны мочи

осаждаются в виде комплексов с цетилтриметил-

аммонийбромидом, осадки отмывают и раство-

ряют в слабой щелочи. Входящие в состав ГАГ

гексуроновые кислоты определяют по цветным

реакциям с орцином и карбазолом в присутствии

крепкой серной кислоты. Глюкуроновая кислота

дает такое же окрашивание, как и галактуроно-

вая (идуроновая) кислота при обработке орци-

новым реактивом, но с карбазоловым реактивом

идуроновая кислота дает окрашивание на 21 %

менее интенсивное, чем глюкуроновая кислота.

Р е а к т и в ы . I. Раствор цетавлона. Водный

раствор цетилтриметиламмонийбромида, 25 г/л.

2. 95 % этиловый спирт, насыщенный хлоридом

натрия при комнатной температуре. 3. Карбазо-

ловый реактив. Раствор карбазола 1 г/л в этило-

вом спирте. 4. Орциновый реактив: 0,2 г орци-

на растворяют в 100 мл концентрированной

серной кислоты х. ч., отн. плотности 1,84. Реак-

тив может храниться до 2 нед в посуде из тем-

ного стекла в холодильнике. 5. Серная кислота

х. ч. 6. 1 н. NaOH. 7. 2 н. HCI. 8. Универсальная

индикаторная бумага. 9. Калибровочные раство-

ры глюкуроновой кислоты в воде, содержащие

5—100мг/л.

Х о д  о п р е д е л е н и я .  В ы д е л е н и е

ц е т а в л о н о в ы х  о с а д к о в . Собирают су-

точную мочу, отдельные порции до объединения

хранят в холодильнике. Если плотность мочи

ниже 1,020, для исследования берут 30мл,

в противном случае берут 15 мл и добавляют

15 мл воды. Перед отбором пробы суточное

количество мочи тщательно перемешивают и не

фильтруют. Добавлением 2 н. НС1 под контро-

лем рН метра или индикаторной бумаги кислот-

ность исследуемой пробы доводится до рН 5,0.

Затем добавляют 1 мл раствора цетавлона и

оставляют на ночь в холодильнике. На следую-

щий день центрифугируют при комнатной тем-

пературе 15 мин при 2000 об/мин. Надосадочную

жидкость осторожно удаляют, а пробирки остав-

ляют в перевернутом положении на 1 мин, чтобы

с осадка успела стечь жидкость. Осадок дважды

промывают порциями по 5—10 мл 95 % этило-

вого спирта, насыщенного хлоридом натрия,

каждый раз тщательно измельчая осадок палоч-

кой и центрифугируя его. Отмытый осадок раст-

воряют в 1,5 мл воды, подщелоченной 2 каплями

1 н. NaOH, затем объем доводят до 5 мл. Если

раствор окажется мутным и его оптическая

плотность будет выше 0,7, то добавляют еще

5 мл воды, доводя  с у м м а р н ы й объем до 10 мл.

Осадок, не растворившийся в щелочи, удаляют.

Ц в е т н а я  р е а к ц и я с  к а р б а з о л о м

(п о Д и ш е). К 1 мл растворенного цетавлоно-

вого осадка приливают при охлаждении 6 мл

концентрированной серной кислоты, нагревают

на кипящей водяной бане 20  м и н , охлаждают

до комнатной температуры и добавляют 0,2 мл

карбазолового реактива. Появляется розовое

окрашивание, которое усиливается на протяже-

нии 2 ч, а потом в течение 1 ч остается стабиль-

ным. Фотометрируют через 2 ч в кювете с длиной

оптического пути 1 см при длине волны 540 нм

против холостого опыта, при постановке кото-

рого вместо цетавлонового осадка берут воду.

Ц в е т н а я  р е а к ц и я с  о р ц и н о м  ( п о

С в е н н е р х о л ь м у ) . К 2 мл растворенного

цетавлонового осадка добавляют 4 мл орцино-

вого реактива и оставляют на 15 мин, затем тща-

Очистку орцина см. с. 237, левая колонка.

237

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

тельно перемешивают и ставят еще на 20 мин

в водяную баню при 80 °С; охлаждают на льду

и фотометрируют при длине волны 505 нм

в кювете с длиной оптического пути 1 см против

холостого опыта, при проведении которого к 2 мл

растворенного цетавлонового осадка добавляют

вместо орцинового реактива 4 мл серной кисло-

ты из той же самой партии, которая была

использована для приготовления реактива 4;

холостую пробу обрабатывают так же, как

опытную.

П о с т р о е н и е  к а л и б р о в о ч н о г о

г р а ф и к а . При построении калибровочных

графиков для карбазоловой и орциновой реак-

ций используют одну и ту же серию калибровоч-

ных растворов, содержащих 5—100мкг глкжу-

роновой кислоты в 1 мл воды. Калибровочные

пробы обрабатывают так же, как и опытные.

По калибровочному графику вычисляют содер-

жание глюкуроновой кислоты в микрограммах

в 1 мл растворенного цетавлонового осадка.

Эту величину делят на 1,5; 3 или 6 в зависи-

мости от того, какому количеству мочи соответ-

ствует 1 мл растворенного осадка.

