Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 33

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  31  32  33  34   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 33

 

 

клетки. В моноцитах периферической крови и

костного мозга с помощью двойной инкубации

и добавления фторида натрия (NaF) в коли-

честве 1,5 мг/мл показан NaF — чувствитель-

ный фермент.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

активности фермента в моноцитах и увеличение

в лимфоцитах обнаружено при диффузных пора-

жениях печени. Значительная активность фер-

мента выявлена в миеломных клетках при плаз-

моцитоме, в властных клетках при остром мо-

нобластном (гистиомонобластном) лейкозе и

при промиелоцитарном лейкозе, в то время как

при остальных формах острых лейкозов актив-

ность фермента в бластных клетках ничтожна.

При хроническом лимфолейкозе активность фер-

мента в лимфоцитах резко снижена. Фермента-

тивная активность нейтрофилов при острых лей-

козах, особенно при остром миелобластном,

снижена.

Л и т е р а т у р а . Lofjler H. Klin. Wschr.,

1961, Bd 29, H. 23, S. 1220—1227.

КИСЛАЯ а-НАФТИЛАЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА.

Фермент локализуется главным образом в лизо-

сомах цитоплазмы клеток и участвует в гидро-

лизе алифатических эфиров.

Метод Кулленкампфа и соавт.  П р и н ц и п .

Из соединения а-нафтилацетата при кислом рН

под влиянием фермента образуется свободный

нафтол, дающий цветное окрашивание с фук-

сином.

Р е а к т и в ы . 1. 2,5% раствор глутараль-

дегида (рН 7,2). 2. 4 % раствор солянокислого

фуксина. 3. 4 % раствор нитрата натрия. 4. 0,7 М

фосфатный буфер (рН 5,0). 5. сх-Нафтилацетат.

6. 2 % раствор метилового зеленого. 7. Инкуба-

ционная среда: 2 мл реактива № 2, 2 мл реакти-

ва № 3, 40 мл реактива № 4. 10 мг а-нафтила-

цетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Инку-

бационная среда должна иметь рН 5,8 и гото-

виться перед употреблением.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .  1 .

Холодильник. 2. Весы. 3. Эксикатор.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Высушенные  н а

воздухе мазки фиксируют в глутаральдегиде

(реактив № 1) при температуре 4 °С в течение

10 мин (нефиксированные мазки можно хранить

в холодильнике 1—2 мес). Промывают дистил-

лированной водой. Инкубируют в инкубацион-

ной среде в течение 1'/

2

—6 ч. Промывают дис-

тиллированной водой. Докрашивают метиловым

зеленым.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . В цито-

плазме лимфоцитов активность фермента выяв-

ляется в виде темно-красных гранул, в нейтро-

филах и моноцитах — в виде диффузной окрас-

ки. СЦК лимфоцитов равен 0,57 + 0,04. Актив-

ность фермента увеличивается при увеличении

времени инкубации. Так, при инкубации в тече-

ние 1'/2 ч активность фермента выявлена в

49,83±2,75 % лимфоцитов, при удлинении сро-

ка инкубации до 6 ч эстеразоположительными

становятся 79,7± 1,52% лимфоцитов. Исполь-

зование в качестве фиксатора формалина дает

более стабильные результаты.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

активности фермента в лимфоцитах характерно

для хронического лимфолейкоза (В-клеточного

варианта); при Т-клеточных пролиферациях ак-

тивность неспецифической кислой эстеразы в

лимфоцитах повышена.

Л и т е р а т у р а . Потапова С. Г., Шахба-

зян Г. П., Демидова Н. В., Козинец Г. И.

Лаб. дело, 1981, № 2, с/74—76; Kullenkam.pl 1.,

Janassi G., Greaves H. Brit. J. Haemal., 1977,

vol. 36. p. 231—240.

НАФТОЛ-AS АЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА. Метод

Леффлера.  П р и н ц и п и  о б о р у д о в а н и е

такие же, как для определения а-нафтилаце-

тат-эстеразы.

