Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 44

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  42  43  44  45   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 44

 

 

рованный раствор плацентарного альбумина
с концентрацией 100 г/л.

Унифицированный метод по биуретовой ре-

акции.  П р и н ц и п . Белки реагируют в щелоч-

ной среде с сульфатом меди, при этом образу-

ются соединения, окрашенные в фиолетовый
цвет (биуретовая реакция).

Р е а к т и в ы. 1. Натрия хлорид, ч. д. а. или

х. ч., 154 ммоль/л (изотонический раствор):
9 г хлорида  н а т р и я помещают в мерную колбу
вместимостью 1 л, растворяют в воде и доводят

до метки водой. 2. Натр едкий, ч. д. а. или х. ч.,

0,2 моль/л: 8 г едкого натра помещают в мерную

колбу вместимостью 1 л, осторожно растворяют

в воде и доводят до метки водой. 3. Калия йодид
ч. д. а. или х. ч., 30 ммоль/л раствор йодида

калия в 0,2 моль/л растворе едкого натра; 0,5 г

йодида калия помещают в мерную колбу вмести-

мостью 100 мл, доводят 0,2 моль/л раствором

едкого натра до метки и растворяют. Реактив

стабилен в течение 2 нед при хранении в посуде

из темного стекла. 4. Калий-натрий виннокислый
4-водный (сегнетова соль) ч. д. а. 5. Меди

сульфат 5-водный ч. д. а. или х. ч. 6. Биуретовый
реактив: 4,5 г сегнетовой соли растворяют в
40 мл 0,2 моль/л растворе едкого натра, прибав-

ляют 1,5 г сульфата меди и 0,5 г йодида калия

и растворяют. Доливают до 100 мл 0,2 моль/л
раствором едкого натра. Реактив стабилен при

х р а н е н и и в посуде из темного стекла. 7. Рабочий

раствор биуретового реактива: 20 мл биурето-

вого реактива смешивают с 80 мл 0,5 % раствора
йодида калия. Раствор стабилен. 8. Калибровоч-
ный раствор альбумина (из человеческой сыво-
ротки): 100 г/л раствор альбумина в 154ммоль/л

растворе хлорида натрия.

М а т е р и а л  д л я  и с с л е д о в а н и я .

Сыворотка крови.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Опытная проба:

к 0,1 мл сыворотки прибавляют 5 мл рабочего
раствора биуретового реактива и смешивают

избегая образования пены. Через 30  м и н (и не

позднее чем через 1 ч) измеряют на фотометре
в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны

500—560 им (зеленый светофильтр) против хо-
лостой пробы. Холостая проба: к 5 мл рабочего

биуретового реактива прибавляют 0,1 мл

154 ммоль/л раствора хлорида натрия, далее об-

рабатывают как опытную пробу.

Р а с ч е т ведут по калибровочному гра-

фику.

П о с т р о е н и е  к а л и б р о в о ч н о г о

г р а ф и к а : из калибровочного раствора гото-
вят рабочие растворы как указано ниже.

№ про-

бирки

1

2
3
4
5

Калибро-

вочный ра-

створ аль-

бумина, мл

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

154 ммоль/л

раствор

хлорида

натрия, мл

0,8

0,6

0,4

0,2

Концентра-

ция альбу-

мина, г/л

20
40

60

80

100

Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабо-

чего раствора и прибавляют по 5 мл рабочего
биуретового реактива; через 30—60 мин изме-

ряют на фотометре, как в опыте, против холостой

пробы. По полученным данным строят калибро-

вочный график. Калибровочная кривая линей-
на до 100 г/л альбумина.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы : 65—85 г/л

(6,5—8,5 г/100 м л ) .

О ц е н к а  а н а л и т и ч е с к о й  н а д е ж -

н о с т и  м е т о д а . Метод специфичен, отлича-
ется хорошей воспроизводимостью. Воспроизво-
димость (V) составляет 1,5—3,5 %. На пра-

вильность метода влияет качество калибровоч-

ного материала и корригирование результатов

со значением холостой пробы на реактивы и сы-

воротку. Небольшое число веществ оказывает

интерферирующее действие в данной реакции:

билирубин при концентрации больше 85 мкмоль/л,

триглицериды — больше 11,4 ммоль/л. Для уст-

ранения интерференции, вызванной липемией

(присутствием хиломикронов), применяют

экстракцию диэтиловым эфиром. Большинство

лекарств не вызывает интерференцию.

