Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 26

 

  Главная      Учебники - Медицина     Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  24  25  26  27   ..

 

 

Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 26

 

 

Опухолевые плетки и их комплексы находят

в камере и в окрашенном препарате. Злокачест-

венные клетки могут относиться к следующим

видам опухолей: медуллобластоме, мультиформ-

ной спонгиобластоме, астроцитоме, раку. Изу-

чение этих клеток требует специальных знаний.

Кристаллы встречаются в спинномозговой

жидкости редко. В случае распада опухоли в

содержимом кисты можно обнаружить кристал-

лы гематоиднна, холестерина, билирубина.

Элементы эхинококка — крючья, сколексы н

обрывки хитиновой оболочки пузыря — могут

быть при множественном эхинококкозе оболочек

(их находят чрезвычайно редко).

2.6.3. Химическое исследование

Унифицированный метод определения белка

с сульфосалициловой кислотой и сульфатом

натрия (1972).  П р и н ц и п . Интенсивность

помутнения при коагуляции белка сульфосали-

циловой кислотой пропорциональна его кон-

центрации.

Р е а к т и в ы . 1. 6% раствор сульфосали-

циловой кислоты. 2. 14 % раствор безводного

сульфата натрия. Для анализа применяют све-

жеприготовленную смесь равных объемов этих

реактивов (рабочий раствор). 3. Стандартный

раствор альбумина — 1 % раствор: 1 глиофили-

зированного альбумина (из человеческой или

бычьей сыворотки) растворяют в небольшом ко-

личестве 0,9 % раствора хлорида натрия в

мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят

объем раствором хлорида натрия до метки.

Реактив нестойкий. Для стабилизации к стан

дартному раствору прибавляют 1 мл 5 % раст-

вора азида натрия (NaN3). В этом случае при

хранении в холодильнике реактив годен к упот-

реблению в течение 2 мес; 1 мл раствора содер-

жит 10 мг альбумина. 4. 0,9 % раствор хлорида

натрия.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е : фо-

тоэлектроколориметр.

Х о д  о п р е д е л е н и я . В пробирку нали-

вают 5 мл свежеприготовленного рабочего

раствора и 0,5 мл ликвора. Тщательно переме-

шивают. Через 10 мин интенсивность помутне-

ния измеряют на фотоэлектроколориметре в

кювете с длиной оптического пути 1 см против

контроля, длина волны 410—480 им (сине-фио-

летовый светофильтр). В контроль вместо

реактива берут 0,9 % раствор хлорида натрия.

Расчет ведут по калибровочному графику. По-

строение калибровочного графика: из стандарт-

ного раствора готовят разведения и обрабаты-

вают их, как опыт. В 5 пробирок наливают

соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мл стандарт-

ного раствора альбумина и в каждую из них

доливают до объема 10 мл 0,9 % раствора хло-

рида натрия. Концентрация белка в этих раство-

рах составляет соответственно 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и

1

 г/л.

П р и м е ч а н и я . 1. Если муть начинает осе-

дать, перед измерением на фотоэлектроко-

лориметре пробирку следует тщательно

встряхнуть. 2. Перед опытом целесообразно

поставить реакцию Панди (качественная

проба на белок), и если результат реакции

оценивают 3+ или 4+ то перед количест-

венным исследованием ликвор надо развести

.изотоническим раствором хлорида натрия и

при расчете' учесть степень разведения.

3. Прямолинейная зависимость при построе-

нии калибровочного графика сохраняется

до 1 г/л, поэтому при более высоких кон-

центрациях белка лнквор следует разводить.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . Нормаль-

ное содержание белка в ликворе из желудочков

мозга 0,12—0,2 г/л, из большой цистерны —

от 0,1 до 0,22 г/л, при люмбальной пункции —

от 0,22 до 0,33 г/л.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Повыше-

ние содержания белка отмечают при нарушении

гемодинамики, воспалительных процессах, орга-

нических поражениях ЦНС и оболочек мозга.