Р е а к т и в ы .  1 . Формалин промышленного

производства (40 %). 2. 0,1 М фосфатный буфер

(рН 6,8—7,0). 3. Ацетон х. ч. 4. Нафтол-AS-

ацетат (можно использовать нафтол-АS-D-аце-

тат). 5. Прочный синий ВВ. 6. Ядерный краси-

тель. 7. Инкубационная среда: 4 мг нафтол-

AS-ацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона,

40 мл буферного раствора (реактив № 2); встря-

хивают и добавляют 80 мг прочного синего ВВ,

встряхивают и фильтруют.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Высушенные  н а

воздухе (в течение 1—3 ч) мазки фиксируют

в парах формалина несколько минут. Помеща-

ют в инкубационную среду на 60 мин при ком-

натной температуре. Промывают в проточной

воде. Докрашивают ядерным красителем.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . Так же, как

и а-нафтил-эстераза, фермент локализуется

главным образом в моноцитах крови. По сравне-

нию с активностью а-нафтилацетат-эстеразы

активность нафтол-АS-ацетат-эстеразы в сег-

ментоядерных нейтрофилах несколько выше, а в

лимфоцитах — слабее. В клетках костного моз-

га фермент обнаружен в мегакариоцитах, рети-

кулярных и плазматических клетках, а также

незрелых гранулоцитах.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Значитель-

ная активность фермента характерна для бласт-

ных клеток при остром монобластном (гистио-

монобластном) лейкозе, при остром промиело-

цитарном лейкозе; при других формах острых

лейкозов активность фермента в бластных клет-

ках не выявляется.

Л и т е р а т у р а . Loffler H,  K l i n . Wschr.,

1961, Bd 39, H. 23, S. 1220—1227.

НАФТОЛ-AS D-ХЛОРАЦЕТАТ-ЭСТЕРА-

ЗА. Метод Молони с соавт.  П р и н ц и п и  о б о -

р у д о в а н и е такие же, как для определения

а-нафтилацетат-эстеразы.

Р е а к т и в ы . 1. 10% раствор формалина

в метаноле (сохраняют в холодильнике). 2. Бу-

ферный раствор Михаэлиса (рН 7,4). 3. Наф-

тол-АS-D-хлорацетат. 4. Ацетон х. ч. 5. Грана-

товый прочный GBC или синий прочный ВВ.

6. Ядерный краситель. 7. Инкубационная среда:

10 мг нафтол-АS-D-хлорацетата, растворенного

в 0,5 мл ацетона, 10 мл буферного раствора

(реактив № 2), разведенного пополам дистил-

лированной водой (добавляют по каплям), 10 мг

131

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

реактива № 5; быстро встряхивают во избежа-

ние образования осадка, смесь фильтруют.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .  Н е

требуется.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Свежеприготовлен-

ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют

в холодном 10 % растворе формалина в метано-

ле в течение 30 с и затем высушивают. Фиксиро-

ванные препараты можно сохранять несколько

месяцев. Помещают в инкубационную смесь при

комнатной температуре на 30 мин. Промывают

в проточной воде. Докрашивают ядерным кра-

сителем.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . Фермент

выявляется в виде  с и н и х или фиолетовых гранул

в цитоплазме сегментоядерных нейтрофилов,

лимфоциты и моноциты фермента не содержат.

В мазках пунктата костного мозга здоровых

людей наибольшую активность фермента обна-

руживают в промиелоцитах. По мере созревания

гранулоцитов активность нафтол-АS-D-хлор-

ацетат-эстеразы несколько снижается, но оста-

ется довольно высокой. Наиболее высокая интен-

сивность реакции наблюдается при фиксации

в парах формалина при комнатной температуре.

Время фиксации до 10 мин не оказывает  в л и я н и я

на уровень активности фермента, лишь при

фиксации в течение 30  м и н и дольше активность

фермента снижается.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Высокая

активность фермента обнаружена в властных

клетках при промиелоцитарном остром лейкозе,

ничтожная — при остром монобластном; при

других формах острых лейкозов в властных

клетках активность не выявлена.

Л и т е р а т у р а . Руденс Ю. Ф., Буй-

кис И. М. Лаб. дело., 1971, № 10, с. 592;

Moloney W. С. et  a l . J. Histochem. Cytochem.,

1960, vol. 8, p. 200—207; Schmalzl F.\ Braun-

steiner H.  K l i n . Wschr., 1968, Bd 46, H. 12,

S. 642—650.

ДЕГИДРОГЕНАЗЫ — группа окислитель-

но-восстановительных ферментов, локализу-

ющихся в митохондриях цитоплазмы клеток.

Для исследования различных дегидрогеназ ис-

пользуют метод Нахласа с соавт. в модифика-

циях, основанный на реакции восстановления

солей тетразолия и выпадения осадка диформа-

зана в местах активности ферментов.

СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА (СДГ; К

Ф. 1.3.9.9.1). Метод Нахласа с соавт. (моди-

фикация  К в а г л и н о , Хейхо).  П р и н ц и п . Ак-

тивность фермента оценивается по реакции вос-

становления солей тетразолия в виде осадка

диформазана синего цвета.

Р е а к т и в ы . 1. 60 % водный раствор аце-

тона. 2. 0,2 М фосфатный буфер (рН 7,4).

3. 0,2 М раствор сукцината натрия. 4. 0,6 М

раствор бикарбоната натрия. 5. 0,03 М раствор

хлорида  а л ю м и н и я . 6. 0,03 М раствор хлорида

кальция. 7. Тетразолий нитро ВТ. 8. 0,1 % рас-

твор прочного красного. 9. Инкубационная сре-

да: 10 мл реактива № 3, 2 мл реактива № 4,

0,2 мл реактива № 5, 0,2 мл реактива № 6,

10 мг тетразолия в 10 мл дистиллированной

воды, дистиллированной воды до 40 мл.

132

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

Термостат.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Свежеприготовлен-

ные и высушенные на воздухе мазки фиксируют

в ацетоне при комнатной температуре 30—60 с.

Промывают в дистилированной воде и высуши-

вают на воздухе. Инкубируют в инкубационной

среде в течение 1 ч при 37 °С. Промывают дис-

тиллированной водой. Докрашивают 0,1 % раст-

вором прочного красного 10 мин.

Метод Нахласа с соавт. (модификация

Р. П. Нарциссова).  П р и н ц и п тот же.

Р е а к т и в ы . 1. 60 % раствор ацетона, на-

сыщенный трилоном Б. 2, 1/15 M фосфатный

буфер (рН, 7,2). 3. Сукцинат натрия. 4. Пара-

нитротетразолий фиолетовый. 5. Трилон Б. 6.

0,5 % раствор метилового зеленого на ацетатном

буфере (рН 5,0). 7. Инкубационная среда:

540 мг сукцината натрия растворяют в 10 мл

дистиллированной воды, добавляют 10 мл бу-

ферного раствора (реактив № 2) и 10 мл раст-

вора пара-нитротетразолия в дистиллированной

воде (1  м г / м л ) , 13 мг трилона Б (рН довести до

7,2) и дистиллированной воды до 40 мл. Среда

может быть пригодна 1—2 нед при хранении

в холодильнике.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

1. Термостат или водяная баня. 2. Холодиль-

ник.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки

ацетоном (реактив № 1) при комнатной темпе-

ратуре в течение 30 с. Ополаскивают дистил-

лированной водой 3—5 с и высушивают. Инку-

бируют в инкубационной среде в течение 1 ч

при 37 °С. Промывают проточной водой в тече-

ние 1  м и н . Ополаскивают дистиллированной

водой 3—5 с. Докрашивают метиловым зеленым

5—10 мин. Промывают в проточной воде. Допол-

нительно фиксируют мазки парами формалина

в течение 30 мин (для предотвращения раст-

ворения формазана нитротетразолия фиолето-

вого в иммерсионном масле).

а - Г Л И Ц Е Р О Ф О С Ф А Т Д Е Г И Д Р О Г Е Н А З А

(а-ГФДГ). Метод Нахласа с соавт. (модифика-

ция Р. П. Нарциссова).  П р и н ц и п см. Сук-

цинатдегидрогеназа.

Р е а к т и в ы . 1. 60 % раствор ацетона, на-

сыщенный трилоном Б. 2. 1/15 M фосфатный

буфер (рН 7,2). 3. а-Глицерофосфат натрия.

4. Пара-нитротетразолий фиолетовый. 5. Трилон

Б. 6. 0,5 % раствор метилового зеленого на

ацетатном буфере (рН 5,0). 7. Инкубационная

среда: 630 мг ex-глицерофосфата натрия раство-

ряют в 10 мл дистиллированной воды, добав-

ляют 10 мл буферного раствора (реактив № 2),

10 мл раствора пара-нитротетразолия в дистил-

лированной воде (1 мг/1 мл), 13 мг трилона Б

(рН доводят до 7,2) и дистиллированной воды до

40 мл. Среда пригодна в течение 1—2 нед при

хранении в холодильнике.

О б о р у д о в а н и е и  х о д  о п р е д е л е -

н и я см. Сукцинатдегидрогеназа (модифика-

ция Р. П. Нарциссова).