Окончательный результат выражают в мил-

л и г р а м м а х за сутки. Можно выражать его и в

м и л л и г р а м м а х на 1 г креатинина, для этого

концентрацию гексуроновых кислот (мг/л)

делят на концентрацию креатинина (г/л). Для

пересчета результатов в молекулярные вели-

чины найденное количество делят на молекуляр-

ную массу глюкуроновой кислоты, т. е. на 196;

в связи с тем что молекулярные массы глюкуро-

новой и идуроновой кислот одинаковы, расчеты

совпадают. Для вычисления коэффициента

К/О количество гексуроновых кислот, опреде-

ленное карбазоловым методом, делят на

их количество, определенное орциновым ме-

тодом.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . Выведение

гексуроновых кислот у детей 10—15 лет состав-

ляет 5—10 мг/л, у взрослых 2,4—3,9 мг/л, или

около 2 мг на 1 г креатинина. Коэффициент

К/О в норме близок к единице.

Л и т е р а т у р а . Меркурьева Р. В., Гу-

сев М. Р. Сравнительная оценка методов опре-

деления гликозаминогликанов мочи.— Лаб. де-

ло, 1974, № 3, с. 162— 166; DiFerrante N., Rich С.

The determination of acid aminopolysaccharide in

urine.— J. Lab. and Clin. Med., 1956, vol. 48, № 3,

p. 491—499; Dische Z. A specific color reaction

for glucuronic acid.— J. Biol. Chem., 1947,

vol. 71, p. 725—730.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Увеличение

содержания в моче гексуроновых кислот бывает

при приобретенных заболеваниях, поражающих

соединительную ткань,— ревматизме, склеро-

дермии. Уменьшение коэффициента К/О в этом

случае характерно для более тяжелых, деструк-

тивных процессов. Значительное увеличение

имеет место также при врожденной патологии —

мукополисахаридозах; в этом случае увеличение

коэффициента К/О характерно для болезни

Гурлера, а уменьшение этого коэффициента —

для болезни Хантера.

5.5.6. Гликозилированный гемоглобин

Белки, в том числе гемоглобин, если их дли-

тельное время выдерживать в растворе, содер-

жащем глюкозу или другой редуцирующий

моносахарид, присоединяют ее остатки за счет

химических, неэнзиматических процессов. Чем

выше концентрация глюкозы в растворе и чем

длительнее инкубация, тем больший процент

молекул гемоглобина гликозилируется, поэтому

содержание гликозилированного гемоглобина

(Gly-Hb) характеризует средний уровень кон-

центрации глюкозы в крови за время жизни

молекулы гемоглобина. Лечение диабета прово-

дят с помощью лекарств, понижающих содержа-

ние глюкозы в крови лишь на ограниченный

промежуток времени, очень важно подобрать

такие схемы терапии, которые позволили бы

добиться стойкой нормализации гликемии. Ис-

следование гликозилированного гемоглобина

оказывается ценным лабораторным показате-

лем, характеризующим некоторый средний уро-

вень глюкозы в крови на протяжении длитель-

ного промежутка времени, который соизмерим

с длительностью полужизни молекулы гемогло-

бина (3—4мес). Количество гликозилирован-

ного гемоглобина выражают в молярных про-

центах, т. е. в количестве остатков моносахарида,

которые приходятся на 100 молекул гемоглоби-

на. Его уровень повышается при сахарном

диабете и характеризует степень его компенса-

ции, уменьшается он при омоложении популя-

ции молекул гемоглобина, что бывает при актив-

ном синтезе гемоглобина, например при регене-

рации после кровопотерь.

Методы определения. Для определения

гликозилированного гемоглобина предложено

много способов, включающих хроматографию

или электрофорез на различных фазах. Хими-

ческие методы заключаются в том, что связь

между молекулой белка и моносахаридным

остатком разрушается гидролизом и освободив-

шиеся молекулы моносахарида определяются по

цветной реакции. Результаты определения во

многом зависят от выбранного метода. Наиболее

точными в настоящее время считаются хромато-

графические методы, но они трудоемки и тре-

буют специальной аппаратуры и реактивов.

Поэтому в настоящем справочнике приводится

относительно менее точный химический метод,

который, однако, проще и может быть выполнен

в КДЛ.

Метод по реакции с тиобарбитуровой кисло-

той.  П р и н ц и п . Эритроциты отмываются от

белков плазмы и глюкозы; содержащийся в них

Гликозилированный гемоглобин гидролизуется

нагреванием со щавелевой кислотой, при этом из

остатков моносахарида образуется 5-оксиметил-

фурфурол, количество которого определяется по

цветной реакции с тиобарбитуровой кислотой.

Одновременно определяют концентрацию гемо-

глобина в гемолизате, результаты выражают

процентами молекул гемоглобина, которые

гликозилированы.

Р е а к т и в ы .  1 . Кислота щавелевая,

0,5 моль/л: растворяют 22,5 г Н

2

СгО

4

 в 0,5 л

воды. Реактив стоек. 2. Кислота щавелевая,

238

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  57  58  59  60   ..