Наиболее характерно увеличение содержания

белка для экстрамедуллярно расположенных

опухолей спинного мозга. Пониженное содержа-

ние белка в ликворе наблюдают при гидроцефа-

лии и гиперсекреции ликвора.

Белок спинномозговой жидкости состоит из

альбуминов и глобулинов, отношение глобули-

нов к альбуминам колеблется в пределах

0,2—0,3.

Унифицированный метод определения глобу-

линов высаливанием (реакция НоннеАпель-

та) (1974).  П р и н ц и п . Реакция основана на

свойстве солей в определенной концентрации

осаждать избирательно глобулины.

Р е а к т и в ы . Насыщенный раствор сульфа-

та аммония х. ч.: 85 г соли растворяют в 100 мл

воды при кипячении. Полученный раствор вы-

держивают 48 ч при комнатной температуре и

после фильтрования употребляют для поста-

новки реакции. Реакция раствора нейтральная

(рН 7,0—7,1).

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е  н е

требуется.

Х о д  и с с л е д о в а н и я . В пробирку

вносят 0,5 мл ликвора, приливают 0,5 мл реак-

тива н перемешивают (опыт). В контрольную

пробирку равного диаметра наливают 1 мл воды

(контроль).

О ц е н к а  р е з у л ь т а т о в . Регистрацию

результатов реакции производят в течение 3 мин

после смешивания ликвора с реактивом, так как

в последующем помутнение может произойти и

в нормальной спинномозговой жидкости. Срав-

нение опыта с контролем производят на темном

фоне. Для выражения результатов пользуются

системой 4 плюсов: значительное помутне-

ние 4 + . умеренное 3+, заметная опалесцен-

ция 2+, слабая опалесцеиция 1+.

И с т о ч н и к и  о ш и б о к . 1. Неточная ве-

личина рН реактива. 2. Загрязнение посуды.

3. Поздняя регистрация результатов.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Реакция

дает относительное представление о нормальном

и патологическом содержании глобулинов в

ликворе. Слабую опалесценцию иногда находят

и в нормальной спинномозговой жидкости при

103

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

небольшом повышении содержания общего

белка (больше 0,2 г/л). Наиболее достоверное

представление о содержании глобулинов и их

фракций можно получить при электрофорети-

ческом исследовании ликвора, которое целесо-

образно проводить при положительной реакции

Нонне—Апельта.

Унифицированный метод определения глобу-

линов осаждением карболовой кислотой (реак-

ция Пандн) (1974).  П р и н ц и п . Реакция

основана на осаждении глобулинов насыщен-

ным раствором карболовой кислоты.

Р е а к т и в ы . Насыщенный раствор карбо-

ловой кислоты: 100 г карболовой кислоты раст-

воряют В I л воды, встряхивают и оставляют

в термостате при 37 °С на б—8 ч. После пре-

бывания при комнатной температуре в течение

7 дней надосадочную жидкость сливают и ис-

пользуют в качестве реактива.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е  н е

требуется.

Х о д  и с с л е д о в а н и я . На часовое

стекло, помещенное на черную бумагу, наливают

1 мл реактива и по краю наслаивают 1—2 капли

ликвора.

О ц е н к а  р е з у л ь т а т о в . В случае по-

ложительного результата в месте соприкосно-

вения реактива с используемой спинномозговой

жидкостью образуется молочно-белое облачко,

переходящее в муть. Для обозначения резуль-

татов реакции Панди пользуются системой

четырех плюсов: слабая опалесценция 1+,

заметная опалесценция 2 + , умеренное помут-

нение 3 + , значительное помутнение 4 + .

П р и м е ч а н и е . Реакция Панди осаждает

такие белковые фракции, которые остаются

неосажденными в реакции Нонне—Апельта,

поэтому целесообразно ставить обе реакции

одновременно.
Унифицированная коллоидная реакция с

хлорным золотом (реакция Ланге) (1974).