Л и т е р а т у р а . Методические указания по

применению унифицированных клинических ла-
бораторных методов исследований. Под ред.

В. В. Меньшикова.—М., 1973, с. 45—47;
Weichselbaum Т. Amer. J. Clin. Pathol., 1946,

v o l . 16, p. 40.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Изменение

содержания общего белка в сыворотке крови

происходит при уменьшении процессов синтеза
белка, нарушении водного баланса, усиленном
распаде и потере белка. Гипопротеинемия наб-

людается при нефротическом синдроме, синд-

роме мальабсорбции (энтерит, хронический
панкреатит), экссудативной энтеропатии, забо-
леваниях кожи (ожоги, экзема), массивных кро-

вотечениях, задержке солей и воды (хронические
почечные заболевания), агаммаглобулинемии,

гипогаммаглобулинемии, неправильном пита-
н и и , голодании. Уменьшение содержания белка
в плазме крови может наступить также в резуль-

тате задержки воды при сердечной декомпенса-

ции, заболеваниях, сопровождающихся отеками
или большими потерями белка с мочой, напри-

мер при нефритах. Нарушением синтеза белка
и уменьшением его вследствие этого в сыворотке

крови сопровождаются раковая кахексия, дли-
тельные воспалительные процессы.

Гиперпротеинемия наблюдается  п р и плазмо-

цитоме, макроглобулинемии Вальденстрема,

хронических воспалительных заболеваниях

(ревматоидный артрит, диффузные болезни сое-

динительной ткани — коллагенозы, бронхоэк-

тазы, цирроз печени), состояниях и болезнях,

сопровождающихся дегидратацией (понос, рво-
та, сахарный диабет).

При тяжелых травмах увеличение содержа-

н и я общего белка в плазме крови может насту-
пить за счет потери части внутрисосудистой

жидкости. При острых инфекционных заболева-

н и я х к гиперпротеинемии приводит усиленный
синтез белков острой фазы, при хронических
инфекционных заболеваниях — повышение син-

теза иммуноглобулинов.

175

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

5.1.2. Альбумин

Альбумин — простой белок, синтезиру-

ющийся и  п е ч е н и ; в плазме крови поддержи-

вает коллоидно-осмотическое давление,  и г р а е т

важную роль в транспорте  м н о г и х веществ

экзогенного и эндогенного происхождения.

Методы определения альбумина — фотомет-

рические, электрофоретические, иммунологичес-

кие. Фотометрические методы основаны главным

образом на взаимодействии  а л ь б у м и н а с кра-
сителями. С этой целью  п р и м е н я ю т бромкрезо-

ловый зеленый (БКЗ), бромкрезоловый крас-

н ы й , метиловый  о р а н ж е в ы й , натриевую соль
2-(4-оксиазобекзол)-бензойной кислоты (ОБК);

бромфеноловый голубой и др. Наиболее распро-

странены методы с использованием в качестве

красителей БКЗ и ОБК. Наиболее  с п е ц и ф и ч н ы м

является метод с БКЗ; при рН 7,0  а л ь б у м и н

обладает высокой степенью сродства к БКЗ.

При  п р и м е н е н и и ацетатного буфера окраска

развивается быстро и остается стабильной в те-

чение 2 ч. Интенсивность образования окра-

шенного соединения зависит от вида буфера.

При применении ацетатного и лактатного буфе-

ра достигается наибольшая чувствительность

метода (соотношение объемов пробы и реак-

тивов может составлять 1 :500). Оптимум рП

ацетатного буфера равен 4,1 —4,2. Метод с БКЗ

требует введения в реакцию детергентов для

п р е д о т в р а щ е н и я  п р е ц и п и т а ц и и комплекса аль-

бумина с БКЗ. С этой целью используют  к а т и

онные, анионные детергенты, чаще применяют

неионные детергенты — твин 20, твин 80, бридж

35, тритон Х-100 и др. Метод, основанный на

реакции  а л ь б у м и н а с 2- (4-оксиазобензо. i)

бензойной кислотой, отличается низкой чувстви-

тельностью и специфичностью, а также неста

бильностыо окраски конечного продукта реак-

ции.

