Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 58

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  56  57  58  59   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 58

 

 

плазмой и эритроцитами, поэтому с равным

успехом может определяться в цельной крови,

плазме или сыворотке, но надо иметь в виду, что

в уже взятой пробе крови, особенно если сгусток

для получения сыворотки формируется в термо-

стате или если материал взят нестерильно, идет

интенсивный гликолиз и содержание глюкозы

быстро падает. Часто принимают, что в венозной

крови содержится на 0,5 ммоль/л (10 мг в

100 мл) меньше глюкозы, чем в капиллярной,

но эта величина, разумеется, условная.

Широко распространенный термин «сахар

крови» надо считать неудачным, так же как и

термин «сахарная кривая», и использовать более

точные выражения: глюкоза крови и глюкозо-то

лерантный тест (ГТТ).

Методы определения глюкозы разделяют на

три группы: ферментативные, редуктометриче-

ские и методы с использованием цветных реак-

ций, в которых участвуют продукты, образую-

щиеся при нагревании углеводов с концентри-

рованными кислотами.

Ф е р м е н т а т и в н ы е  м е т о д ы иссле-

дования сочетают в себе высокую точность и

техническую простоту анализа, они основыва-

ются на одной из двух реакций — гексокиназ-

ной либо глюкозооксидазной. В первом случае

глюкоза сначала фосфорилируется за счет АТФ

благодаря действию гексокиназы; образовав-

шийся глюкозо-6-фосфорный эфир в присутст-
вии глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы восста-

навливает NADP, количество которого опреде-

ляется по увеличению светопоглощения в ульт-

рафиолетовой области. Эти методы считаются

наиболее точными, но для выполнения нужда-

ются в нескольких ферментах и кофакторах,

поэтому определение оказывается дорогостоя-
щим для клинико-диагностических лабораторий.

Легче выполнимы глюкозооксидазные методы,

в которых глюкозооксидаза окисляет глюкозу

кислородом воздуха с образованием перекиси

водорода, количество которой определяется либо

химическим путем, либо по ее способности в при-

сутствии пероксидазы окислять диамины с обра-

зованием окрашенных продуктов. Практически

очень удобен унифицированный в 1974 г. глюко-

зооксидазный метод определения глюкозы по

окислению ортотолидина. Он не требует ни на-

гревания до высоких температур, ни работы с

концентрированными кислотами, но имеет тот

недостаток, что орто-толидин токсичен (канце-

роген), кроме того, трудно получить препарат

глюкозооксидазы, полностью свободной от ка-

талазы, которая, хотя бы в небольшой степени,

разрушает образующуюся перекись водорода,

поэтому всегда существует угроза получения

заниженных результатов. Входящий в эту же

группу глюкозооксидазный метод, основанный

на окислении перекисью водорода фенолфта-

лина, имеет то преимущество, что нуждается

только в одном реактиве — глюкозооксидазе,

зато метод более трудоемок.

Особый вариант ферментативных методов —

ферментные электроды, которые представляют

собой чувствительные электрохимические дат-

чики, содержащие иммобилизованные ферменты.

Существует два варианта электродов для опре-

деления глюкозы, и в обоих идет глюкозоокси-

дазная реакция, но в первом варианте датчик

улавливает перекись водорода, а во втором

уменьшение содержания кислорода, израсходо-

ванного на окисление глюкозы.

Редуктометрический феррицианидный метод,

предложенный в 1926 г. Н. С. Hagedorn,

В. N. Jensen, малоспецифичен, но не нуждается

ни в дефицитных реактивах, ни в дорогой аппа-

ратуре, поэтому принят в качестве унифициро-

ванного и используется и в настоящее время,

особенно в небольших лабораториях. Значи-

тельно точнее методы, основанные на способ-

ности глюкозы восстанавливать соли меди; так

как образующаяся одновалентная медь легко

окисляется кислородом воздуха, она обычно вы-

ступает в качестве промежуточного вещества,

окончательным хромогеном служит мышьяково-

молибденовая или фосфорно-вольфрамовая кис-

лота. Однако, если в растворе присутствуют

комплексообразователи, например неокупреин,

восстановленная (одновалентная) медь не окис-

ляется кислородом воздуха, поэтому может быть

непосредственно измерена. Методы, основанные

на восстановлении глюкозой нитробензолов, в

частности пикриновой кислоты, в некоторых

странах широко распространены, эффективность

их, видимо, во многом зависит от степени

чистоты реактивов. Ошибки редуктометрических

методов в значительной степени вызваны при-

сутствием восстанавливающих веществ неугле-

водной природы — глютатиона и аскорбиновой

кислоты. В связи с тем что глютатион находится

в эритроцитах, при анализе плазмы или исполь-

зовании такого метода исследования цельной

крови, при котором эритроциты удаляются не-

разрушенными, погрешности значительно сокра-

щаются.