П р и н ц и п . Коллоидные растворы, не изменя-

ющиеся под влиянием различных разведений

нормальной спинномозговой жидкости, в пато-

логически измененной жидкости при тех же

условиях меняют степень дисперсности в зави-

симости от разведения жидкости, при этом изме-

няется цвет, растворимость и может выпадать

осадок.

Р е а к т и в ы . 1. Хлорид натрия — 4,5 г на

1 л воды. 2. Хлорное золото — 1 % раствор в

воде. 3. Цитрат натрия (C

6

H

5

Na

3

-5H

2

O)-

I % раствор в воде. 4. Рабочий раствор хлорного

золота: к 95 мл воды приливают 1 мл 1 % хлор-

ного золота, нагревают до 90—95 °С, прибав-

ляют 5 мл 1 % раствора цитрата натрия и кипя-

тят до появления вишнево-красного окрашива-

ния. В процессе кипячения окраска раствора

меняется, переходя из синей в фиолетовую,

затем красную и вишневую. Приготовленный

раствор можно хранить в темном месте 2 мес.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е  н е

требуется.

Х о д  и с с л е д о в а н и я . Готовят разведе-

ние спинномозговой жидкости в 11 пробирках

следующим образом: в первую пробирку нали-

104

вают 0,9 мл, а в остальные по 0,5 мл 0,45%

раствора хлорида натрия. В первую пробирку

приливают 0,1 мл исследуемой спинномозговой

жидкости и после перемешивания 0,5 мл перено-

сят во вторую пробирку; эту процедуру после-

довательно проделывают с 10 пробирками, из

последней 0,5 мл смеси удаляют. Таким образом

получают серию разведений от 1:10 до 1:5120.

В 11-ю пробирку спинномозговую жидкость

не добавляют, она является контролем. Во все

пробирки добавляют по 2,5 мл рабочего раство-

ра хлорного золота. После энергичного встряхи-

вания пробирки оставляют на 16—18 ч при

комнатной температуре.

О ц е н к а  п о л у ч е н н ы х  р е з у л ь т а -

т о в . Практически результаты регистрируют^ на

следующий день после постановки реакции.

Если спинномозговая жидкость нормальная,

смесь во всех 11 пробирках остается пурпурно-

красной или в одной из первых становится пур-

пурно-фиолетовой. При патологическом ликворе

на дне пробирок появляется осадок и цвет жид-

кости меняется. Изменение цвета принято ре-

гистрировать цифрами: 0 — отсутствие измене-

ния окраски, 1 — красно-фиолетовый цвет, 2 —

фиолетовый, 3 — красно-синий, 4 — синий и си-

не-фиолетовый, 5 — светло-синий и голубой,

6 — бесцветный.

Цифровое выражение по пробиркам отрица-

тельной реакции — 00000000000, дегенератив-

ной кривой — 66666543210, воспалительной —

приблизительно 00124566530.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Если соот-

ношение белковых фракций ликвора не измене-

но, то реакция Ланге не обнаруживает отклоне-

ний от нормы, при изменении альбумино-гло-

булинового коэффициента происходит измене-

ние коллоидной реакции. Воспалительный тип

реакции Ланге наблюдается при повышении со-

держания в основном (J- и -у-глобулинов, а

дегенеративный и дегенеративно-воспалитель-

ный тип реакции бывает за счет увеличения

мелкодисперсной фракции белка — альбуминов

к снижения содержания глобулинов.

Большое значение имеют глобулиновые реак-

ции при дифференциальной диагностике орга-

нических и функциональных нарушений, напри-

мер неврастении и начинающегося прогрессив-

ного паралича или латентного сифилиса.

Реакция Фридмана.  П р и н ц и п . Метод ос-

нован на окислительно-восстановительной реаг-

цни раствора перманганата калия и осаждения

белка трихлоруксусной кислотой.

Р е а к т и в ы . 1. 1% водный раствор пер-

манганата калия, приготовленный на бидистил-

лированной воде и постоявший не менее 2—

3 нед. 2. 20 % раствор трихлоруксусной

кислоты х. ч.