Унификация методов. Метод определения

альбумина по реакции с бромкрезоловым зеле

ным утвержден в качестве  у н и ф и ц и р о в а н н о г о

в 1979 г.

Унифицированный метод по реакции с бром-

крезоловым зеленым. П р и н ц и п. При  в з а и м о -

действии альбумина с БКЗ в слабокислой среде

в присутствии детергента образуется окрашен-
ный комплекс синего цвета.

Р е а к т и в ы . 1. Уксусная кислота, 1 моль/л:

в мерную колбу вместимостью 1 л помещают

60 мл ледяной уксусной кислоты и доводят

объем водой до метки. 2. Натр едкий ч. д. а.,

х. ч. 1 моль/л. 3. Полиоксиэтиленлауриловый

эфир (бридж 35). 4. Ацетатный буфер, 0,05 моль/л,

рН 4,2 с добавлением детергента: 0,85 г бриджа

35 растворяют в 200 мл воды, добавляют 50 мл

I моль/л раствора уксусной кислоты, 13,2-мл

I моль/л раствора едкого натра и доводят объем

водой до 1 л. Перемешивают, проверяют рН.

Реактив стабилен  п р и хранении в холодильнике.

5. Бромкрезоловый зеленый (БКЗ) водораство-

р и м ы й , индикатор, ч. д. а. 1,2 ммоль/л: 0,4292 г

БКЗ растворяют в 200—-300 мл воды в мерной

колбе емкостью 500 мл и доводят объем до метки.

Стабилен при хранении в холодильнике в посуде

из темного стекла. 6. Рабочий раствор БКЗ

в ацетатном буфере: в мерную колбу вместимо-

стью 1 л помешают 85 мл 1,2 ммоль/л раствора

БКЗ, доводят объем до метки ацетатным буфе-

ром с детергентом. Стабилен при хранении

в холодильнике в посуде из темного стекла.

7. Основной калибровочный раствор альбумина,

10 г/100 мл. Можно использовать ампулирован-

ный 10 % раствор альбумина плацентарного.

М а т е [) и а л  д л я  и с с л е д о в а н и я .

Сыворотка крови, свободная от гемолиза.

Х о д о п р е  д е л е н и я.  О п ы т н а я проба:

10 мкл сыворотки крови (или 0,1 мл сыворотки,

разведенной в 10 раз 154 ммоль/л раствора

N a C l ) тщательно перемешивают, избегая обра-

зования пены, с 4 мл рабочего раствора БКЗ

в ацетатном буфере. Через 5—10 мин измеряют

на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при

длине волны 630—690 нм (красный свето-

фильтр)  п р о т и в холостой пробы на  р е а к т и в ы

или на спектрофотометре  п р и  д л и н е волны 625 нм

в кювете с толщиной слоя 1 см.  О к р а с к а  с т а б и л ь -

на в течение 8 ч. Холостую пробу ставят так же,

как опытную, но вместо сыворотки добавляют
0,1 мл воды.

Расчет ведут по калибровочной  к р и в о й .

П о с т р о е н и е  к а л и б р о в о ч н о й

к р и в о и: готовят ряд разведений основного ка-

либровочного раствора, как указано ниже. Ка-

либровочные растворы обрабатывают, как опыт-

ные, но вместо сыворотки добавляют 10 мкл

калибровочного раствора. Калибровочная кри-

вая  л и н е й н а до концентрации альбумина 60 г/л.

№ про-

бирки

1

2
3

4

5

Основной ка-

либровочный

раствор аль-

бумина, мл

1,0
1,5

2,0
2,5
3,0

Дистилли-

рованная

вода, мл

4,0
3,5
3,0
2,5
2,0

Содержание

альбумина в

сыворотке

крови, г/л

20

30
40

50

60

Н о р м а л |ь н ы е  в е л и ч и н ы: 35—50 г/л

(3.5-5,0 г/100  м л ) .

В о с п р о и з в о д и м о с т ь . V 2—5 %.

Л и т е р а т у р а . Лукичеоа Т. И., Сентебо-

на Н. А. Лаб. дело. 1977, №  1 1 , с. 675—

677; 1978, № 4, с. 227—233; Slurardin V., Ney J

/..  k l i n .  C l i e i n .  k l i n . Biochem., 1972, Bd 10,

S. 338- 344.

К л п н и ч е с к о е з н а ч е п и е. Гипераль-

б у м и н е м и я наблюдается при тех же состояниях,

что и гиперпротеинемия. Гипоальбуминемия на-

ступает при больших потерях белка,  с в я з а н -

ных с кровотечением при нарушении ситеза

альбумина и увеличении процессов распада.