Из многочисленных методов, которые осно-

ваны  н а  ц в е т н ы х  р е а к ц и я х с продук-

тами, образующимися при нагревании углеводов
с кислотами, наибольшее значение имеет орто-

толуидиновый метод. Он специфичен, прост в

выполнении, но по ходу реакции надо кипятить

пробу на водяной бане с концентрированной

уксусной кислотой, поэтому работать надо под

тягой или в специальном помещении. Антроно-

вый метод значительно менее специфичен, но

примерно в 5 раз чувствительнее; благодаря

малой специфичности он годится для определе-

ния любых углеводов в крови, в частности поли-

глюкина. Другие методы этой группы, основан-

ные на цветных реакциях с карбазолом, орци-

ном или резорцином, применяются лишь для оп-

ределения углеводов, входящих в состав глико-

протеидов и протеогликанов.

В клинической лабораторной диагностике

чаще всего глюкозу определяют в крови, взятой

из пальца, в этом случае предварительное уда-

ление белка абсолютно необходимо. Но если

анализировать сыворотку без гемолиза и жел-

тухи, то многие методы позволяют обходиться

без депротеинизации.

Определение глюкозы в моче имеет лишь

вспомогательное значение, поэтому обычно ог-

раничиваются лишь ее качественным исследо-

ванием. При количественном определении обыч-

231

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

но используют ортотолуидиновыи метод или

поляриметрический, основанный на измерении

вращения плоскости поляризации.

Как видно из краткого обзора методов, нет

однозначности в том, какой метод или даже

какая группа методов должна быть принята

в качестве унифицированной. Наибольшее прак-'

тическое значение имеет определение глюкозы

для выявления и контроля за лечением сахар-

ного диабета, однако даже наименее точный с

аналитической точки зрения феррицианидный

редуктометрическии методе успехом применялся

на протяжении многих лет; при правильном его

использовании и интерпретации результатов он

может применяться в КДЛ.

Унификация методов. В качестве унифици-

рованных сейчас приняты три метода. Наиболее

точный глюкозооксидазный унифицирован в

1974 г.; менее удобный в работе ортотолуидино-

выи метод унифицирован в 1972 г., тогда же

унифицирован феррицианидный метод (Хаге-

дорна—Иенсена), который хотя и дает несколь-

ко завышенные результаты, но везде может быть
налажен.

Унифицированный глюкозооксидазный ме-

тод по окислению о-толидина.  П р и н ц и п .

Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образова-

нием перекиси водорода, которая под действием

пероксидазы окисляет ортотолидин  ( Н

2

N - С Н з -

• С

6

Н

3

- С

6

Н

3

- С Н

3

- N H

2

) с образованием синего

хромогена. Обе реакции протекают одновре-

менно при рН 4,8.

Р е а к т и в ы . 1. Натрия хлорид 9 г/л (изо-

тонический раствор): готовят, растворяя 0,9 г

NaCl в 100 мл воды. 2. Цинка сульфат, 50 г/л:

5 г сульфата цинка (ZnSO

4

) растворяют в воде,

объем доводят до 100 мл. 3. Натр едкий,

0,3 моль/л: готовят, растворяя 1,2 г NaOH в

100 мл воды, концентрацию проверяют титро-

ванием (она должна быть 0,3 н.). 4. Ортотоли-

дин, 1 % раствор: 1 г препарата растворяют

в 100 мл абсолютного спирта. Раствор можно

хранить в холодильнике в склянке с притертой

пробкой несколько месяцев. Имеющийся в про-

даже препарат можно очистить перекристалли-

зацией, для чего его растворяют в абсолютном

спирте, добавляют воду и выпавшие кристаллы

отсасывают на фильтре, затем сушат над хлори-

дом кальция. 5. Ацетатный буферный раствор
рН 4,8: смешивают 4 части 0,25 н. уксусной кис-

лоты (проверить титрованием!) и 6 частей 0,25 н.