Х о д  и с с л е д о в а н и я . К 1 мл ликвора

прибавляют 0,05 мл (1 каплю) реактива 1, смесь

хорошо взбалтывают. В нормальной спинномоз-

говой жидкости наблюдается яркое фиолетовое

окрашивание, которое долго сохраняется. Цвет

не меняется от прибавления 2—3 капель реак-

тива 2.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Реакция

используется для ранней диагностики менинги-

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

та. В ранней стадии менингита при смешивании

ликвора с раствором перманганата калия фиоле-

товый цвет очень быстро (в течение 1—2 мин)

переходит в красно-желтый и коричнево-желтый'

цвет. При добавлении трихлоруксусиой кислоты

(реактив 2) в случаях гнойного менингита цвет

доходит до светло-желтого или наступает полное

обесцвечивание с одновременным помутнением

и осаждением белка. Изменения цвета по типу

менингитической реакции не наступает при

других органических поражениях мозга: травме,

опухолях мозга, сифилисе мозга, рассеянном

склерозе и др., протекающих без менингеаль-

ных симптомов.

Количественное определение крови.  П р и н -

ц и п . Метод основан на сравнении уровня гемо-

глобина в периферической крови и спинномоз-

говой жидкости. М. М. Гунер использовал для

определения гемоглобина в ликворе 0,04 %

раствор аммиака, предложенный для фотомет-

рического определения гемоглобина в пери-

ферической крови.

Х о д  о п р е д е л е н и я . 5 мл геморраги-

ческой спинномозговой жидкости центрифуги-

руют 10 мин при 1500 об/мин, осадок растворяют

в 5 мл 0,04 % раствора аммиака (необязательно

брать 5 мл жидкости, важно, чтобы количество

жидкости и раствора аммиака было одинако-

вым). Кровь из пальца в количестве 20 мкл

(пипетка Сали) смешивают с 5 мл 0,04 %

раствора аммиака. Концентрацию гемоглобина

в крови, и ликворе определяют на спектрофото-

метре при длине волны 542 нм. Количество крови

рассчитывают по формуле:

раствора оксигемоглобина крови и спинномозго-

вой жидкости; V — объем жидкости.

У больных с-кровоизлиянием в головной мозг

количество крови находится в пределах 1 —

123 мкл/мл.

Определение в спинномозговой жидкости

концентрации глюкозы, хлоридов, электролитов,

активности ферментов производят так же, как

при исследовании крови; эти методы описаны в

соответствующих разделах справочного руко-

водства.

Л и т е р а т у р а . Бургман Г. П., Возная

А. Ц. Практическое руководство по исследова-

нию спинномозговой жидкости.— М., 1956;

Бургман Г. П., Лобкоеа Т. Н, Исследование

спинномозговой жидкости,— М., 1968; Гунер М.

М. Определение-количества крови в спинномоз-

говой жидкости.— Лаб. дело, 1972, № 3, с. ITS-

ISO; Калинин В. С. Методика лабораторных

клинических исследований,— М., 1932; Фрид-

ман А. П. Основы ликворологии.^ М., 1971.

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Р а з д е л 3

МЕТОДЫ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Анализ крови является одним из самых рас-

пространенных лабораторных исследований.

Наиболее широко применяется так называемый

общий клинический анализ, включающий иссле-

дование концентрации гемоглобина в 1 мкл

крови (в 1 л по системе СИ), подсчет числа

эритроцитов в 1 мкл крови, вычисление цвето-

вого показателя, подсчет числа лейкоцитов в

1 мкл крови, исследование лейкоцитарной фор-

мулы (процентного соотношения различных лей-

коцитов) и определение скорости оседания эри-

троцитов (СОЭ) в миллиметрах за 1 ч. Такие

исследования проводят всем стационарным боль-

ным и по показаниям — амбулаторным. Весьма

распространен укороченный анализ крови — так

называемая тройка (исследование количества

гемоглобина, подсчет числа лейкоцитов и опре-

деление СОЭ), который проводят при профи-

лактических осмотрах, направлении на санатор-

но-курортное лечение, диспансеризации опреде-

ленных контингентов рабочих и служащих в раз-

личных отраслях народного хозяйства.