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . У здоровых

СДГ и а-ГФДГ выявляются в виде гранул в ней-

трофилах, лимфоцитах, тромбоцитах перифери-

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

ческой крови и миелобластах, гранулоцитах,

мегакариоцитах, эритро- и нормобластах кост-

ного мозга.

СЦК СДГ лимфоцитов составляет 1,1 ±0,05;

а-ГФДГ—0,8±0,08. У детей активность фер-

мента СДГ обнаружена в 46 % лимфоцитов.

У здоровых взрослых в пунктате костного мозга

около 88 % недифференцированных клеток име-

ют активность фермента ( + ), все ядерные эле-

менты эритроидного ряда и гранулоциты прояв-

ляют активность на ( + ) и ( + + ).

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

активности ферментов в лимфоцитах отмечено

в период приступа бронхиальной астмы, при

хроническом лимфолейкозе. Повышение актив-

ности ферментов обнаружено у больных злока-

чественными опухолями в гранулоцитах, сниже-

ние активности — при хроническом миелолей-

козе.

Л и т е р а т у р а . Нарциссов Р. П. Арх.

анат., 1969, № 5, с. 85—91; Nachlas M. M. et  a l .

j. Histochem., Cytochem., 1957, vol. 5, p. 420—

436; Quaglino D., Hayhoe F. Nature, 1960, vol.

187, № 4731, p. 85—86.

ГЛИКОГЕН локализуется в цитоплазме кле-

ток и играет важную роль в энергетическом

метаболизме клеток. При цитохимическом иссле-

довании гликогена используют главным образом

PAS- или ШИК-реакцию (по названию реакти-

вов— шифф-йодная кислота).

Метод Шабадаша.  П р и н ц и п . Под влия-

нием периодата калия гликоген окисляется с об-

разованием альдегидных соединений, легко реа-

гирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернис-

тая кислота). В местах локализации гликогена

выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание.

Р е а к т и в ы . 1. 0,03 М раствор периодата

калия или натрия: 230 мг периодата растворяют

в 100 мл дистиллированной воды. Готовят перед

употреблением. 2. 1 н. НС1: 82,5 мл концентриро-

ванной НС1 отн. плотности 1,19 доливают дис-

тиллированной водой до 1 л. 3. Основной фуксин

(для фуксин-сернистой кислоты). 4. Метаби-

сульфит калия. 5. Реактив Шиффа; 1 г основного

фуксина растворяют в 200 мл кипящей дистил-

лированной воды. По мере охлаждения в раст-

вор добавляют 1 г метабисульфита калия и 20 мл

1 н. НС1. Оставляют на сутки. Для полного

обесцвечивания добавляют растолченную таб-

летку карболена, оставляют на сутки, затем

фильтруют. Реактив сохраняют в темноте (луч-

ше на холоде) в плотно закрытой посуде. Годен

к употреблению в течение нескольких месяцев

(легкая степень покраснения свидетельствует

о непригодности реактива). 6. Сернистая вода:

к 10 мл 10 % раствора метабисульфита калия

добавляют 200 мл дистиллированной воды и

10 мл 1 н. HCI. Готовят перед употреблением.

7. 0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой

краски (лихтгрюн).

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

1. Горелки. 2. Термостат. 3. Весы.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Препараты фикси-

руют (тотчас после приготовления) в абсолют-

ном спирте в течение 30 мин. Промывают в двух

сменах дистиллированной воды. Погружают в

раствор периодата на 20 мин (в темноте). Про-

мывают в трех сменах дистиллированной воды.

Ополаскивают в сернистой воде (в течение 1 —

2 мин). Окрашивают реактивом Шиффа в тече-

ние 30—40 мин (в темноте). Промывают в трех

сменах сернистой воды по 3 мин. Промывают

в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.

Окрашивают светло-зеленой краской в течение

10—20 с. Промывают в дистиллированной воде.

Гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый

цвет на зеленом фоне препарата. Кроме глико-

гена, положительную реакцию могут давать та-

кие ШИК-положительные вещества, как кислые

и нейтральные мукополисахариды, мукопроте-

ины, гликопротеины и др. Гликоген легко отдиф-

ференцировать от других веществ пробой со

слюной или диастазой.

Проба со слюной. Препарат помещают в све-

жесобранную слюну и оставляют на 30 мин

в термостате. Затем производят окраску на гли-

коген приведенным выше методом. Инкубация

препаратов со слюной способствует расщепле-

нию гликогена, и при реакции с реактивом

Шиффа не получается розовой окраски.