ацетата натрия (содержит 34 г CH

3

COONa-

•ЗН

2

О в 1  л ) . 6. Глюкозооксидаза — сухой пре-

парат активностью 3000 ед/мг или больше.

7. Пероксидаза из хрена. Желательно исполь-

зовать кристаллический препарат фирмы «Реа-

нал»  ( В е н г р и я ) : 1 мг растворяют в 5 мл ацетат-

ного буфера (реактив 5), в холодильнике можно

хранить несколько дней. 8. Рабочий реактив:
в 80 мл ацетатного буфера растворяют 2 мг глю-

козооксидазы и 1 мг пероксидазы, прибавляют

1 мл 1 % раствора ортотолидина, перемешивают

и доводят объем буферным раствором до 100 мл.

Рабочий реактив должен быть прозрачным, бес-

цветным или иметь слабо-зеленый оттенок, в

этом случае он устойчив при хранении на холоду.

Если же окраска интенсивна или через несколь-

ко часов после приготовления начинает выпа-

дать осадок, это значит, что ортотолидин недо-

статочно чистый и его надо перекристаллизо-

вать. 9. Калибровочные растворы глюкозы. Глю-

козу предварительно высушивают при 37°С и

хранят в эксикаторе. Сначала готовят основной

раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего

180 мг вещества растворяют в 20 мл насыщен-

ного раствора (примерно 0,3 %) бензойной кис-

лоты. Из этого раствора готовят рабочие калиб-

ровочные растворы, содержащие 3; 6; 9; 12; 15;

18 и 21 ммоль/л, для чего берут 0,6; 1,2; 1,8;

2,4; 3; 3,6 и 4,2 мл основного раствора и доводят

насыщенным раствором бензойной кислоты до

объема 10 мл. Эти растворы содержат глюкозу

в тех же концентрациях, в которых она бывает

в крови, что облегчает расчеты при калибровке.

Х о д  о п р е д е л е н и я . В центрифужные

пробирки вносят 1,1 мл раствора хлорида нат-

рия, 0,4 мл раствора сульфата цинка и 0,4 мл

0,3 н. раствора NaOH, перемешивают; при этом

образуется очень тонкий гель гидрата окиси

цинка, в него выпускают 0,1 мл крови или калиб-

ровочного раствора, снова перемешивают и че-

рез 10 мин центрифугируют при 3000 об/мин в

течение 10  м и н .

К 1 мл надосадочной жидкости добавляют

3 мл рабочего реактива и осторожно перемеши-

вают. Постепенно начинает развиваться окрас-

ка, которая при обычной комнатной температуре

достигает максимума через 13—15 мин, а затем

постепенно уменьшается. Фотометрируют всегда

через один и тот же промежуток времени после

добавления рабочего реактива в кюветах с дли-

ной оптического пути 1 см с красным светофильт-

ром (длина волны 625 нм) против холостого

опыта, который ставят одновременно с рабочими

пробами, но вместо крови берут физиологиче-

ский раствор хлорида натрия. При приготовле-

н и и калибровочного графика вместо проб крови

берут 0,1 мл соответствующего калибровочного

раствора.

Р а с ч е т можно проводить по правилу про-

порций или по калибровочному графику, для по-

строения которого на одной оси откладывают

концентрацию глюкозы (ммоль/л), а на другой

величину экстинкции.

П р и м е ч а н и я .  1 . Можно сначала вы-

пустить кровь из пипетки в изотонический

раствор хлорида натрия, а затем добавить

растворы сульфата цинка и NaOH. 2. При

систематической работе нет необходимости

постоянно строить калибровочный график по

всем точкам, достаточно ежедневно обраба-

тывать холостую пробу и 2—3 точки в диапа-

зоне 3—9 ммоль/л, а полный калибровочный

график строить лишь при смене реактивов

или  н а л а ж и в а н и и методики.
Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы натощак:

3,5—5,7 ммоль/л (60—100 мг в 100 мл).

Л и т е р а т у р а . Лаб. дело, 1976, № 6,

373—374.

Глюкозооксидазный метод по окислению фе-

нолфталина.  П р и н ц и п . Белки осаждают

трихлоруксусной кислотой, рН безбелкового

232

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

раствора с помощью фосфата  н а т р и я доводят

до точки, близкой к оптимому действия глюкозо-

оксидазы, и проводят ферментативную реакцию.

Образующаяся перекись водорода в присутст-

вии ионов меди окисляет фенолфталин до фенол-

фталеина, который в нейтральной области бес-

цветен, а в щелочной области окрашен в крас-

ный цвет. Поэтому перед фотометрированием

добавляют щелочь.