176

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

5.1.3. Белковые фракции

Состав фракций белков, выделяемых в био-

логических жидкостях, в значительной степени

зависит от применяемого метода.

Основные методы фракционирования белков

сыворотки крови: высаливание нейтральными

солями, электрофоретическое фракционирова-

ние, иммунологические методы, седиментацион-

ный способ, хроматография, гель-фильтрация,

осаждение этиловым спиртом при низкой темпе-

ратуре. Наиболее приемлемыми и информатив-

ными являются электрофоретические методы

разделения. Другие методы не получили широ-

кого распространения.

При электрофоретическом разделении через

исследуемую сыворотку, помещенную в камеру

с буферным раствором, пропускают электричес-

кий ток определенной силы и напряжения. В за-

висимости от электрического заряда и других

физических и химических свойств белковые

фракции передвигаются к одному из полюсов

(в нейтральной среде—к аноду). Количество

выделенных белковых фракций зависит от  п р и -

меняемой поддерживающей среды. В качестве

поддерживающей среды при электрофорезе при-

меняют бумагу, пленки ацетат целлюлозы, гели

крахмала, полиакриламида, агара и комбиниро-

ванные среды.

Электрофорез на бумаге был введен в 50-х

годах. Оценка результатов производится фото-

метрически после элюирования отдельных фрак-

ций белков или на денситометре. Недостатки

метода: вследствие химической неоднородности

бумаги получается недостаточно четкое разделе-

ние фракций; большая длительность процессов

разделения, окрашивания, отмывания.

Электрофорез на пленках из ацетата целлю-

лозы по сравнению с бумажным электрофорезом

обладает рядом преимуществ: химическая одно-

родность ацетата и одинаковый размер пор по-

зволяют увеличить четкость разделения; время,

необходимое для разделения, значительно мень-

ше, чем при электрофорезе на бумаге; для по-

лучения четкой электрофореграммы достаточно

0,1—0,3 мкл образца; фон, получаемый после

окрашивания, легко отмывается; абсорбция бел-

ка пленкой  м и н и м а л ь н а я . Для исследования

применяют веронал-мединаловый буфер рН 8,6,

веронал-ацетатный буфер рН 8,6, мединал-цит-

р а т н ы й буфер рН 8,6, трис-буфер.

Для окраски электрофореграммы приме-

няют: пунцовый С, нигрозин, амидо черный,

азокармин, бромфеноловый синий. Чаще других

используют пунцовый С-индикатор: при рН 10,0

красный, при рН 12,5— пурпурный. При элек-

трофорезе на бумаге и пленках ацетата цел-

люлозы в сыворотке крови получают 5 фракций:

альбумин — самая большая и наиболее быстро

движущаяся к аноду фракция, далее а

1

-глобу-

лины, а

2

-глобулины, в-глобулины и у-глобули-

ны — наиболее медленно движущаяся к аноду

фракция. Метод электрофореза на пленках из

ацетата целлюлозы утвержден в качестве уни-

фицированного в 1979 г. Электрофорез в гелях

(агаровом, крахмальном и др.) применяют реже.

При электрофорезе в  п о л и а к р и л а м и д н о м геле

в сыворотке крови получают более 20 фракций

белков.

Методом высаливания нейтральными солями

(сульфат аммония, сульфат и фосфат натрия)

выделяют только 3 фракции белков плазмы:

альбумины, глобулины, фибриноген.

Унифицированный метод электрофоретичес-

кого разделения на пленках из ацетата цел-

люлозы.  П р и н ц и п . Коллоидные частицы бел-

ка перемещаются в электрическом поле по-
стоянного тока: в щелочной среде — к аноду,

в кислой — к катоду. В щелочной среде в элект-

рическом поле наиболее быстро перемещаются

альбумины, затем щ-, «2- и у-глобулины.