Идентифицировать гликоген можно также

путем предварительной инкубации мазков с диа-

стазой (а-амилаза; К. Ф. 3.2.1.1) (1 мл про-

фильтрованной диастазы растворить в 40 мл

изотонического раствора хлорида натрия) в те-

чение 30 мин в термостате.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . В мазках

периферической крови гликоген содержится в

цитоплазме нейтрофилов (в виде обильной мел-

кой зернистости), цитоплазме лимфоцитов (в

виде небольшого количества крупных зерен).

В пунктате костного мозга гликоген выявля-

ется в нейтрофилах разной степени зрелости,

лимфоцитах и мегакариоцитах. У здоровых лю-

дей количество интенсивно окрашенных нейтро-

филов крови ( + + +) колеблется в пределах

2—12 %, средней интенсивности окраски

( +  + ) — в пределах 72—90%, слабо окра-

шенных ( + ) —от 4 до 18%. СЦК равен

1,71—2,04.

В лимфоцитах крови здоровых людей глико-

ген содержится в виде небольшого числа гранул

в 10,4 ±2,3 % клеток. В мегакариоцитах кост-

ного мозга гликоген обнаруживается в виде

гранул (от единичных до 30—50), напоминая

скопления кровяных пластинок. У здоровых лю-

дей число гликогенположительных мегакариоци-

тов составляет 62,0 ±3,55 %.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Увеличе-

ние содержания гликогена в нейтрофилах наб-

людается при различных воспалительных про-

цессах, эритремии, сахарном диабете, уменьше-

ние — при агранулоцитозах, лучевой болезни,

при хроническом миелолейкозе, особенно при

прогрессировании процесса. Повышение числа

гликогенположительных лимфоцитов (до 70—

80 %) характерно для лимфопролиферативных

заболеваний, особенно хронического лимфолей-

коза. При тромбоцитопенической пурпуре и сим-

птоматических тромбоцитопениях число глико-

генположительных форм мегакариоцитов значи-

тельно снижено, после спленэктомии оно повы-

шается до нормальных величин.

133

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

При острых лейкозах гликоген можно обна-

ружить в властных клетках: при остром миело-

бластном лейкозе — в виде мелкой зернистости

в цитоплазме или в виде диффузного ее окраши-

вания, при остром лимфобластном лейкозе —

в виде крупных гранул, расположенных в цито-

плазме вокруг ядра, при остром монобластном

варианте бластные клетки содержат гликогена

немного в виде диффузной окраски, при эритро-

миелозе гликоген в виде гранул обнаружива-

ется в эритробластах.

Л и т е р а т у р а . Шабадаш А. Л. Изв.

АН СССР; серия биол., 1947, № 6, с. 745—

760; Шабадаш А. Л. Докл. АН СССР, 1949,

т. 68, № 2, с. 389—392.

К А Т И О Н Н Ы Й БЕЛОК. Неферментный ка-

тионный белок локализуется в лизосомах гра-

нулоцитов и играет важную роль в реализации

фагоцитарной функции клеток. При цитохими-

ческом исследовании катионных белков исполь-

зуют методы, основанные на применении диа-

хромных анионных красителей.

Метод Пигаревского (модифицированный).

П р и н ц и п . Избирательная окраска кат'ион-

ного белка гранулоцитов прочным зеленым при

рН 8,1—8,2.

Р е а к т и в ы . 1. Спиртовой раствор форма-

лина (1 мл формалина и 19 мл абсолютного

этилового спирта). 2. 0,2 М раствор триса: 24,2 г

триса (оксиметил) аминометана растворяют в

1 л дистиллированной воды. 3. 0,1 н. НС1. 4. Ме-

таноловый трис-буфер (25 мл реактива № 2

смешивают с 22,5 мл реактива № 3 и 52,5 мл

метанола). 5. Забуференный спиртовой раствор

прочного зеленого (рН 8,1—8,2): 100 мг прочно-

го зеленого растворяют в 100 мл реактива № 4.

Определяют рН через сутки после приготовле-

ния реактива и выравнивают его добавлением

в раствор порошка сухого триса (при рН ниже

8,1) или слабого раствора НС1 (рН выше 8,2).

Установленная величина рН стабильна при ра-

боте в течение 4 мес. Раствор хранить в стеклян-

ной посуде с притертой пробкой (можно при

комнатной температуре). 6. 0,25 % водный раст-

вор азура А: 250 мг азура А растворяют в 100 мл

дистиллированной воды. Краситель стойкий.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .  1 .