При необходимости, особо в экстренных слу-

чаях (при подозрении на воспалительный про-

цесс, острую кровопотерю и др.), исследуют

только один показатель (подсчет числа лейкоци-

тов в крови, определение содержания гемогло-

бина).

3.1. ВЗЯТИЕ КРОВИ

Для исследования крови на общий клини-

ческий анализ кровь берут из пальца обычно

утром, желательно до физической нагрузки и

различных диагностических процедур. Некото-

рые авторы рекомендуют для избежания пище-

варительного лейкоцитоза брать кровь натощак,

хотя это представляется и нестрого обязатель-

ным.

Р е а к т и в ы . 1.5% раствор трехзамещен-

ного цитрата натрия; хранят 1—2 нед, при по-

мутнении негоден. 2. Трансформирующий раст-

вор (см. 3.2.1). 3. Изотонический раствор нат-

рия хлорида или реактив Гайема (см. 3.3.1).

4. 3—5 % раствор уксусной кислоты. 5. Спирт.

6. Йод.

О б о р у д о в а н и е . 1. Копье для укола

пальца (необходимо стерилизовать сухим жаром

в течение I ч при 160 °С или автоклавированием

в течение 30 мин при 1,5 атм или кипячением не

менее 30 мин). 2. Пробирки. 3. Пипетки вмести-

мостью 0,02 мл (стерильные). 4. Капилляры от

аппарата Панченкова (стерильные). 5. Пипетки

вместимостью 5 и 1 мл (для разводящих жид-

костей) или бюретки. 6. Предметные стекла,

шлифованные стекла.

С п о с о б  в з я т и я  к р о в и .  1 . Заранее

наливают в пробирки соответствующие реак-

тивы: для определения СОЭ — в капилляр Пан-

ченкова набирают (до метки 0,75) реактив 1;

для определения концентрации гемоглобина —

5 мл реактива 2; для подсчета числа эритро-

цитов — 4 мл реактива 3, для подсчета числа

лейкоцитов — 0,4 мл реактива 4.

2. Тщательно протерев кожу мякоти пальца

(лучше IV пальца) ватным шариком, смочен-

ным спиртом, делают укол индивидуальным сте-

рильным копьем до упора.

3. Первую выступившую каплю крови выти-

рают, из следующих капель крови, выступаю-

щих из мест укола при легком надавливании,

быстро набирают необходимое количество кро-

ви. Начинают взятие обычно с разведения крови

для определения СОЭ, так как для этого иссле-

дования требуется наибольшее количество крови.

4. Для определения СОЭ в капилляр от ап-

парата Панченкова, промытый в реактиве 1,

набирают кровь до метки 0 (100 делений) и тща-

тельно выдувают ее в пробирку с подготовлен-

ным раствором цитрата натрия (соотношение

при этом крови и реактива  4 : 1 ) , пробирку

встряхивают. Мякоть пальца вытирают сухим

ватным шариком и после надавливания соби-

рают выступившую каплю крови.

5. Для определения концентрации гемогло-

бина в сухую стерильную пипетку вместимостью

0,02 мл набирают кровь до метки, выдувают

ее в пробирку с раствором 2 и несколько раз

ополаскивают пипетку в этом растворе, запол-

няя ее и выдувая раствор. Снова вытирают

место укола и выдавливают свежую каплю

крови.

6. Для подсчета числа эритроцитов кровь

берут в количестве 0,02 мл в пипетку и выдувают

в пробирку с реактивом 3.

Применявшиеся ранее смесители (мелан-

жеры) для взятия крови с целью подсчета

106

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  24  25  26  27   ..