Р е а к т и в ы .  1 . 5,5-Диэтилбарбитуровой

кислоты натриевая соль (мединал), фарм. 2. Ли-

монная кислота ч. д. а., х. ч. 3. Барбитал-цит-

ратный (мединал-цитратный) буфер рН 8,6:

7,36 г 5,5-диэтилбарбитурата натрия (медина-

ла), 0,3 г лимонной кислоты растворяют в 700 мл

воды в мерной колбе вместимостью 1 л, проверя-

ют рН и доводят водой до метки. 4. Бромфено-

ловый синий водорастворимый, индикатор

ч. д. а. 5. Ртуть двухлористая (сулема, хлорная

ртуть) ч. д. а. 6. Уксусная кислота ледяная х. ч.

7. Пунцовый С. 8. Кислотный красный 2Ж.

9. Трихлоруксусная кислота ч., 50 г/л раствор.

10. Растворы для окрашивания, а) Раствор

бромфенолового синего, 0,5 г/л: 10 г двухлори-

стой ртути и 20 мл ледяной уксусной кислоты

растворяют в небольшом количестве воды при

нагревании на водяной бане, непрерывно поме-

шивая до полного растворения сулемы. Отдель-

но растворяют 0,5 г бромфенолового синего

в воде. Оба раствора помещают в мерную колбу

вместимостью 1 л и доводят водой до метки,

б) раствор пунцового С: 0,3 г краски растворя-

ют в 100 мл 50 г/л раствора трихлоруксусной

кислоты, в) Раствор кислого красного 2Ж:

0,3 г краски растворяют в 100 мл 50 г/л раствора

трихлоруксусной кислоты.  1 1 . Отмывающий рас-

твор — уксусная кислота, 50 г/л раствор. 12.

Просветляющие растворы, а) Вазелиновое мас-

ло, б) Смесь: ледяная уксусная кислота и ацетон

( 1 : 1 ) .

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

1. Прибор для электрофореза на пленках из

ацетата целлюлозы. 2. Пленка из ацетата цел-

люлозы. 3. Денситометр.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Подготовка прибо-

ра: прежде чем приступить к работе, необходимо

ознакомиться с инструкцией по эксплуатации

прибора. В соответствии с инструкцией запол-

няют камеры прибора буферным раствором.

Следят, чтобы уровень буфера был одинаковым

в обеих камерах.

Подготовка пленок из ацетата целлюлозы:

смачивают пленки буферным раствором (поме-

щают в буферный раствор на 5  м и н ) . Удаляют

избыток влаги фильтровальной бумагой. За-

крепляют пленку матовой стороной кверху

(пленки должны располагаться параллельно

друг другу и строго параллельно стенкам при-

бора, не должны провисать). Закрывают каме-

ру крышкой и пропускают ток напряжением

150 В в течение 5 мин, после чего выключают

ток.

177

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Нанесение сыворотки: на катодный  к р а й

п л е н к и наносят 1—4 мкл сыворотки в виде узкой

полоски, так, чтобы полоски не доходили до края

пленки.

Проведение электрофореза: включают ток

и проводят электрофоретическое разделение в
течение 20 мин при напряжении 150 В и силе

тока I мА на 1 см поперечного сечения полоски.

Обработка пленок из ацетата целлюлозы:

выключают ток,  в ы н и м а ю т пленки, высушивают

их вначале на воздухе в течение 5—10  м и н ,

затем (для фиксации) в сушильном шкафу  п р и

100 'С в течение 10 мин. Окрашивают в течение

15  м и н одним из  у к а з а н н ы х красителей, после

чего пленки несколько раз отмывают от избытка

красителя 50 г/л раствором уксусной кислоты до

исчезновения фона (3—4  р а з а ) . После отмывки

пленки промокают фильтровальной бумагой и

высушивают на воздухе. Затем пленки просвет-

ляют в одном из просветляющих растворов.

Р а с ч е т . Измерение проводят на денсито-

метре. Результаты выражают в процентах.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы зависят  о т

вида красителя (табл. 38).

Т а б л и ц а 38. Нормальные величины белковых

фракций (в процентах)

В о с п р о и з в о д и м о с т ь  п о  к а ж д о й

и з ф р а к ц и и. В серии V ~ 1,5—5 %, изо дня
в день V~3- 8%.

П р и м е ч а н и я .  1 . Можно использовать

б а р б и т а л о в ы й (мединал-вероналовый) бу-

фер такого же состава, как и для электро-

фореза на бумаге. 2. После проведения элек-

трофореза буфер из катодной и анодной

камер смешивают, что дает возможность ис-

пользовать его несколько раз.