рН-Метр. 2. Весы.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Высушенные  н а

воздухе мазки фиксируют в спиртовом растворе

формалина 10—15 с. Во избежание фоновой

окраски можно использовать свежеприготовлен-

ные нефиксированные мазки (не позже чем через

48 ч после приготовления, препараты более дли-

тельного срока необходимо фиксировать). Маз-

ки окрашивают забуференным спиртовым раст-

вором прочного зеленого (реактива № 5) в те-

чение 20 мин. Быстро ополаскивают дистиллиро-

ванной водой. Окрашивают водным раствором

азура А в течение 15—20 с. Смывают мазки

дистиллированной водой и высушивают. При

микроскопии с желтым или оранжевым свето-

фильтром катионный белок в цитоплазме клеток

имеет вид ярко-зеленых гранул.

В о с п р о и з в о д и м о с т ь  м е т о д а : ко-

эффициент вариации V = 2,9 % для нормальных

134

величин и 5,2 % для патологических (не превы-

шает допустимой величины).

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . У взрослых

в возрасте 20—30 лет СЦК равен для мужчин

1,58 + 0,01 и для женщин 1,58 + 0,03. Более вы-

сокие значения получены у детей в возрасте

1 — 12 мес (1,89±0,03) и 1—3 лет (1,96 + 0,03).

Метод с бромфеноловым синим (по М. Г. Шу-

бину).  П р и н ц и п . Избирательная окраска ка-

тионного белка бромфеноловым синим.

Р е а к т и в ы .  1 . 5 % раствор сульфосалици-

ловой кислоты (5 г сульфосалициловой кислоты

растворяют в 95 мл дистиллированной воды).

2. 0,05 М раствор буры рН 9,55 (19,1 г буры

растворяют в 1 л дистиллированной воды).

3. 0,1 М раствор однозамещенного фосфата

калия (13,6 г КН

2

РО

4

 растворяют в 1 л дистил-

лированной воды). 4. 0,05 М боратный буфер

рН 8,2 (6,13 мл реактива № 2 добавляют 3,87 мл

реактива № 3, а затем доводят реактивом 3 до

рН 8,2). 5. 0,1 % раствор бромфенолового си-

него в 0,05 М боратном буфере (100 мг сухого

бромфенолового синего растворяют в 100 мл

реактива № 4). 6. 1 % водный раствор сафра-

нина или 0,05 % раствор основного фуксина.

Последний готовят перед употреблением: рас-

творяют 50 мг основного фуксина в 100 мл кипя-

щей дистиллированной воды.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .  1 .

рН-Метр. 2. Весы. 3. Газовая или электрическая

плитка.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки

в 5 % растворе сульфосалициловой кислоты

в течение 60—90 с. Тщательно промывают дис-

тиллированной водой и высушивают. Окраши-

вают 0,1 % раствором бромфенолового синего

в боратном буфере (реактив № 5) в течение

1—2 мин. Промывают в трех сменах 0,05 М бо-

ратного буфера (реактив № 4) по 1—3 мин.

Высушивают и докрашивают 1 % раствором

сафранина в течение 30—60с или 0,05 % раство-

ром основного фуксина в течение 1—2 с. Промы-

вают проточной водопроводной водой и высу-

шивают. Катионный белок выявляется в цито-

плазме клеток в виде синих гранул.

В о с п р о и з в о д и м о с т ь  м е т о д а . От-

носительная стандартная ошибка для группы

здоровых составила 5,2 %.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . У здоровых

в нейтрофилах обнаружено 123+1,5 ед. или

СЦК 1,23 + 0,015, при этом не отмечено разли-

чий у здоровых обоего пола. Протеинположи-

тельные нейтрофилы составляют у мужчин

83+1,4 %, у женщин 86 + 0,6 %.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

катионного белка в нейтрофилах характерно

для острого воспалительного процесса; наблю-

дается в разгаре различных инфекционных за-

болеваний бактериальной и вирусной этиоло-

гии. Период выздоровления сопровождается

нормализацией показателя. Изменения содер-

жания лизосомального катионного белка кор-

релируют со степенью тяжести заболевания.

Л и т е р а т у р а . Мазинг Ю. А., Старосель-

ская И. Я. Лаб. дело, 1981, № 10, стр. 582—

584; Нагоев Б. С. Катионный белок лейкоцитов

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  31  32  33  34   ..