Р е а к т и в ы .  1 . Трихлоруксусная кислота,

раствор 50 г/л. При титровании щелочью кон-

центрация кислоты должна быть 0,3 н. 2. Натрия

фосфат двузамещенный, 0,25 моль/л. Готовят,

растворяя 9,7 г Na

2

HPO

4

-2H

2

O или 18 г

2

HPO

4

-12Н

2

О в воде, объем доводят до

200 мл. При добавлении 2 мл этого раствора

к 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты рН

должен быть в пределах 5,0—6,0. 3. Раствор

глюкозооксидазы. Содержит около 3000 ед. в

1 мг. Готовят, растворяя соответствующее коли-

чество сухого препарата в 10 мл воды. Допуска-

ются значительные колебания активности фер-

мента, поэтому обычно нет необходимости прове-

рять качество препарата. 4. Фенолфталин, 0,5 %

раствор. Готовят, растворяя 75 мг вещества

в 15 мл 0,1 н. NaOH, раствор должен быть бес-

цветным или слегка розоватым, окрашенные

растворы для работы непригодны. Для увеличе-

ния стойкости реактива к нему добавляют 3 мг

трилона (натриевой соли этилендиаминтетраук-

сусной кислоты), который, связывая соли тяже-

лых металлов, препятствует самоокислению фе-

нолфталина кислородом воздуха. 5. Рабочий

реактив. Готовят в день определения, смешивая

30 частей 0,3 н. NaOH, 2 части 0,5 % раствора

фенолфталина (реактив 4) и 1 часть 0,12 %

раствора сульфата меди (120 мг CuSO

4

-

•5Н

2

О растворяют в 100 мл воды). 6. Калибро-

вочные растворы. Глюкозу высушивают при

37 °С и хранят в эксикаторе. Сначала готовят

раствор с концентрацией 50 ммоль/л, для чего

180 мг препарата растворяют в 20 мл 5 % три-

хлоруксусной кислоты. Разведением этого рас-

твора в 50 раз той же 5 % трихлоруксусной кис-

лотой получают раствор, содержащий 1 ммоль/л.

Берут 0,6; 1,2; 1,8 и 2,4 мл раствора 1 ммоль/л

и объем каждой порции доводят до 10 мл, добав-

ляя нужное количество 5 % трихлоруксусной

кислоты. Получаются растворы, содержащие 60;

120; 180 и 240 мкмоль/л. При построении калиб-

ровочного графика окраска проб, в которых

обрабатывались эти растворы, будет соответст-

вовать концентрации 3; 6; 9 и 12 ммоль глюкозы

в I л крови.

Х о д  о п р е д е л е н и я . 0,03 мл крови вы-

ливают в 1,5 мл 5 % трихлоруксусной кислоты,

перемешивают и центрифугируют. К 1 мл про-

зрачной надосадочной жидкости добавляют 2 мл

0,25 моль/л фосфата натрия и 2 капли (при-

мерно 0,1 мл) раствора глюкозооксидазы. Пере-

мешивают и оставляют при комнатной темпера-

туре на 1 ч, затем добавляют 2 мл рабочего реак-

тива и еще через 30 мин фотометрируют в кю-

вете с длиной оптического пути 1 см при длине

волны 520 нм (зеленый светофильтр).

Одновременно ставят холостой опыт, в кото-

рый берут 1 мл 5 % трихлоруксусной кислоты

и обрабатывают ее так же, как и надосадочную

жидкость. В калибровочный опыт вместо над-

осадочной жидкости берут по 1 мл  р а з л и ч н ы х

калибровочных растворов (реактив 6). Расчет

проводят по калибровочному графику или по

п р а в и л у пропорций.

П р и м е ч а н и я .  1 . Фенолфталин можно

синтезировать из недефицитного фенолфта-

леина, который широко используется в ла-

бораториях в качестве кислотно-основного

индикатора. Для этого в колбу вместимостью

1 л с обратным холодильником помещают

5 г фенолфталеина, 250 мл 20 % раствора

КОН и 2,5 г цинковой пыли, а также несколь-

ко стеклянных бусинок для равномерного

кипения. Раствор становится темно-красного

цвета, его кипятят до тех пор, пока он не

станет слабо-розовым или совсем не обесцве-

тится, обычно на это уходит 1 рабочий день.