Л и т е р а т у р а . Сентебова Н. А., Медве-

дева Л. А., Александровская Т. Н. В кн.: Унифи-

кация лабораторных методов исследования/Под

ред. В. В. Меньшикова. М., 1978, вып.  V I I I ,

с. 39—49; Kohn J. In: Laboratory medicine.
V. 1— Hagerstown e. a., 1975, Chap. 12B.

Электрофоретическое разделение на бумаге.

П р и н ц и п тот же, что при электрофорезе

на пленках из ацетата целлюлозы.

Р е а к т и в ы. 1. Буфер. Можно использо-

вать различные виды буферов — мединал-веро-

наловьш. боратный, трис-буфер. а) Мединал-

вероналовый буфер рН 8,6:10,3 г мединала и

1,84 г веронала растворяют и доводят до 1 л

водой, б) Трис-буфер рН 8,9: трис-(оксиметил)-

аминометан 60,5 г, этилендиаминтетрауксусная

кислота (ЭДТА) 6 г, борная кислота 4,6 г, вода

до 1 л. 2. Раствор красителя. Используют раз-

личные красители — бромфеноловый синий,

амидо черный, азокармин Б и др.: 1 г бромфено-

лового синего и 20 г двухлористой ртути (суле-

м ы ) растворяют в воде, добавляют 40 г ледяной

уксусной кислоты и доводят водой до 2 л. Хранят

в посуде из темного стекла. 3. Раствор для элю-

ирования — натр едкий, 0,03 моль/л.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

1. Прибор для электрофореза на бумаге. 2. Хро-

матографическая фильтровальная бумага марки

«Б» (качество фильтровальной бумаги имеет

большое значение: она должна быть однородной

и плотной).

Х о д  о п р е д е л е н и я . Подготовка прибо-

ра: в камере необходимо поддерживать опреде-

ленную влажность воздуха, чтобы предохранить

фильтровальную бумагу от высыхания. Для это-

го прибор закрывают крышкой. Буферный рас-

твор в разных отделах камеры должен иметь

одинаковый уровень, чтобы избежать перелива-

ния жидкости через ленту.

Подготовка бумаги: полосы фильтровальной

бумаги смачивают раствором свежего буфера.

Избыток буфера удаляют, отжимая полосы ме-

жду лентами фильтровальной бумаги, и помеща-

ют их в электрофоретическую камеру. Бумажная

лента может быть расположена горизонтально

(горизонтальный электрофорез) или под углом

(вертикальный электрофорез). При горизон-

тальном электрофорезе бумажная лента должна
быть хорошо натянута.

Нанесение сыворотки: на край ленты наносят

по 5—10 мкл негемолизированной сыворотки в

виде поперечной полосы, отступя на 0,5 см от

краев.

Проведение электрофореза: камеру закрыва-

ют крышкой и проводят электрофорез сыворотки

в течение 6—24 ч при  н а п р я ж е н и и от 3 до 8 В

на 1 см пути тока. Продолжительность электро-

фореза устанавливают в зависимости от силы

и  н а п р я ж е н и я тока, вида буферного раствора,

рН, длины, ширины и толщины бумажных
полос.

Обработка бумажных полос: выключают ток,

вынимают ленты, сушат в сушильном шкафу
в течение 10 мин при 105°С и красят, погружая

в раствор красителя на 20 мин. Краситель сли-

вают и ленты несколько раз промывают 20 г/л

раствором уксусной кислоты до устранения

фона (окрашенные участки бумаги, свободные

от белка). Ленты вновь просушивают на воз-
духе.

Расчет: измерение проводят на денситометре

или на фотометре после элюирования. Резуль-

таты выражают в процентах.

Элюирование: кусочки ленты, содержащие

отдельные фракции, вырезают и помещают в

пробирки для элюирования. Для этого в каждую

пробирку с глобулиновой фракцией приливают

по 10 мл 0,02 моль/л раствора NaOH, к альбу-

миновой фракции — 20 мл и оставляют в тече-

ние 1—2 ч. Измерение проводят в кювете с тол-

щиной слоя 1 см против 0,02 моль/л раствора

178

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  42  43  44  45   ..