Еще горячий раствор фильтруют через стек-

лянный фильтр и добавляют 100 мг трилона.

К охлажденному прозрачному раствору в

большом химическом стакане добавляют не-

большими порциями при постоянном переме-

шивании 5 н. НС1 до тех пор, пока реакция

не станет сильнокислой (по конго красному

или универсальной индикаторной бумажке),

на это идет около 200 мл кислоты. Выпавший

осадок отфильтровывают на бюхнеровской

воронке и высушивают, желательно в ваку-

уме.

2. Можно избежать удаления белков

осаждением, если анализировать кровь, вы-

сушенную на фильтровальной бумаге. Для

этого 0,02 мл исследуемой крови в виде плот-

ного узора выпускают на фильтровальную

бумагу, высушивают на воздухе, вырезают

и замачивают на 10—15 мин в 1 мл 5 %

трихлоруксусной кислоты. Фильтр с пятном

крови удаляют, а экстракт обрабатывают

так же, как и безбелковый фильтрат. В ка-

честве холостого опыта используют 1 мл 5 %

трихлоруксусной кислоты, в которой был за-

мочен такой же по размеру кусочек фильтро-

вальной бумаги. Если окраска в холостом

опыте оказывается значительной, фильтро-

вальную бумагу предварительно вымачивают

в горячей 5 % уксусной кислоте, а затем

высушивают.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы  т е же, что и

в предыдущем методе.

Л и т е р а т у р а . Балаховский И. С., На-

точин Ю. В. Пробл. космич. биол., 1973, т.  X X I I ,

с. 43; Городецкий В. К-, Селиванов И. А. При-

кладная биохимия и микробиология, 1969, т. 5,

№ 3, 353.

Купрометрический метод с использованием

мышьяково-медного реактива (метод Сомоги —

Нельсона).  П р и н ц и п . Глюкоза восстанавли-

вает ионы двухвалентной меди, которые в свою

очередь восстанавливают мышьяково-молибде-

новую кислоту с образованием молибденовой
сини, которая придает раствору устойчивое ок-

рашивание.

233

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Р е а к т и в ы . 1. Натрия фосфат двузаме-

щенный. Вместо 28 г безводной соли (Nа

2

НРО

4

>

можно взять 70,5 г ее гидрата (Na

2

HPO

4

-

• 12Н

2

О). 2. Калий, натрий виннокислый (сегне-

това соль). 3. Безводный сульфат натрия.

Вместо 80 г безводной соли (Na2SO

4

) можно

взять 180 г ее кристаллического гидрата

( N a

2

S O

4

- 1 0 Н

2

О ) . 4. Меди сульфат CuSO

4

-

2

О. 5. Щелочной медный реактив: ра-

створяют 28 г двузамещенного фосфата нат-

рия и 40 г сегнетовой соли в 600—700 мл воды

и добавляют туда 100 мл 1 н. NaOH. Отдельно

растворяют 8 г сульфата меди в 80 мл воды и

приливают, перемешивая, к предыдущему рас-

твору. Затем к смеси добавляют 80 г безводного

сульфата натрия, доводят объем до 1 л водой и

оставляют на 2—3 дня при 37 °С, после чего

фильтруют.  Х р а н я т в темноте, желательно в по-

лиэтиленовом флаконе, так как стекло может

выщелачиваться, нарушая кислотность среды.
6. Аммоний молибденовокислый ((NH

4

)5Mo

7

O

24

-

•H

2

O). 7. Натрий мышьяковокислый двуза-

мещенный (Na

2

HAs

5

O

4

-7H

2

O). 8. Мышьяково-

молибденовый реактив: при легком подогрева-

нии растворяют 25 г молибденовокислого аммо-

ния в 450 мл воды, затем добавляют 21 мл кон-

центрированной серной кислоты и перемеши-

вают. К этому раствору добавляют 3 г двузаме-

щенного мышьяковокислого натрия, растворен-

ного в 25 мл воды. Хорошо перемешивают и

оставляют стоять на 1—2 сут в темном месте

при 37 "С. Реактив должен быть зеленоватого

цвета. К нему добавляют несколько капель

0,05 н. перманганата калия (0,79 % раствор
КМпО

4

), так, чтобы раствор стал золотисто-

желтым. Хранить в посуде из темного стекла.

9. Вольфрамовокислый натрий, 10 %. 10. Серная

кислота, 0,66 н. 11. Калибровочные растворы

глюкозы те же, что и в глюкозооксидазном ме-

тоде определения глюкозы по окислению орто-

толидина.

Х о д  о п р е д е л е н и я . К 1,5 мл воды до-

бавляют 0,1 мл крови, перемешивают и прили-

вают сначала 0,2 мл 10 % раствора вольфрамо-

вокислого натрия, а затем 0,2 мл 0,66 н. серной

кислоты. Перемешивают и через несколько ми-

нут центрифугируют. К 0,5 мл прозрачной над-

осадочной жидкости добавляют 0,5 мл щелоч-

ного медного реактива и ставят на кипящую во-

дяную баню на 20 с. Затем охлаждают 1 мин в

воде комнатной температуры и добавляют 0,5 мл

мышьяково-молибденового реактива и 7,5 мл,
воды.

Перемешивают и фотометрируют в кювете

с длиной оптического пути 1 см при длине волны

700 нм против холостого опыта, при постановке

которого вместо крови берут 0,1 мл воды. Одно-

временно обрабатывают калибровочные пробы,

в которые вместо крови берут калибровочные

растворы. Расчет можно: проводить по кали-

бровочному графику или по правилу про-

порций.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы и  к л и н и -

ч е с к о е  з н а ч е н и е те же, что и в глюко-

зооксидазном методе, т. е. 3,5—5,7 ммоль/л

(60—100 мг в 100  м л ) .

5.5.2. Углеводные компоненты

гликопротеидов

Вещества, содержащие белковый и углевод-

ный компоненты, называются гликопротеидами.

Различают собственно гликопротеиды и протео-

гликаны. В первую группу входят белки, содер-

жащие относительно короткие (не больше'15—

20 моносахаридов) углеводные цепи, в которых

нет периодически повторяющихся олигосаха-

ридных последовательностей. Вторую подгруппу

составляют протеогликаны или гликозаминпро-

теогликаны, которые иногда называют амино-

полисахаридами, или мукополисахаридами. Они

значительно богаче углеводами,, каждая угле-

водная цепь состоит из повторяющихся дисаха-

ридных фрагментов, содержащих аминосахар и

уроновую кислоту или галактозу. Углеводные

компоненты протеогликанов называют гликоза-

миногликанами (ГАГ).

Гликопротеиды. Большинство белков плазмы

крови содержит хотя бы некоторое количество

углеводов, поэтому формально относятся к гли-

копротеидам. Однако практически сывороточ-

ными гликопротеидами обычно называют лишь

небольшую группу белков, особенно богатых

углеводами, куда входят трансферрин, гаптогло-

булин, макроглобулин и т. д. Содержание их

увеличивается при воспалительных процессах,

в связи с чем их называют белками острой фазы

и определяют в тех случаях, когда надо выявить

воспалительный процесс или оценить его актив-

ность. При этом возможно несколько подходов:

1) определение индивидуальных гликопротеидов

острой фазы посредством специфических энзи-

матических или иммунологических методов;

2) выявление электрофоретических фракций,

особенно богатых гликопротеидами; 3) опреде-

ление суммы углеводов, связанных с сывороточ-

ными белками. Последний подход и рассматри-

вается в настоящем разделе.

Из более чем 100 известных природных са-

харов и их производных с белками бывает свя-

зано лишь около 10. В состав гликопротеидов

входят следующие углеводы: I) гексозы — глав-

ным образом галактоза и манноза, в очень не-

значительных количествах и глюкоза; 2) пен-

тозы — ксилоза и арабиноза; 3) дезоксисахара-

фукоза и рамноза; 4) аминосахара — ацетил-

глюкозамин и ацетилгалактозамин; 5) нейрами-

новая кислота и ее уксуснокислые эфиры, кото-

рые называются сиаловыми кислотами.

О количестве сывороточных гликопротеидов

можно судить, определяя любой из этих компо-

нентов, но по практическим соображениям в кли-

нической практике находит широкое применение

лишь определение связанных с белком гексоз и

сиаловых кислот; методы определения фукозы,

аминосахаров и нейраминовой кислоты извест-

ны, но не получили такого широкого распростра-

нения из-за сложности и трудоемкости.

Многие богатые углеводами белки обладают

в ы р а ж е н н ы м и кислотными свойствами, раство-

римы в хлорной и трихлоруксусной кислотах

и составляют группу серомукоидов, диагности-

ческое значение которых примерно такое же,

как гликопротеидов. О количестве серомукоидов

234

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  56  57  58  59   ..